CRISPR 技术研发工程师考试试卷及答案

CRISPR技术研发工程师考试试卷及答案CRISPR技术研发工程师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.CRISPR的全称是______。答案：ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats2.Cas9蛋白最初来源于______细菌。答案：Streptococcuspyogenes（化脓链球菌）3.sgRNA由______和______两部分组成。答案：crRNA；tracrRNA4.Cas9识别的经典PAM序列是______。答案：NGG5.CRISPR-Cas系统主要分为______大类型。答案：26.胞嘧啶碱基编辑器（CBE）通常包含______脱氨酶。答案：APOBEC7.Primeediting系统的核心组件包括nCas9、______和pegRNA。答案：逆转录酶8.CRISPR功能筛选常用的文库类型是______文库。答案：sgRNA9.Cas12a相比Cas9的显著特点是产生______末端。答案：粘性（交错）10.CRISPR技术在基因治疗中可用于______（举一例）。答案：血友病治疗二、单项选择题（共10题，每题2分）1.Cas9切割DNA的位置通常在PAM序列的（）A.5'端上游3-4bp处B.3'端下游3-4bp处C.5'端上游10bp处D.3'端下游10bp处答案：A2.常用sgRNA的向导序列长度约为（）A.10-15ntB.18-22ntC.25-30ntD.30-35nt答案：B3.下列哪种Cas蛋白不需要PAM序列？（）A.Cas9B.Cas12aC.Cas13D.CasX答案：D4.碱基编辑器无法实现的是（）A.C→TB.A→GC.片段插入D.G→A答案：C5.影响Primeediting效率的关键因素不包括（）A.pegRNA设计B.逆转录酶活性C.细胞周期D.Cas9来源答案：D6.CRISPR阴性筛选常用（）标记基因。A.荧光蛋白B.抗生素抗性C.自杀基因D.报告基因答案：C7.Cas13蛋白的作用对象是（）A.DNAB.RNAC.蛋白质D.脂质答案：B8.CRISPR-Cas系统的天然功能是（）A.基因编辑B.免疫防御C.信号转导D.蛋白质合成答案：B9.基因敲除依赖细胞的（）修复途径。A.HRB.NHEJC.BERD.MMR答案：B10.体内CRISPR递送常用载体是（）A.慢病毒B.AAVC.腺病毒D.逆转录病毒答案：B三、多项选择题（共10题，每题2分）1.CRISPR-Cas9的基本组成包括（）A.Cas9蛋白B.sgRNAC.PAM序列D.同源模板答案：AB2.碱基编辑类型包括（）A.CBEB.ABEC.CGBED.SBE答案：ABC3.提高CRISPR特异性的方法有（）A.高保真Cas9变体B.缩短sgRNA长度C.优化sgRNA设计D.抗CRISPR蛋白答案：AC4.Primeediting的步骤包括（）A.nCas9单链切割B.pegRNA结合靶位点C.逆转录合成新序列D.模板整合答案：ABCD5.常用Cas蛋白种类有（）A.Cas9B.Cas12aC.Cas13D.Cas7答案：ABC6.CRISPR的应用领域包括（）A.基因功能研究B.药物筛选C.基因治疗D.农业育种答案：ABCD7.影响sgRNA效率的因素包括（）A.GC含量B.二级结构C.脱靶可能性D.与Cas结合能力答案：ABD8.CRISPR基因治疗的挑战有（）A.递送效率B.脱靶效应C.免疫原性D.伦理问题答案：ABCD9.Cas12a相比Cas9的优势包括（）A.不同PAM序列B.粘性末端C.多靶点编辑D.更小尺寸答案：AB10.CRISPR筛选类型包括（）A.正向筛选B.反向筛选C.全基因组筛选D.靶向筛选答案：ABCD四、判断题（共10题，每题2分）1.Cas9是RNA引导的DNA内切酶。（）答案：√2.sgRNA越长特异性越高。（）答案：×3.PAM序列是sgRNA的一部分。（）答案：×4.碱基编辑器可实现单碱基替换且无双链断裂。（）答案：√5.Primeediting能插入数百碱基片段。（）答案：√6.Cas13可切割RNA。（）答案：√7.CRISPR仅适用于真核生物。（）答案：×8.基因敲入需要同源模板。（）答案：√9.Cas9nickase仅一个活性域失活。（）答案：√10.CRISPR筛选只能用慢病毒载体。（）答案：×五、简答题（共4题，每题5分）1.简述CRISPR-Cas9系统的工作原理。答案：sgRNA引导Cas9结合靶DNA，其向导序列与靶序列互补配对后，Cas9的HNH和RuvC域切割双链DNA产生断裂。细胞通过NHEJ（易致插入/缺失突变，实现敲除）或HR（需同源模板，实现敲入/替换）修复。该系统高效精准，广泛用于基因编辑。2.说明碱基编辑器的工作机制。答案：碱基编辑器将Cas9nickase与脱氨酶融合，无需双链断裂。CBE融合APOBEC将C脱氨为U，复制后变为T；ABE融合TadA将A脱氨为I，复制后变为G。通过sgRNA定位靶位点，实现精准单碱基转换，减少突变和脱靶效应，适用于遗传病治疗。3.Primeediting相比传统CRISPR的优势是什么？答案：Primeediting无需双链断裂和外源同源模板（pegRNA自带短模板），可实现精准碱基替换、插入/缺失。避免NHEJ的随机突变和HR的低效，能实现所有12种单碱基转换/颠换及小片段编辑，精准度更高，脱靶更低，应用潜力更大。4.简述CRISPR功能筛选的基本流程。答案：构建sgRNA文库，用病毒导入细胞；施加筛选压力（药物/表型选择）；收集表型改变细胞；高通量测序分析sgRNA丰度变化；富集sgRNA对应的基因即为表型相关基因。正向筛选找促进表型的基因，反向筛选找抑制表型的基因。六、讨论题（共2题，每题5分）1.讨论CRISPR基因治疗的伦理问题及应对策略。答案：伦理问题包括生殖细胞编辑的不可逆性、脱靶风险、基因增强的公平性。生殖编辑可能改变基因库，脱靶致未知突变，基因增强加剧不平等。应对策略：严格伦理审查限制生殖编辑；优化技术降脱靶；立法规范使用确保公平；加强公众教育，平衡技术与伦理。2.如何提高CRISPR