中线（NUT）癌类器官标准化建立与应用专家共识（2026 版）

中线（NUT）癌类器官标准化建立与应用专家共识（2026版）摘要：伴睾丸核蛋白（NUT）基因重排的中线癌（NUT癌）是一种罕见但高度侵袭性的恶性肿瘤，患者预后极差，目前尚缺乏有效的治疗手段。患者来源类器官技术能够在体外长期维持肿瘤的分子病理特征，为解析NUT癌的发病机制、筛选靶向药物、预测治疗反应以及实现个体化精准医疗提供了难以替代的实验平台。为规范NUT癌类器官技术从基础研究到临床转化的全链条应用，国际类器官研究学会牵头，联合国内多学科专家团队，以临床实际需求为导向，结合国内外研究进展及临床实践，共同制定本共识。本共识系统规范了类器官的建立原则与质控标准，并进一步明确了其在基础研究及临床应用中的具体策略，旨在通过构建全链条标准化体系，提升整体诊疗水平，改善患者预后。关键词：NUT癌；类器官；技术规范；专家共识NUT癌是由NUTM1基因重排驱动的高度侵袭性罕见肿瘤，可发生于各年龄段，以青少年及中青年为主，中位生存期仅6~9个月[1]。该病临床认知不足，误诊率高，且治疗面临严峻困境：常规化疗应答短暂且易耐药，BET抑制剂客观缓解率有限、不良反应显著，迄今尚无特异性靶向药物获批；同时，用于机制研究与药物筛选的可靠疾病模型严重匮乏，严重阻碍了新药研发与临床转化的推进[2-3]。患者来源类器官（Patient-derived

organoids,PDOs）可在体外三维培养中保留原发肿瘤的组织学、遗传学及功能特征，为NUT癌等罕见肿瘤提供了突破性研究平台。然而，目前该模型在建立流程、质量控制及临床转化应用方面尚无统一规范，亟需标准引导。为此，本共识由多学科专家联合制定，旨在规范NUT癌类器官的标准化建立、质量控制和临床转化路径。目标读者涵盖临床肿瘤科、病理科医师及科研人员，预期应用于模型规范建立、药物敏感性检测指导个体化治疗及新药临床前评价，以期推动NUT癌精准医学实践。1共识制订方法1.1文献检索以“NUT癌”“中线癌”与“类器官”“器官样”“三维培养”等作为中文检索词，以“NUT

carcinoma”“NUT

middle

carcinoma”“organoid”“organoids”“three-dimensional

culture”等作为英文检索词，在PubMed、Web

of

Science、万方数据库、中国知网等数据库进行系统检索。纳入标准为NUT癌类器官相关的原始研究及综述，排除重复文献、述评、编辑点评、来信及新闻报道等。检索时限为各数据库建库至2026年3月31日。1.2共识形成方法本共识采用推荐分级的评价、制订与评估（Grading

of

Recommendations

Assessment,

Development,

and

Evaluation,

GRADE）系统对证据质量和推荐强度进行分级。证据质量分为A、B、C、D四个等级（A级：非常确信观察值接近真实值；B级：对观察值有中等信心，观察值可能接近真实值，但可能存在本质差异；C级：观察值确信程度有限，观察值可能与真实值存在本质不同；D级：对观察值几乎没有信心，观察值很可能与真实值存在本质差异）[4]。由执笔专家确定共识核心问题并撰写提纲，提交由23名专家组成的核心专家组共同讨论、表决、提出修改意见并通过。对初步形成的推荐建议进行专家函询，投票设置“同意”“不确定”“不同意”3

