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文档简介
色谱分析方法气相色谱法液相色谱法超临界色谱法薄层色谱法电色谱法激光色谱法光分析方法原子吸收法原子发射法紫外可见法荧光法红外法核磁法电化学分析方法电导分析法电解分析法极谱与伏安分析法库仑分析法电泳分析法电位分析法其他分析方法质谱分析法热分析法联用技术特点:内容繁多、各成体系;每类方法有其特点、内在规律、应用范围。2026/8/221第一章
光分析法导论2026/8/222第一节光分析法基本概念2026/8/223一、光分析及其特点opticalanalysisanditsfeature
二、电磁辐射的基本性质propertiesofelectromagneticradiation三、光分析法的分类classificationofopticalanalysis四、各种光分析法简介abriefintroductionofopticalanalysis
五、光分析的进展developmentofopticalanalysis2026/8/224一、光分析法及其特点
opticalanalysisanditscharacteristics
光分析法:基于电磁辐射能量与待测物质相互作用后所产生的辐射信号与物质组成及结构关系所建立起来的分析方法;电磁辐射范围:射线~无线电波所有范围;相互作用方式:发射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射等;光分析法在研究物质组成、结构表征、表面分析等方面具有其他方法不可取代的地位;2026/8/225三个基本过程:(1)能源提供能量;(2)能量与被测物之间的相互作用;(3)产生信号。基本特点:(1)所有光分析法均包含三个基本过程;(2)选择性测量,不涉及混合物分离(不同于色谱分析);(3)涉及大量光学元器件。2026/8/226二、电磁辐射的基本性质
basic
propertiesofelectromagneticradiation
电磁辐射(电磁波):以接近光速(真空中为光速)传播的能量;
c=λν=ν/σ
E=hν=hc/λc:光速;λ:波长;ν:频率;σ:波数;电子伏特:eVE:能量;h:普朗克常数电磁辐射具有波动性和微粒性;2026/8/227辐射能的特性:
(1)吸收物质选择性吸收特定频率的辐射能,并从低能级跃迁到高能级;(2)
发射将吸收的能量以光的形式释放出;(3)散射丁铎尔散射和分子散射;(4)折射折射是光在两种介质中的传播速度不同;(5)反射(6)干涉干涉现象;(7)衍射光绕过物体而弯曲地向他后面传播的现象;(8)偏振只在一个固定方向有振动的光称为平面偏振光。2026/8/2282026/8/2292026/8/2210三、光分析分类
typeof
opticalanalysis
光谱法——基于物质与辐射能作用时,分子发生能级跃迁而产生的发射、吸收或散射的波长或强度进行分析的方法;原子光谱、分子光谱、非光谱法
原子光谱(线性光谱):最常见的三种基于原子外层电子跃迁的原子吸收光谱(AAS);原子发射光谱(AES)、原子荧光光谱(AFS);
基于原子内层电子跃迁的X射线荧光光谱(XFS);基于原子核与射线作用的穆斯堡谱;2026/8/2211
分子光谱(带状光谱):
基于分子中电子能级、振-转能级跃迁;紫外光谱法(UV);红外光谱法(IR);分子荧光光谱法(MFS);分子磷光光谱法(MPS);核磁共振与顺磁共振波谱(N);
非光谱法:
不涉及能级跃迁,物质与辐射作用时,仅改变传播方向等物理性质;偏振法、干涉法、旋光法等;
