注射用重组人生长激素标准AS20010006

PAGEPAGE4注射用重组人生长激素SomatropinforInjection（商品名：SAIZEN®8mgclickeasyTM） JS20020076本品为重组人生长激素冻干制剂与所附带注射用溶剂。含重组人生长激素应为标示量的97.5%～115.0%。冻干制剂:【容器外观】应为具橡胶塞与铝箔封边的密闭无色玻璃瓶。【性状】本品为白色或类白色冻干块状物或粉末。【鉴别】（1）在相关蛋白检查项下（IEF方法）记录的电泳谱图中，供试品主带的迁移位置应与对照品的迁移位置相同。（2）在相关蛋白检查项下（RP－HPLC方法）记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品的保留时间一致。（3）在含量测定项下(SE-HPLC方法)记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品的保留时间一致。（4）蔗糖鉴别按照高效液相色谱法试验。用SupelcosilLC-NH2柱；流动相为68%乙腈水溶液;流速为1ml/min；柱温40℃；检测器为RID－10A。取本品冻干粉末，每瓶加水1ml溶解,取此液适量，用流动相稀释10倍作为供试品溶液；另取蔗糖对照品，用流动相制成3mg/ml溶液作为对照品溶液。取对照品溶液和供试品溶液各10μl；分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品峰的保留时间应与蔗糖对照品的保留时间一致。【检查】 酸碱度 取本品，每瓶用所附带的注射用溶剂溶解后，依法检查（中国药典2000年版二部附录VIH），pH值应为6.5～8.5。溶解时间 取本品，每瓶以所附带的注射用溶剂溶解，溶解时间不得过2分钟。溶液的澄清度 取本品，每瓶用所附带的注射用溶剂溶解后，溶液应澄清；如显混浊，与3号浊度标准液比较，不得更浓（中国药典2000年版二部附录IXB）。高分子量蛋白在含量测定项下记录的色谱图中，以峰面积按归一化法计算，高分子量蛋白含量不得过6.0%。相关蛋白 （IEF方法） 取本品，用0.025mol/L的磷酸盐缓冲液[0.063mol/L的磷酸盐缓冲液（pH7.0）－水＝1:1.5]制成含重组人生长激素为2mg/ml的溶液作为供试品溶液；另取供试品溶液0.5ml，加0.025mol/L的磷酸盐缓冲液至10ml，作为对照溶液。取供试品溶液和对照溶液，照等电聚焦（IEF）电泳法检查，供试品应在等电点约为5处有一主带；在等电点为4.8处有一弱带；除此两带，任一杂质带的颜色不得深于对照溶液主带的颜色（5%）。相关蛋白 （RP－HPLC方法）取本品，用0.05mol/LTris－盐酸缓冲液（pH7.5）制成含重组人生长激素为2mg/ml的溶液作为供试品溶液；另取重组人生长激素对照品，同法制备作为对照品溶液；按照高效液相色谱法检查，以丁基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10um）；0.05mol/LTris-盐酸缓冲液（pH7.5）－正丙醇（71:29）为流动相，调节流动相中正丙醇比例使人生长激素主峰保留时间为30～36分钟；流速为0.5ml/min；柱温为45℃；检测波长220nm。取系统适用性试验用样品溶液（取重组人生长激素对照品，用上述Tris-盐酸缓冲液制成每1ml中含2mg的溶液，过滤除菌，室温下放置24小时。）20μl注入色谱仪，人生长激素主峰与脱氨的人生长激素峰之间的分离度应不小于1.0,人生长激素峰的拖尾因子应为0.9～1.8。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积按归一化法计算，总相关蛋白含量不得过13%。不溶性微粒 取本品，用所附带的注射用溶剂溶解后，依法检查（中国药典2000年版二部附录IXC），大于等于10μm的微粒不得过6000个/瓶；大于等于25symbol109\f"Symbol"\s12m的微粒不得过600个/瓶。水分 取本品,按照[中国药典2000年版二部附录VШM第一法(B)]测定,含水分不得过3.0%。无菌 取本品，用所附带的注射用溶剂溶解后，经滤膜滤过后，依法检查（中国生物制品规程2000年版），应符合规定。细菌内毒素 取本品，用所附带的注射用溶剂溶解后，依法检查（中国药典2000年版二部附录XIE），每1mg人生长激素含细菌内毒素不得过5EU。装量 按照（中国药典2000年版二部附录IB）检查，每瓶装量应为64～78mg，超出平均值10％的粉针不得超出2瓶，不得有1瓶超出平均值20％。【含量测定】 照高效液相色谱法（SE－HPLC）测定。