个选项，专家可对每条推荐建议提出修改意见。每次调查结束后，根据专家反馈意见对推荐建议进行修改或增补。推荐等级根据专家投票分为“强推荐”“推荐”和“未达成共识”3个级别。若投票同意率（即选择“同意”的专家人数比例）≥70%，则认为该条推荐建议达成共识；其中，同意率>90%为强推荐，70%～90%为推荐；同意率<70%则为未达成共识。2背景与概述2.1NUT癌的定义与流行病学特征NUT癌（NUT

carcinoma,

NC），亦称中线癌，是一种由NUTM1基因重排驱动的罕见、高级别未分化或低分化恶性肿瘤，可发生于身体任何部位。其核心分子病理机制为染色体易位导致NUTM1基因与BRD4、BRD3或NSD3等基因发生融合，形成BRD4::NUTM1、BRD3::NUTM1或NSD3::NUTM1等融合基因，驱动肿瘤恶性增殖[2]。流行病学数据显示，NUT癌患者中位发病年龄多介于18~23岁之间[5-7]，在头颈部及上呼吸道的中低分化或未分化癌中占据相当比例：在儿童及青少年中低分化或未分化癌中约占7%，在上呼吸道同类肿瘤中约占20%，在鼻窦同类肿瘤中约占12.5%，在纵隔同类肿瘤中约占3.5%[8]。儿童群体中NUT癌的发病率约为0.41/100万[9]。NUT癌预后极差，病情进展迅速，中位生存期仅为6.7~9.5个月[1]，多数患者因局部病灶快速进展或发生远处转移而错失根治性手术的机会。其中，胸部原发NUT癌的预后尤为不良，中位总生存期仅4.4个月，2年生存率低至5%[10]。2.2目前临床治疗的瓶颈在化疗方面，NUT癌对常规方案呈原发性或获得性耐药，绝大多数患者在数月内即出现疾病进展[2-3]；尽管BRD4::NUTM1融合蛋白被确认为关键的驱动致癌事件，但针对该融合蛋白或其下游信号通路的特异性靶向药物迄今尚未获批上市[11-12]。此外，可供研究的标准模型严重短缺，传统模型难以模拟该疾病的独特分子病理特征，制约了药物筛选与机制研究的深入。在此背景下，患者来源类器官技术的引入为NUT癌研究提供了突破性平台。该技术利用患者肿瘤组织经体外三维培养，形成保留原发肿瘤组织学与遗传学特征的微缩器官结构，能够在体外稳定传代并维持肿瘤异质性[13-14]。NUT癌类器官模型可精准再现NUTM1融合基因驱动的肿瘤组织学形态、免疫表型、分子特征及恶性生物学行为等核心病理特征，为解析疾病机制、筛选靶向药物、预测治疗反应及实现个性化精准治疗提供了重要的实验体系。【专家共识1】NUT癌类器官可精准再现NUTM1融合基因驱动的表观遗传失调、分化阻滞及侵袭性生长等核心病理特征，是解析NUT癌发病机制、筛选靶向药物、预测治疗反应及实现个性化精准治疗不可替代的前沿实验体系。（证据等级：A；推荐等级：强推荐）3NUT癌类器官规范化建立的原则与标准人源性类器官在遗传异质性、微环境复杂性及体外培养敏感性方面具有固有特征，其潜在的伦理与生物安全风险不容忽视。在我国尚未出台针对类器官专项管理法规的背景下，NUT癌类器官的规范化建立应依据现行法律框架，遵循以下分阶段执行标准。在基础研究阶段，应遵照《中华人民共和国生物安全法》及《中华人民共和国人类遗传资源管理条例》的相关规定，建立具有唯一标识码的样本库，确保样本在采集、运输、存储及销毁各环节实现全流程可追溯的闭环管理，以有效防范生物安全隐患及人类遗传资源流失风险。在技术开发阶段，应依据《干细胞临床研究管理办法（试行）》及《涉及人的生物医学研究伦理审查办法》，组建独立的伦理委员会，针对高风险研究操作实施动态评估与持续监督，保障研究活动的科学性与合规性。在临床应用阶段，相关转化研究须符合《医疗技术临床应用管理办法》的要求，完成必要的临床试验备案与资质认证程序。同时，应严格遵循《中华人民共和国个人信息保护法》，全面落实知情同意与数据安全双重保障机制。需明确，所有类器官相关病理数据（包括病理切片、免疫组织化学（IHC）及分子检测结果等）均归属患者医疗隐私数据，须严格遵循知情同意、数据脱敏及分级授权管理规范。在知情同意方面：第一，样本采集时应明确告知组织用途及潜在风险，并获取书面知情同意；在涉及临床疗效预测时，须如实说明类器官模型在反映体内药效方面的局限性，并签署补充知情同意书。第二，所有医疗数据须经去标识化处理，并采用分级授权与物理隔离方式进行存储，以切实维护患者隐私与医疗信息安全。在病理医师职责与质控管理方面，应明确病理医师在样本审核、模型质控、结果解读及资源库管理中的核心职责，将病理规范化审核纳入类器官建系、应用与存储的全流程，从而保障研究的合规性与结果的可靠性。【专家共识2】NUT癌类器官的建立应遵循现行法律框架，实施分阶段管理：基础研究阶段须建立全流程可追溯的样本库，以防范遗传资源流失；技术开发阶段须经独立伦理委员会动态评估；临床应用阶段须完成备案认证，并严格执行知情同意与数据安全的双重保障机制。（证据等级：A；推荐等级：强推荐）4NUT癌类器官的构建方法4.1样本类型与适用性NUT癌类器官构建的成功率高度依赖于样本质量，规范化的采集与运输流程是确保组织活性和无菌状态的关键前提[15]。适用于NUT癌类器官培养的患者来源生物样本包括手术切除肿瘤组织、核心穿刺活检组织、胸腔积液、细针穿刺吸取物及肺活检标本（可通过经气道、经皮、经胸腔、经肺血管和经纵膈等多维度微创穿刺技术获取）。核心穿刺活检组织、细针穿刺吸取物及经支气管肺活检等小标本可能存在大量坏死组织或肿瘤细胞含量不足的情况。建议有条件的单位在穿刺现场开展快速现场评估，以确认标本中肿瘤细胞的含量及比例，这是成功构建类器官的重要质控步骤。其中，手术切除或核心穿刺活检获得的肿瘤组织因保留了完整的肿瘤异质性和基质成分，被视为类器官构建的优选样本。胸腔积液等液体活检样本虽创伤更小、可重复获取，但肿瘤细胞含量变异较大，需经细胞富集处理后方可进行培养，其在纵向监测疾病进展方面具有独特价值。4.2样本采集与运输规范手术切除组织应尽可能在离体后30