2026/8/2212光分析法光谱分析法非光谱分析法原子光谱分析法分子光谱分析法原子吸收光谱原子发射光谱原子荧光光谱X射线荧光光谱折射法圆二色性法X射线衍射法干涉法旋光法紫外光谱法红外光谱法分子荧光光谱法分子磷光光谱法核磁共振波谱法2026/8/2213光谱分析法吸收光谱法发射光谱法原子光谱法分子光谱法原子发射原子吸收原子荧光X射线荧光原子吸收紫外可见红外可见核磁共振紫外可见红外可见分子荧光分子磷光核磁共振化学发光原子发射原子荧光分子荧光分子磷光X射线荧光化学发光2026/8/2214四、各种光分析法简介
abriefintroductionofopticalanalysis
以火焰、电弧、等离子炬等作为光源,使气态原子的外层电子受激发射出特征光谱进行定量分析的方法。
利用特殊光源发射出待测元素的共振线,并将溶液中离子转变成气态原子后,测定气态原子对共振线吸收而进行的定量分析方法。2026/8/2215
气态原子吸收特征波长的辐射后,外层电子从基态或低能态跃迁到高能态,在10-8s后跃回基态或低能态时,发射出与吸收波长相同或不同的荧光辐射,在与光源成90度的方向上,测定荧光强度进行定量分析的方法。
某些物质被紫外光照射激发后,在回到基态的过程中发射出比原激发波长更长的荧光,通过测量荧光强度进行定量分析的方法。
2026/8/22166.X射线荧光分析法
原子受高能辐射,其内层电子发生能级跃迁,发射出特征X射线(X射线荧光),测定其强度可进行定量分析。7.化学发光分析法利用化学反应提供能量,使待测分子被激发,返回基态时发出一定波长的光,依据其强度与待测物浓度之间的线性关系进行定量分析的方法。5.分子磷光分析法
处于第一最低单重激发态分子以无辐射弛豫方式进入第一三重激发态,再跃迁返回基态发出磷光。测定磷光强度进行定量分析的方法。2026/8/2217
利用溶液中分子吸收紫外和可见光产生跃迁所记录的吸收光谱图,可进行化合物结构分析,根据最大吸收波长强度变化可进行定量分析。
利用分子中基团吸收红外光产生的振动-转动吸收光谱进行定量和有机化合物结构分析的方法。
在外磁场的作用下,核自旋磁矩与磁场相互作用而裂分为能量不同的核磁能级,吸收射频辐射后产生能级跃迁,根据吸收光谱可进行有机化合物结构分析。
8.紫外吸收光谱分析法2026/8/2218
在外磁场的作用下,电子的自旋磁矩与磁场相互作用而裂分为磁量子数不同的磁能级,吸收微波辐射后产生能级跃迁,根据吸收光谱可进行结构分析。
12.旋光法
溶液的旋光性与分子的非对称结构有密切关系,可利用旋光法研究某些天然产物及配合物的立体化学问题,旋光计测定糖的含量。
X射线衍射:研究晶体结构,不同晶体具有不同衍射图。电子衍射:电子衍射是透射电子显微镜的基础,研究物质的内部组织结构。2026/8/2219五、光分析方法的进展
developmentofopticalanalysis
1.采用新光源,提高灵敏度级联光源:电感耦合等离子体-辉光放电;激光蒸发-微波等离子体2.
联用技术电感耦合高频等离子体(ICP)—质谱激光质谱:灵敏度达10-20
g3.新材料光导纤维传导,损耗少;抗干扰能力强;2026/8/2220
4.交叉
电致发光分析;光导纤维电化学传感器5.检测器的发展
电荷耦合阵列检测器光谱范围宽、量子效率高、线性范围宽、多道同时数据采集、三维谱图,将取代光电倍增管;光二极激光器代替空心阴极灯,使原子吸收可进行多元素同时测定;2026/8/2221三种光分析法测量过程示意图
2026/8/2222原子光谱与分子光谱atomspectrumandmolecularspectrum第二节2026/8/2223
一、原子光谱原子外层有一个电子时,其能级可由四个量子数决定:主量子数n;角量子数l;磁量子数m;自旋量子数s;原子外层有多个电子时,其运动状态用总角量子数L;总自旋量子数S;内量子数J
