蛋白纯化工程师岗位考试试卷及答案

蛋白纯化工程师岗位考试试卷及答案填空题（共10题，每题1分）1.蛋白纯化中Ni-NTA介质结合的标签是______。2.SDS中β-巯基乙醇的作用是______。3.凝胶过滤层析分离蛋白的依据是______。4.测定蛋白浓度的经典方法之一是______法。5.蛋白等电点低于缓冲液pH时带______电荷。6.超滤技术可用于______和浓缩蛋白。7.包涵体溶解常用的变性剂是______。8.His标签蛋白洗脱常用的竞争性试剂是______。9.蛋白保存时常用的蛋白酶抑制剂是______。10.等电聚焦电泳分离蛋白的依据是______。单项选择题（共10题，每题2分）1.基于分子大小分离的层析技术是（）A.离子交换层析B.凝胶过滤层析C.亲和层析D.疏水层析2.洗脱Ni-NTA柱上His蛋白的试剂是（）A.咪唑B.氯化钠C.甘油D.Tris-HCl3.SDS中Marker的作用是（）A.测浓度B.指示进度C.测分子量D.防降解4.不能测蛋白浓度的方法是（）A.BCA法B.Bradford法C.紫外吸收法D.琼脂糖电泳法5.阳离子交换树脂结合的是（）A.正电荷蛋白B.负电荷蛋白C.中性蛋白D.疏水蛋白6.凝胶过滤中最先流出的是（）A.小分子B.大分子C.中等分子D.带电分子7.包涵体复性常用的辅助剂是（）A.尿素B.盐酸胍C.甘油D.SDS8.蛋白纯化除菌常用方法是（）A.煮沸B.0.22μm膜过滤C.高压灭菌D.紫外线照射9.亲和层析特异性取决于（）A.介质电荷B.配体与蛋白结合C.分子大小D.疏水性10.疏水层析中蛋白结合的条件是（）A.低盐B.高盐C.酸性D.碱性多项选择题（共10题，每题2分）1.蛋白纯化常用层析技术包括（）A.离子交换B.凝胶过滤C.亲和D.疏水2.蛋白浓度测定方法有（）A.BCA法B.Bradford法C.280nm紫外法D.考马斯亮蓝染色3.His标签纯化关键试剂有（）A.Ni-NTA介质B.咪唑C.甘油D.蛋白酶抑制剂4.影响离子交换层析的因素有（）A.缓冲液pHB.离子强度C.流速D.蛋白浓度5.凝胶过滤层析应用包括（）A.脱盐B.测分子量C.分离大小蛋白D.浓缩6.包涵体复性方法有（）A.稀释复性B.透析复性C.柱上复性D.超滤复性7.蛋白保存注意事项有（）A.低温B.加甘油C.避免反复冻融D.高浓度8.超滤技术优点有（）A.快速浓缩B.保活性C.分离分子量D.操作简单9.亲和层析洗脱方式有（）A.竞争性洗脱B.改变pHC.改变离子强度D.加热10.SDS用途包括（）A.测分子量B.分析纯度C.检测表达D.测浓度判断题（共10题，每题2分）1.离子交换层析仅分离带电蛋白。（）2.His标签亲和层析特异性高。（）3.凝胶过滤中分子越大洗脱体积越小。（）4.SDS可测天然分子量。（）5.包涵体蛋白需复性才有活性。（）6.超滤可分离不同分子量蛋白。（）7.BCA法不受还原剂影响。（）8.亲和介质可重复使用。（）9.等电聚焦可分离不同等电点蛋白。（）10.疏水层析高盐条件下蛋白结合更紧。（）简答题（共4题，每题5分）1.简述His标签蛋白纯化步骤。2.简述凝胶过滤层析原理及应用。3.简述包涵体复性步骤。4.简述离子交换树脂选择原则。讨论题（共2题，每题5分）1.讨论提高蛋白纯化纯度和回收率的策略。2.讨论影响蛋白复性效率的因素及优化方法。答案填空题1.His标签2.断裂二硫键3.分子大小4.BCA（或Bradford）5.负6.脱盐7.尿素8.咪唑9.PMSF10.等电点差异单项选择题1.B2.A3.C4.D5.A6.B7.C8.B9.B10.B多项选择题1.ABCD2.ABC3.AB4.ABCD5.ABC6.ABCD7.ABC8.ABCD9.ABC10.ABC判断题1.对2.对3.对4.错5.对6.对7.错8.对9.对10.对简答题1.步骤：细胞破碎取上清→上样Ni-NTA柱→低咪唑缓冲液洗杂→高咪唑洗脱目标蛋白→后续脱盐浓缩。2.原理：依分子大小分离，大分子无法进入凝胶孔隙先流出，小分子后流出。应用：脱盐、测分子量、分离大小蛋白。3.步骤：变性剂溶解包涵体→逐步去除变性剂→加辅助剂促折叠→检测活性。4.原则：蛋白等电点高于缓冲液pH选阳离子树脂，低于则选阴离子树脂，依电荷差异选择。讨论题1.策略：用特异性亲和标签；优化层析条件（pH、离子强度）；多步层析