min内完成采集，并置入含抗生素的预冷组织保存液中。运输过程需维持2~8°C冷链条件，使用密封防漏的无菌容器，并遵循相关生物安全管理规定。所有用于类器官培养的样本必须经病理学确诊为NUT癌，确诊依据需满足一下三项金标准之一：（1）NUT蛋白细胞核弥漫强阳性（IHC检测）；（2）经FISH、NGS或RNAseq证实存在NUTM1基因重排；（3）HE形态符合NUT癌典型特征（如未分化细胞、大片坏死、灶性突然角化等），同时须经分子检测排除其他诊断。入组样本的肿瘤细胞比例应≥70%，由病理医师出具专项评估报告，标注肿瘤分化程度、关键免疫组织化学指标、基因融合亚型、坏死及间质占比等信息，以杜绝因误诊或低质量样本导致的模型失真与异质性污染。样本采集前须获得患者书面知情同意，并通过机构伦理审查委员会批准。【专家共识3】NUT癌类器官构建以手术切除或核心穿刺活检组织（肿瘤细胞比例≥70%）为首选样本，因其可完整保留肿瘤的异质性与基质成分。样本需经分子病理确诊（NUT蛋白弥漫阳性、NUTM1重排或典型HE染色形态），并须获得伦理审批和知情同意。胸腔积液等液体活检样本创伤小、可重复获取，经细胞富集后适用于疾病进展的纵向监测。规范化的采集运输流程是保障组织活性与无菌状态的关键前提。（证据等级：B；推荐等级：推荐）4.3组织处理与细胞分离在生物安全二级（BSL-2）实验室内，肿瘤组织经无菌PBS充分漂洗去除污染物后，使用无菌器械在冰上将其剪碎至约0.5

mm3的均匀碎块。推荐采用组合酶消化策略，于37°C条件下孵育30~60

min进行组织解离，期间辅以轻柔吹打以促进细胞释放。消化后的悬液经细胞筛网过滤，去除未消化的组织块，离心收集细胞沉淀并进行活力评估。酶解消化时间需根据组织质地的不同进行动态调整，避免因过度消化导致细胞损伤。推荐消化后细胞活力不低于80%。4.4培养基与基质胶的选择NUT癌类器官的培养需采用成分明确、无血清的优化培养基体系。基础培养基推荐选用营养丰富的Advanced