描述;2026/8/2224总角量子数L=∑l
外层价电子角量子数的矢量和,(2L+1)个
L=|l
1+l2|,|l
1+l2-1|,······,|l
1-l2|
分别用S,P,D,F······,表示:
L=0,1,2,3,······,
例:碳原子,基态的电子层结构(1s)2(2s)2(2p)2,
两个外层2p电子:l
1=
l2=1;
L=2,1,0;S=0,±12026/8/2225总自旋量子数:
S=∑s;外层价电子自旋量子数的矢量和,(2S+1)个
S=0,±1,±2,······,±S
或=0,
±1/2,3/2,······,±S例:碳原子,基态的电子层结构(1s)2(2s)2(2p)2,
两个外层2p电子:S=0,±1;3个不同值;
L与S之间存在相互作用;可裂分产生(2S+1)个能级;这就是原子光谱产生光谱多重线的原因,用M表示,称为谱线的多重性;2026/8/2226例:钠原子,一个外层电子,
S=1/2;因此:M=2(S)+1=2;双重线;
碱土金属:两个外层电子,自旋方向相同时,S=1/2+1/2=1,M=3;三重线;自旋方向相反时,S=1/2-1/2=0,M=1;单重线;2026/8/2227内量子数:
内量子数J取决于总角量子数L和总自旋量子数S的矢量和:
J=(L+S),(L+S-1),······,(L-S)若L≥S;其数值共(2S+1)个;若L<S;其数值共(2L+1)个;
例:L=2,S=1,则J有三个值,J=3,2,1;
L=0,S=1/2;则J仅有一个值1/2;
J值称光谱支项;2026/8/2228原子的能级通常用光谱项符号表示:nMLJ
n:主量子数;M:谱线多重性符号;
L:总角量子数;
J
:内量子数钠原子的光谱项符号32S1/2;表示钠原子的电子处于n=3,M=2(S=
1/2),L=0,
J=
1/2的能级状态(基态能级);2026/8/2229电子能级跃迁的选择定则
一条谱线是原子的外层电子在两个能级之间的跃迁产生的,可用两个光谱项符号表示着种跃迁或跃迁谱线:例钠原子的双重线
Na5889.96;32S1/2—32P3/2;Na5895.93;32S1/2—32P1/2;波数 cm-12026/8/2230电子能级跃迁的选择定则根据量子力学原理,电子的跃迁不能在任意两个能级之间进行;必须遵循一定的“选择定则”:(1)主量子数的变化Δn为整数,包括零;(2)总角量子数的变化ΔL=±1;(3)内量子数的变化ΔJ=0,
±1;但是当J=0时,ΔJ=0的跃迁被禁阻;(4)总自旋量子数的变化ΔS=0
,即不同多重性状态之间的跃迁被禁阻;(基态与激发态中电子的自旋方向相同)2026/8/22312.能级图
元素的光谱线系常用能级图来表示。最上面的是光谱项符号;最下面的横线表示基态;上面的表示激发态;可以产生的跃迁用线连接;
线系:由各种高能级跃迁到同一低能级时发射的一系列光谱线;2026/8/22323.共振线
元素由基态到第一激发态的跃迁最易发生,需要的能量最低,产生的谱线也最强,该谱线称为共振线,也称为该元素的特征谱线;2026/8/2233
二、分子光谱原子光谱为线状光谱,分子光谱为带状光谱;为什么分子光谱为带状光谱?原子光谱图分子光谱图2026/8/2234E=Ee+Ev+Er+En+Et+Ei分子中原子的核能:En分子的平移能:Et电子运动能:Ee原子间相对振动能:Ev分子转动能:Er基团间的内旋能:Ei在一般化学反应中,En不变;Et、Ei较小;
E=Ee+Ev+Er分子产生跃迁所吸收能量的辐射频率:
