FISH检测题目及答案

FISH检测题目及答案考试时间：______分钟总分：______分姓名：______一、选择题（每题4分，共20分）1.以下哪种探针类型常用于检测染色体微缺失综合征？A.着丝粒探针B.重复序列探针C.单一序列探针（locus-specificprobe）D.涂染探针（paintingprobe）2.FISH技术中，常用的荧光标记物不包括以下哪一项？A.FITCB.TRITCC.DAPID.PCR3.在FISH样本制备中，蛋白酶K消化的主要目的是什么？A.去除细胞膜B.暴露靶DNAC.灭活内源性酶D.增加样本黏性4.对于HER2基因FISH检测，判读HER2基因扩增的标准是？A.HER2/CEP17比值≥2.0B.HER2信号数/细胞≥4C.HER2/CEP17比值≥2.1D.CEP17信号数/细胞≤25.以下哪项是导致FISH检测假阳性的常见原因？A.样本过度消化B.探针浓度过高C.洗脱不充分D.杂交温度过低二、名词解释（每题5分，共15分）1.荧光淬灭（FluorescenceQuenching）2.探针变性（ProbeDenaturation）3.内对照（InternalControl）三、简答题（每题10分，共30分）1.简述FISH检测样本制备中“组织切片预处理”的步骤及目的。2.分析FISH检测中假阳性的可能原因及解决措施。3.简述FISH技术在产前诊断中的主要应用及检测目标。四、案例分析题（35分）患者乳腺癌样本行HER2FISH检测，结果为：HER2基因信号数15个，CEP17（染色体17着丝粒）信号数3个。请判断HER2基因状态，说明判读依据及临床意义。试卷答案一、选择题（每题4分，共20分）1.答案：C解析思路：单一序列探针（locus-specificprobe）针对特定基因区域，常用于检测染色体微缺失综合征；着丝粒探针用于染色体计数，重复序列探针用于重复区域，涂染探针用于整条染色体检测，故C正确。2.答案：D解析思路：FITC、TRITC、DAPI是常用荧光标记物；PCR是一种扩增技术，非荧光标记物，故D不包括。3.答案：B解析思路：蛋白酶K消化用于消化蛋白质，暴露靶DNA；去除细胞膜是其他步骤，灭活内源性酶非主要目的，增加样本黏性不相关，故B正确。4.答案：C解析思路：HER2基因扩增标准为HER2/CEP17比值≥2.1；HER2信号数/细胞≥4是次要标准，但比值优先；CEP17信号数/细胞≤2不直接相关，故C正确。5.答案：B解析思路：假阳性常由探针浓度过高导致非特异性结合；样本过度消化可能损伤DNA，洗脱不充分可能背景高，杂交温度过低可能效率低，但B是直接原因，故B正确。二、名词解释（每题5分，共15分）1.答案：荧光淬灭（FluorescenceQuenching）指荧光分子在激发光或环境因素影响下，荧光强度减弱或消失的现象。解析思路：定义荧光淬灭，解释其发生机制（如光漂白、化学物质）和后果（信号无法检测）。2.答案：探针变性（ProbeDenaturation）指双链DNA探针加热解离成单链的过程，以利于与靶DNA杂交。解析思路：说明变性在FISH中的作用（使探针单链化），并提及温度控制（通常75-80°C）。3.答案：内对照（InternalControl）指已知状态的探针，用于验证实验有效性，如染色体着丝粒探针。解析思路：解释内对照目的（确保样本质量和杂交效率），举例如CEP17探针。三、简答题（每题10分，共30分）1.答案：步骤：①脱蜡（二甲苯）；②水化（梯度乙醇）；③蛋白酶K消化；④乙醇脱水。目的：去除石蜡、暴露靶DNA、增强探针渗透性，确保杂交效率。解析思路：列出步骤并解释每一步目的，强调蛋白酶K消化暴露DNA的关键作用。2.答案：可能原因：样本降解、探针浓度过高、洗脱不充分、杂交温度不当、背景干扰。解决措施：优化样本制备、调整探针浓度、严格洗脱步骤、控制杂交温度、使用适当对照。解析思路：分析假阳性原因，针对性给出解决措施，确保逻辑连贯。3.答案：应用：检测染色体非整倍体（如21三体）、微缺失综合征。检测目标：常见染色体数目异常（如T21、T18、T13）和特定基因缺失（如22q11.2）。解析思路：简述产前诊断应用，列出检测目标染色体和疾病，覆盖核心内容。四、案例分析题（35分）答案：判读结果：HER2基因扩增。判读依据：HER2/CEP17比值=15/3=5.0（≥2.1为扩增）；平均HER2信号数/细