RPMI-1640，并补充系列生长因子与小分子抑制剂。其中，表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子与成纤维细胞生长因子10可协同促进肿瘤上皮细胞的增殖；Wnt3a与R-spondin

1维持细胞干性；Noggin通过抑制BMP信号通路促进类器官形成。小分子抑制剂方面，ROCK抑制剂Y-27632可有效抑制由解离诱导的细胞凋亡，推荐于初次接种及传代后24~48

h内添加；TGF-β受体抑制剂A83-01有助于维持类器官的结构完整性。基质胶推荐使用成分明确的商品化基底膜基质胶，所有操作须在冰上进行以防止其提前聚合。细胞接种密度与液滴体积需根据具体的培养体系进行优化确定。4.5培养与传代类器官应置于37

°C、5%

CO2、饱和湿度的条件下静置培养，每2~4天更换一次培养基。健康的NUT癌类器官呈透亮的球形或不规则三维结构，直径随时间逐渐增大，初次接种后通常需7~14天达到传代标准。传代时机以类器官直径达到150~250

μm，或出现密度过高、培养基酸化加速等指征为准。传代过程中，需使用温和的解离试剂将类器官分散为小细胞簇，按适当比例重新接种于新鲜基质胶中。传代后24~48

h内应补充ROCK抑制剂以提高细胞存活率。需特别注意的是，长期传代可能导致遗传漂变和表型偏移，推荐在机制研究及药物敏感性检测中，优先使用10代以内的类器官。4.6冻存与复苏类器官应于对数生长期，且经质控检测合格后进行冻存。推荐采用含10%二甲基亚砜（DMSO）的冻存保护液，使用程序降温盒于−80°C过夜，实现缓慢降温后，转移至液氮气相层中长期保存。复苏时，采用37°C水浴快速解冻，经洗涤去除冻存液后，重悬于基质胶中接种。复苏初期的培养基中应补充ROCK抑制剂以促进细胞恢复。复苏后需持续监测3~5天，评估其形态恢复及活力情况。建议建立数字化与纸质双轨并存的库存管理系统，每6~12个月抽取代表性样本进行复苏质控，以验证长期冻存的稳定性。4.7鉴定与质控体系标准化的质控体系是确保NUT癌类器官模型可靠性、可重复性及转化应用价值的核心保障。该体系涵盖功能质控、污染检测、身份鉴定及基因组稳定性四个维度，具体划分为三级标准：一级为动态监测类器官的形态与生长活性，确保其增殖特征与原发肿瘤的Ki-67指数一致；二级为通过HE及IHC染色进行验证，确保类器官复现NUT癌的特征性病理表型，包括NUT弥漫性核阳性、肿瘤细胞突然角化及高增殖指数；三级为采用FISH、NGS及STR鉴定技术，确认基因融合亚型与原发肿瘤一致，并排除交叉污染。4.7.1功能质控形态完整性是反映类器官健康状态及功能潜力的直观指标，应在冻存前、复苏后及常规培养过程中定期评估。健康的NUT癌类器官应呈现致密的三维球状或不规则聚集结构，边界清晰，保留原发肿瘤的特征性形态。如样本中出现广泛坏死、胞质空泡化、结构松散或皱缩等异常表现，且异常比例超过可接受阈值，则该批次应视为不合格。活力检测用于定量评估类器官内的活细胞比例，是决定类器官是否可用于冻存、复苏后使用及后续实验研究的关键判定依据。推荐采用台盼蓝拒染法或等效的活力检测方法。冻存前活力应不低于80%，复苏后恢复期的活力应达到可接受标准，方可进入后续应用。所有新建类器官系均须经NUT蛋白免疫组织化学或免疫荧光染色验证，确认其呈现细胞核内弥漫性强阳性染色模式，此为NUT癌的诊断性标志。同时，推荐采用FISH或NGS验证NUTM1基因的重排状态，并明确其融合伴侣基因类型，以确保类器官能够忠实再现原发肿瘤的驱动分子特征。4.7.2污染检测污染检测是保障类器官培养体系安全性和实验结果可靠性的强制性要求，须在冻存前、复苏后及长期培养过程中定期执行。细菌与真菌污染的筛查可通过目视检查结合培养法进行；支原体污染因无明显肉眼可见的改变，需采用PCR或荧光染色等敏感方法定期检测。