ν=ΔEe/h+ΔEv/h+ΔEr/h2026/8/2235分子中价电子位于自旋成对的单重基态S0分子轨道上,当电子被激发到高能级上时,若激发态与基态中的电子自旋方向相反,称为单重激发态,以S1、S2、······表示;反之,称为三重激发态,以T1、T2、······表示;单重态分子具有抗磁性;三重态分子具有顺磁性;跃迁致单重激发态的几率大,寿命长;2026/8/2236分子光谱复杂,电子跃迁时带有振动和转动能级跃迁;分子的紫外-可见吸收光谱是由纯电子跃迁引起的,故又称电子光谱,谱带比较宽;分子的红外吸收光谱是由于分子中基团的振动和转动能级跃迁引起的,故也称振转光谱;分子的荧光光谱是在紫外或可见光照射下,电子跃迁至单重激发态,并以无辐射弛豫方式回到第一单重激发态的最低振动能级,再跃回基态或基态中的其他振动能级所发出的光;分子的磷光是指处于第一最低单重激发态的分子以无辐射弛豫方式回到第一最低三重激发态,再跃迁回到基态所发出的光;2026/8/2237光谱分析技术光学导论光谱:复色光经色散系统分光后,按波长(或频率)的大小依次排列的图像光学导论基于测量物质的光谱而建立起来的分析方法称为光谱分析法吸收光谱发射光谱分子光谱原子光谱光学导论吸收光谱
颜色的差异——定性颜色的深浅——定量光学导论发射光谱化学发光热/电激发发光光致发光光学导论光谱分析法的准确分类分子光谱
吸收(根据吸收波段不同细分)
紫外-可见
红外
发射(根据发射原理不同细分)光致发光:荧光、磷光
化学发光光学导论光谱分析法的准确分类原子光谱
吸收
发射(根据发射原理不同细分)热/电激发发光:发射光致发光:荧光光学导论光谱分析≠光学分析!光学分析=光谱分析+非光谱分析
非光谱分析:基于物质与辐射的相互作用,测量辐射的某些性质,如折射、散射、干涉、衍射和偏振等变化的分析方法光学导论光谱分析与非光谱分析的区别光谱分析涉及“颜色”“谱”“能量”的变化非光谱分析涉及光的传播方向等物理性质的变化,不涉及“谱”光学导论光的本质:电磁辐射、波粒二象性波波长λ、频率γ、速度υυ=γλc
(真空中的υ)=3×108m·s-1波长λ:相邻两个波峰或波谷间的直线距离单位可以是nm、μm、cm、m频率γ:在1秒时间内经过某点的波数(即每秒内振动的次数)单位Hz(s-1)周期T:频率的倒数;波数σ:波长的倒数光学导论
射线x射线紫外光红外光微波无线电波10-2nm10nm102nm104nm0.1cm10cm103cm105cm可见光电磁波谱:将电磁辐射按照波长或频率的大小顺序排列起来即称为电磁波谱光学导论波长λ5×10-3~0.10.1~1010~200200~400名称γ射线x射线远紫外光近紫外光波长λ400~750750~1.0×1061.0×106~1.0×1091.0×109~1.0×1012名称可见光红外光微波无线电波光学导论粒光子:能量E、普朗克常数h、电子伏特eVh=6.626×10-34J·s1J=6.241×1018eVE=hγ=hc/λ当物质所吸收的电磁辐射能量能够满足该物质由低能态(基态)跃迁至高能态(激发态),将产生吸收光谱当物质通过电、热或光等激发至激发态,再从激发态过渡到低能态或基态时,将产生发射光谱吸收光谱发射光谱光学导论某分子的外层价电子从基态跃迁到激发态需要20eV,请问该分子吸收光的波长?解:1eV=1.602×10-19J根据公式E=hc/λ则λ=hc/E=(6.626×10-34×3×108)/(20×1.602×10-19)=0.62×10-7m=62nm紫外-可见分光光度法什么是紫外-可见光谱远紫外光区:10~200nm近紫外光区:200~400nm
UVC:200~280nmUVB:280~320nmUVA:320~400nm可见光区:400~780nm红外光区:780nm~1mm什么是紫外-可见分光光度法基于分子外层价电子跃迁产生的在紫外-可见光谱区的吸收光谱进行分析的一种常用的光谱分析方法。ultravioletandvisible(UV-vis)spectrophotometry基本原理分子的三种运动状态对应有一定的能级。即在分子中存在着:
电子能级振动能级转动能级这三种能级都是量子化的分子能量的变化:
E=
Ee+
Ev+
Er
Ee>
Ev>
Er基本原理基本原理分子吸收光(电磁波)后产生的能量的变化:远红外光谱(转动光谱)中红外光谱(振动光谱)紫外-可见光谱(电子光谱)基本原理带状光谱发生电子跃迁时必然要发生振动能级和转动能级的跃迁,这使得紫外-可见吸收光谱呈现带状典型的紫外-可见吸收光谱图吸收峰最大吸收波长(λmax)基本原理价电子σ电子→饱和的单键
π电子→不饱和的双键、三键n电子→孤对电子分子中分子轨道有成键轨道与反键轨道:它们的能级高低为:σ<π<n<π*<σ*
*
*n非键轨道反键轨道反键轨道成键轨道成键轨道
→
*n→
*
→
*n→
*>>>COHnpsH
1.σ→σ*跃迁:饱和烃(C-C,C-H)能量很高,λ<150nm2.n→σ*跃迁:含杂原子饱和基团(-OH,-NH2)能量较大,λ150~250nm3.π→π*跃迁:不饱和基团(C=C,C≡C)能量较小,λ~200nm共轭体系,E更小,λ>200nm4.n→π*跃迁:含杂原子不饱和基团(C≡N,C=O)能量最小,λ200~400nm基本原理
影响紫外-可见吸收光谱的因素1共轭效应共轭体系越长,π与π*的能量差越小,红移效应和增色效应越明显。
2立体化学效应空间位阻、跨环效应3溶剂的影响溶剂效应4体系pH的影响Tips:由于溶剂对电子光谱图影响很大,因此,在吸收光谱图上或数据表中必须注明所用的溶剂。与已知化合物紫外光谱作对照时也应注明所用的溶剂是否相同。在进行紫外光谱法分析时,必须正确选择溶剂。朗伯-比尔定律——定量分析的基础当强度为I0的一定波长的单色入射光束通过装有均匀待测物的溶液介质时,该光束将被部分吸收Ia,部分反射Ir,余下的则通过待测物的溶液It,即有:I0=Ia+It+Ir朗伯-比尔定律如果吸收介质是溶液(测定中一般是溶液),式中反射光强度主要与器皿的性质及溶液的性质有关,在相同的测定条件下,这些因素是固定不变的,并且反射光强度一般很小。所以可忽略不记,这样:I0=Ia+It朗伯-比尔定律透光率——透光率表示透过光强度与入射光强度的比值,用T来表示,计算式为:T=It/I0T常用百分比(%)表示。吸光度——透光率的倒数的对数叫吸光度。用A表示:A=-lgT=lg(I0/It)朗伯-比尔定律当用一束强度为I0的单色光垂直通过厚度为b、吸光物质浓度为c的溶液时,溶液的吸光度正比于溶液的厚度b和溶液中吸光物质的浓度c的乘积。朗伯-比尔定律IoItbaA=lg(I0/It)
=Kbc朗伯-比尔定律吸光系数:当溶液浓度c的单位为g/L,溶液液层厚度b的单位为cm时,K叫“吸光系数”,用a表示,其单位为L·g-1·cm-1摩尔吸光系数:当溶液浓度c的单位为mol/L,液层厚度b的单位为cm时,K叫“摩尔吸光系数”,用ε表示,其单位为L·mol-1·cm-1
ε=aM
(M为吸光物质的分子量)紫外-可见分光光度计岛津UV-2450工作原理基仪器结构框图光源碘钨灯氘灯单色器测量池参比池样品池光电倍增管数据处理和仪器控制光源样品池单色器检测器数据处理仪器控制紫外-可见分光光度计紫外-可见分光光度计单光束分光光度计双光束分光光度计紫外-可见分光光度计吸收池的材料玻璃360nm2.25mm紫外-可见分光光度计石英200nm2.5mm紫外-可见分光光度计吸收池的形状可拆卸圆形测量池两面透光圆形测量池两面透光1cm长方形测量池两面透光气体测量池两面透光微量测量池两面透光流动测量池两面透光紫外-可见分光光度计思考题为什么紫外可见分光光度计的最大吸收值只能到3或者5,超过该值便会造成数据溢出?