色谱条件与系统适用性试验 以适合分离分子量为5000～60000球状蛋白的色谱用亲水硅胶为填充剂（如ZorbaxGF250S和TSKG2000SW、3000SW柱）；以异丙醇-0.063mol/L的磷酸盐缓冲液（无水磷酸氢二钠5.18g，磷酸二氢钠.H2O3.65g，加水950ml，用85％磷酸滴调pH7.0，加水至1000ml）（3:97）为流动相；流速为0.6ml/min；检测波长为214nm。以人生长激素单体和二聚体之间的峰谷高与二聚体的峰高之比作为分离度，分离度应不大于0.4。系统适用性测定用样品溶液的制备 取人生长激素单体与二聚体混合物对照品用0.025mol/L的磷酸盐缓冲液（pH7.0）制成每1ml含1.0mg的溶液。测定法 取重组人生长激素对照品，用0.025mol/L的磷酸盐缓冲液（pH7.0）制成每1ml含1.0mg的溶液，取20μl注入色谱仪，记录色谱图；另取本品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得.附带溶剂（bacteriostaticsolvent） 本品为含间甲酚的无菌注射用溶剂.【容器外观】 应为具橡胶塞和橡胶隔膜与铝箔封边的密闭无色玻璃药筒。【性状】 本品为无色澄明液体。【鉴别】 在间甲酚含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间应与对照品的保留时间一致。【检查】 pH值 取本品，依法检查（中国药典2000年版二部附录VIH），pH值应为4.5~8.5。溶液的澄清度与颜色 取本品，依法检查（中国药典2000年版二部附录XIB），应澄清无色，如显浑浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与B9标准比色液比较（欧洲药典2000年版2.2.2），不得更深。可抽取体积 取本品，依法检查（欧洲药典2000年版2.9.17），每支可抽取体积均应为1.47ml~1.57ml。细菌内毒素 取本品，依法检查（中国药典2000年版二部附录XIE），每1ml不得过0.5EU。【间甲酚含量测定】 取本品作为供试品溶液，另取间甲酚对照品适量，用水溶解，制成浓度为每1ml中含3mg的溶液最为对照品溶液；照高效液相色谱法（中国药典2000年版二部附录VD）测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5~10μm），0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml，加水800ml，用乙醇胺调pH至2.3，加水至1000ml）-乙腈（74:26）为流动相；流速为1.0ml/min；柱温为40℃；检测波长为270nm。分别取对照品溶液和供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，每1ml含间甲酚应为2.5~3.5mg。【规格】 8mg【生产单位及生产厂】 意大利雪兰诺药厂【复核单位】 中国药品生物制品检定所PAGE6注射用重组人生长激素质量标准复核说明本品由意大利雪兰诺药厂生产，雪兰诺新加坡公司北京办事处申报，商品名为思真（SAIZEN®8mgclickeasyTM）。申请编号为HS20010006；复核编号为F2002099。现说明如下：冻干制剂:【容器外观】 同企业标准。【性状】 同企业标准。【鉴别】 （1）、（2）、（3）、（4）同企业标准。【检查】 酸碱度同企业标准。 溶解时间 同企业标准。溶液的澄清度 同企业标准。高分子量蛋白 同企业标准与欧洲药典2000年版。相关蛋白 （IEF方法） 同企业标准与欧洲药典2000年版。 (RP-HPLC方法) 同企业标准与欧洲药典2000年版。不溶性微粒同企业标准。水分 同企业标准。无菌 按（中国生物制品规程2000年版）检查，标准规定同企业标准。细菌内毒素 按（中国药典2000年版二部附录XIE）检查，标准规定同企业标准。装量 按（中国药典2000年版二部附录IB）检查，标准规定按企业标准。【含量测定】 同企业标准与欧洲药典2000年版。企业标准规定每瓶应为7.8～9.2mg/ml，标示量按8mg/瓶计，应为标示量的97.5%～115.0%。

附带溶剂（bacteriostaticsolvent）【容器外观】 同企业标准。为具橡胶塞和橡胶隔膜与铝箔封边的密闭无色玻璃药筒。

【性状】 同企业标准。

【鉴别】 同企业标准。

【检查】pH值 同企业标准。 溶液的澄清度与颜色 同企业标准。 可抽取体积同企业标准亦同按（欧洲药典2000版2.9.17）。 细菌内毒素 按（中国药典2000年版二部附录XIE）检查，标准规定同企业标准。

无菌与不溶性微粒由于粉针剂的这两项检查都