一旦确认污染发生，应立即隔离并废弃受影响的培养物，并对操作环境及相关设备进行彻底消毒。4.7.3身份鉴定为确保类器官与供体来源的一致性，推荐采用短串联重复序列分析进行身份鉴定，与原发肿瘤组织或患者正常组织进行比对验证。新建类器官系在入库前须完成身份确认，长期培养过程中建议定期复核，以排除交叉污染风险。4.7.4基因组与转录组稳定性NUT癌类器官在长期培养及传代过程中，应保持基因组与转录组特征的相对稳定。推荐定期对关键驱动基因的融合状态进行验证；必要时，可通过全外显子组测序或RNA测序评估其遗传漂变的程度。对于需要保持高保真度的机制研究与药物筛选实验，应优先使用10代以内的早期传代类器官，并详细记录传代次数以备溯源。【专家共识4】NUT癌类器官的构建需严格规范全流程操作：首先，确保样本采集的无菌性与时效性，优选手术切除或穿刺活检组织；其次，标准化培养、传代与冻存流程，优化无血清培养基体系与基质胶条件，以模拟原生三维结构并维持长期稳定性；最后，建立多维度质控体系，系统评估类器官的结构与功能保真度。（证据等级：B；推荐等级：强推荐）5NUT癌类器官库的构建NUT癌类器官库的构建是推动该罕见肿瘤研究从单中心探索走向多中心协同攻关的基础性工程。在构建过程中，需重点关注以下事项：首先，必须严格遵循国际类器官生物样本库标准框架，确保入库样本均经过完整的知情同意与伦理审批程序，并配套建立样本的数字化追溯档案，实现从供体信息、临床病程到基因融合类型、传代次数及质控记录的全生命周期可溯管理。其次，鉴于NUT癌发病部位广泛且融合伴侣基因存在异质性，入库时应系统收集胸腔、头颈部等不同解剖部位原发的类器官，并明确标注BRD4::NUTM1、BRD3::NUTM1及NSD3::NUTM1等分子亚型，以支撑亚型特异性的药物筛选与机制研究。再者，库的维护需制定严格的定期质控制度，每6~12个月抽取代表性样本进行复苏活力评估、NUT蛋白表达验证及支原体筛查，一旦发现活力显著下降或关键分子特征丢失，应立即淘汰相应批次并更新库存记录。最后，应建立共享使用规范与材料转移协议框架，在保障知识产权与患者隐私安全的前提下，促进资源的高效流转与协同创新。【专家共识5】NUT癌类器官库的构建须严格遵循国际类器官生物样本库标准框架，实施涵盖供体信息、临床病程、基因融合类型及传代质控记录的全生命周期数字化可追溯管理。库的维护须执行定期质控制度。资源共享应依托规范化的材料转移协议框架，在保障知识产权与患者隐私安全的前提下，促进协同创新。（证据等级：B；推荐等级：强推荐）6NUT癌类器官的应用NUT癌类器官作为能够高度保留原发肿瘤分子特征与异质性的体外三维模型，为该罕见恶性肿瘤的药物敏感性检测、个体化治疗策略制定以及基础转化研究提供了前所未有的技术平台。本章节重点阐述NUT癌类器官在上述领域的具体应用价值与规范化建议。6.1药物敏感性检测NUT癌临床治疗面临的核心挑战之一是缺乏经大规模前瞻性研究验证的标准化治疗方案，现有化疗及靶向药物疗效的个体差异显著，且耐药问题突出[14-18]。患者来源的类器官能够保留原发肿瘤的药物响应特征，为体外高通量药物筛选及个体化药敏检测提供了可靠的功能学平台。在药物敏感性检测中，有效干预的具体阈值指标包括：类器官坏死面积占比≥30%（通过caspase-3/7活性检测或坏死染色定量）、凋亡率较阴性对照增加≥2倍（如AnnexinV/PI流式细胞术测定）、增殖指数（Ki-67阳性细胞率）较对照组下降≥50%，以及肿瘤分化趋势增强（伴鳞状分化标志物如CK5/6、CK14表达上调≥2倍）。无效干预则定义为：类器官坏死面积<30%、凋亡率增加<2倍、Ki-67阳性率下降<50%，且形态及整体增殖活性与阴性对照组相比无明显改变。6.1.1化疗药物敏感性筛选通过将类器官暴露于不同浓度的化疗药物（如铂类、紫杉类、蒽环类等）48~72