生物分子的紫外-可见吸收光谱糖紫外可见光谱在糖的分析中,主要作定量检测。最大吸收波长为218nm,多糖最大吸收波长为206nm。○
生物分子的紫外-可见吸收光谱脂脂肪○○230~240nm,于有机溶剂中(如乙醇、正己烷等)类脂维生素A326nm于乙醇番茄红素番茄红素在溶剂正己烷中的谱图番茄红素在溶剂石油醚中的谱图生物分子的紫外-可见吸收光谱
生物分子的紫外-可见吸收光谱蛋白质Proteinsinsolutionabsorbultravioletlightwithabsorbancemaximaat280and200nm.Aminoacidswitharomaticringsaretheprimaryreasonfortheabsorbancepeakat280nm.Peptidebondsareprimarilyresponsibleforthepeakat200nm.酪氨酸
色氨酸
苯丙氨酸生物分子的紫外-可见吸收光谱核酸嘌呤和嘧啶在250~280nm有强的吸收作用,综合起来在260nm吸收值最大。Tips:1.吸收强度:单核苷酸>单链DNA>双链DNA(增色效应、减色效应)2.A260/A280=~,DNA较纯A260/A280
,DNA样品中含有蛋白质A260/A280,DNA样品中含有RNA微生物的紫外-可见吸收光谱600nm测细菌等微生物的浊度,用于估计细菌的生长情况。比如,得到的OD600的数值如果在之间,表明细菌处于旺盛生长的对数生长期,OD600>3表明细菌已经饱和等。核酸蛋白测定仪EppendorfBioPhotometerplus
ELISA原理图
①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)
②酶标记的抗原或抗体(标记物)③酶作用的底物(显色剂)酶标仪酶标仪TecanInfinite®200Pro多功能酶标仪ELISA酶底物显色反应
测定波长
辣根过氧化物酶邻苯二胺
四甲替联苯胺
氨基水杨酸
邻联苯甲胺
2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐橘红色
黄色
棕色
兰色
蓝绿色492460449
425
642
碱性磷酸酯酶4-硝基酚磷酸盐(PNP)
萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐黄色
红色400
500葡萄糖氧化酶ABTS+HRP+葡萄糖
葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰黄色
深蓝色405420β-D-半乳糖苷酶甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG)
硝基酚半乳糖苷(ONPG)荧光
黄色360,450
420分子荧光光谱什么是荧光光谱某些物质经紫外-可见光照射后,能立即放出能量较低(亦即波长较长)的光——光致发光。当照射停止后,如化合物的发射在10-9秒钟内停止,则称荧光(fluorescence);超过此限度即称为磷光(phosphorescence)。什么是荧光光谱基本原理Ee0Ev0Ev1Ev2Ev3Ev4Ee1Ee2荧光发射:当分子处于单重激发态的最低振动能层时,去活化的一种形式是以10-9~10-7s左右的短时间内发射光子返回基态,这一过程称为荧光发射。激发光谱激发光谱固定荧光发射波长,扫描激发波长荧光激发光谱与紫外-可见吸收光谱类似,Why?横坐标是入射光(激发光)的波长,纵坐标是发射光(荧光)的强度发射光谱固定激发光波长,扫描发射波长横坐标是发射光(荧光)的波长,纵坐标是发射光(荧光)的强度发射光谱(荧光光谱)2.三维荧光光谱IF
∝f(λex、λem)蒽的激发光谱固定发射波长、扫描激发波长IF
∝f(λex、λem)蒽的发射光谱固定激发波长、扫描发射波长蒽的三维等高线光谱图蒽的三维等荧光强度光谱荧光量子产率(荧光效率)化合物
F0.10.290.460.600.52kF为荧光发射过程的速率常数,取决于荧光物质的分子结构;
Ki为其他过程(如振动弛豫等)的速率常数总和,主要取决于化学环境,同时也与荧光物质的分子结构有关。荧光与有机化合物的结构1.π*→π是有机化合物产生荧光的主要跃迁类型。2.产生荧光的有机物质,都含有共轭双键体系,共轭体系越大,荧光越容易产生。产生荧光的条件荧光物质的刚性和平面性增加,有利于荧光发射。3.刚性平面结构荧光与有机化合物的结构荧光强度与浓度的关系荧光的淬灭荧光淬灭:荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低或消失的现象。荧光淬灭剂:这些溶剂分子或其它溶质分子称为荧光淬灭剂(如卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基/羰基/羧基化合物等)。荧光能量共振转移(FRET)能量共振转移(FRET)FluorescenceResonanceEnergyTransfer相互作用的研究荧光分光光度计光源氙灯激发单色器样品池光电倍增管数据处理仪器控制光源样品池激发单色器检测器数据处理仪器控制发射单色器发射单色器问题:荧光分光光度计与紫外-可见分光光度计有何异同点?紫外-可见分光光度计:光源样品池单色器检测器数据处理仪器控制荧光(磷光)分光光度计:光源样品池激发单色器检测器数据处理仪器控制发射单色器荧光分光光度计荧光分光光度计HitachiF-7000样品池1.样品池的材料:与紫外-可见分光光度计的吸收池一样2.吸收池的形状:紫外-可见分光光度计的吸收池两面透光荧光分光光度计的样品池四面透光问题:紫外-可见分光光度计的吸收池与荧光分光光度计的样品池有什么区别?荧光分光光度计紫外-可见分光光度计
测量池(吸收池)荧光分光光度计样品池I0ItI0It
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