h，检测活力变化并绘制剂量-效应曲线，可计算半数抑制浓度（IC50）等关键药效参数，为临床方案筛选提供定量依据。较多研究已证实，类器官药敏结果与患者实际临床应答具有高度一致性。例如，结直肠癌PDOs对5-FU和奥沙利铂的药敏结果与临床疗效显著相关，阳性预测值达0.78，阴性预测值约0.80，且类器官药物反应与患者无进展生存期和总生存期相关[19]；胰腺癌类器官同样能忠实保留原发肿瘤的遗传特征和药物敏感性谱。这一方法学体系已在大肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等多种实体瘤中得到验证[20-22]。需要指出的是，目前国内外尚无NUT癌类器官药物敏感性研究的正式文献报道。然而，鉴于NUT癌同样属于侵袭性实体瘤，且类器官构建技术已在其他罕见肿瘤中取得突破，前述类器官药敏检测在预测临床应答、指导个体化化疗方面的价值，在理论上具备向NUT癌领域推演的可行性。NUT癌患者来源类器官有望用于系统评估临床常用化疗药物及联合方案的敏感性谱，鉴于不同患者对化疗方案的应答存在显著的个体差异，未来基于类器官的药物敏感性检测，或可为NUT癌患者提供个体化化疗方案选择的参考依据，从而避免无效治疗带来的不良反应和治疗延误[23]。6.1.2靶向药物疗效评估在靶向药物敏感性检测方面，PDOs已被成功用于评估多种靶向药物的疗效。例如，在HER2驱动型癌症研究中，基于患者来源异种移植模型（Patient-derived

tumor

xenograft,PDX）的平台系统评估了HER2靶向抗体药物偶联物（ADCs）的疗效，发现连接子的化学性质显著影响药物在类器官模型中的活性，该平台为ADC药物的临床前优化提供了可靠的转化工具[24]。大规模回顾性研究已证实，类器官药物敏感性与患者临床反应具有显著相关性。在结直肠癌研究中，类器官已被用于评估EGFR抑制剂、AURKA抑制剂等多种靶向药物的联合治疗方案，揭示了联合治疗中隐藏的脆弱性[25]。在转移性结直肠癌中，类器官对EGFR抑制剂（如panitumumab）的敏感性与患者RAS/BRAF突变状态及实际临床反应高度一致[26]。胰腺癌类器官的药敏分型研究也显示，类器官对标准化疗方案的响应与患者临床结局存在总体相关性[27]。鉴于NUTM1融合蛋白驱动的表观遗传失调是NUT癌的核心致病机制，靶向BET溴结构域蛋白的小分子抑制剂成为该领域最具前景的治疗方向之一[28-30]。NUT癌类器官在评估BET抑制剂及其他表观遗传调控药物的敏感性方面具有独特价值。由于类器官能够在体外稳定维持NUTM1融合基因的表达及下游超级增强子调控网络，其对BET抑制剂的响应特征可在一定程度上反映体内治疗预期[14,31]。同时，类器官体系支持对多种新型靶向药物（如组蛋白去乙酰化酶抑制剂、周期蛋白依赖性激酶抑制剂等）进行平行筛选，为NUT癌患者拓展潜在的治疗选择。6.1.3联合用药策略优化在精准医疗临床应用方面，类器官药敏检测正从单药测试向多药联合测试发展。一项针对胰腺癌类器官的研究采用药代动力学分类方法，通过比较体外IC50值与体内最大血浆浓度（Cmax）及组织浓度，建立了多药联合测试体系。结果显示，基于曲线下面积（AUC）值的直接聚类分析对一线治疗方案的预测准确率高达85%，敏感性为92%，特异性为100%，显著优于单药测试（5-FU单药预测准确率86%，奥沙利铂71%，SN-38仅57%）[32]。该研究证实，多药联合测试能够更全面地捕捉肿瘤对复杂治疗方案的反应模式，克服单药测试在预测联合化疗疗效时的局限性。在结直肠癌类器官研究中，研究者采用显微镜引导的表型筛选策略，对36例KRAS突变型结直肠癌类器官进行414种临床获批药物的单药及两药组合筛选，成功鉴定出拉帕替尼（HER2/EGFR抑制剂）+曲美替尼（MEK1/2抑制剂）+长春瑞滨（微管靶向剂）的三药联合方案，在体内模型中使肿瘤生长抑制率达到62%[33]。在乳腺癌类器官研究中，通过整合全基因组测序、转录组分析和药物筛选，成功为患者筛选出艾瑞布林+他拉唑帕利的联合方案，在PDX模型中实现肿瘤完全消退并维持长期无复发[34]。单一靶向药物易诱发继发性耐药，联合用药是提升NUT癌治疗疗效的重要策略[35-37]。NUT癌类器官可在体外模拟不同药物组合（如BET抑制剂联合化疗、联合免疫检查点抑制剂、联合表观遗传调控药物等）的协同或拮抗效应。通过系统评估药物组合的联合指数及剂量优化指数，可筛选出具有协同增效潜力的联合方案，为临床研究设计提供临床前证据支撑。6.1.4耐药机制研究与逆转策略探索类器官可通过体外长期药物暴露诱导耐药模型的建立，结合转录组学、表观基因组学及单细胞测序等技术手段，系统解析耐药克隆的演化轨迹及关键耐药驱动分子。在此基础上，可进一步利用耐药类器官模型筛选能够逆转耐药表型的候选药物或联合方案，为克服临床耐药提供理论依据和潜在的干预策略。在胰腺癌研究中，通过建立治疗敏感和耐药的类器官模型，发现BET抑制剂耐药与细胞可塑性及替代信号通路的激活相关[33]。在结直肠癌类器官长期诱导耐药模型中，研究发现靶向药物（AKT抑制剂、MEK抑制剂）耐药具有表观遗传的遗传性，即耐药表型可通过非遗传机制在克隆后代中传递[38]。通过多组学分析（转录组、表观遗传组、蛋白质组）和功能性筛选，可鉴定出联合治疗下的适应性耐药机制，如补偿性超级增强子的重塑、旁路信号通路的激活或肿瘤微环境的免疫抑制性转化。NUT癌患者对化疗及靶向药物产生的获得性耐药是导致治疗失败的主要原因[39-40]。可利用耐药类器官模型筛选能够恢复BET抑制剂敏感性的候选药物，如Wnt通路抑制剂（针对Wnt非分泌型耐药克隆）、CDK7抑制剂（阻断转录成瘾）、或表观遗传药物组合（HDAC抑制剂联合EZH2抑制剂），并通过体内PDX模型验证其耐药逆转效能。【专家共识6】NUT癌PDOs模型能够保留原发肿瘤的药物响应特征，为个体化药物敏感性检测及联合用药优化提供可靠的功能学平台。基于类器官的化疗、靶向药物及联合方案敏感性评估，其预测结果与患者临床应答具有高度一致性。此外，类器官可长期诱导建立耐药模型，结合多组学技术解析耐药机制并筛选逆转策略。推荐将肿瘤类器官技术用于NUT癌的精准用药指导及耐药研究，以优化治疗方案、改善患者预后。（证据等级：B；推荐等级：推荐）6.2基础研究与靶点发现NUT癌发病机制的核心在于NUTM1基因重排驱动的表观遗传重编程，但融合蛋白如何精确调控下游转录网络、塑造肿瘤免疫微环境以及介导治疗耐药等关键科学问题，仍有待深入阐明[29,41-42]。NUT癌类器官作为能够在体外长期维持原发肿瘤分子病理特征的实验模型，为上述基础科学问题的解析及新型治疗靶点的发现提供了理想的研究体系。6.2.1NUTM1融合蛋白致病机制解析NUT癌类器官能够稳定维持NUTM1融合基因的表达及细胞核内弥漫性NUT蛋白的定位，为研究BRD4::NUTM1等融合蛋白如何通过乙酰化组蛋白的招募、超级增强子的形成及谱系特异性转录因子的调控等机制驱动肿瘤发生，提供了可操作的体外模型。借助CRISPR-Cas9基因编辑、染色质免疫沉淀测序、转座酶可及性测序等表观基因组学技术，研究者可在类器官体系中精细解析融合蛋白的染色质占位图谱、下游靶基因网络及关键信号通路的活化状态。在此基础上，依托类器官模型还可开展更深层次的转化研究：一方面，解析NUTM1融合蛋白介导的肿瘤分化阻滞机制，揭示其在维持未分化表型中的核心作用；另一方面，开展不同解剖部位、不同基因亚型NUT癌的病理表型对比研究，探索异质性背后的分子基础。相较于传统的二维培养细胞系，类器官的三维结构及细胞极性特征使其在模拟体内表观遗传调控环境及复现肿瘤亚型特异性表型方面，具有明显的优势。6.2.2新型治疗靶点的发现与验证当前，NUT癌的靶向治疗主要聚焦于BET溴结构域蛋白，但临床应用中存在的剂量限制性毒性及耐药问题，凸显了拓展靶点库的迫切性[43-44]。NUT癌类器官可作为靶点筛选与验证的功能性平台。通过对不同融合伴侣亚型的类器官进行转录组学、蛋白质组学及磷酸化修饰组学等多组学整合分析，可系统识别NUTM1融合蛋白下游的脆弱性节点，包括激酶信号通路异常、代谢重编程依赖及表观遗传合成致死靶点等。候选靶点的功能验证可在类器官体系中，通过基因敲降、小分子抑制剂处理等手段完成，从而为NUT癌的治疗提供新策略。6.2.3肿瘤免疫微环境研究PDOs技术能够在体外高度还原肿瘤组织的三维结构、细胞异质性及部分基质特征，因此成为研究肿瘤与免疫微环境相互作用的理想实验模型。相较于其他常见恶性肿瘤，NUT癌的免疫微环境具有显著差异，其突出特征在于免疫细胞浸润极为稀少，同时程序性死亡配体1（PD-L1）表达水平普遍低下[45-46]，提示该肿瘤可能依赖非经典的免疫逃逸机制。NUT癌类器官与免疫细胞共培养体系的建立，为研究该肿瘤的免疫逃逸机制及预测免疫治疗响应提供了新工具。通过将患者来源类器官与自体肿瘤浸润淋巴细胞、嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）等免疫效应细胞共培养，可以动态观察肿瘤细胞与免疫细胞之间的空间定位、迁移、识别与杀伤过程，系统评估免疫检查点抑制剂、双特异性抗体等免疫治疗策略的杀伤效能[47-49]。该体系对于筛选免疫治疗增敏靶点及解析NUT癌免疫微环境特征具有重要价值。【专家共识7】NUT癌类器官能够稳定维持NUTM1融合蛋白驱动的表观遗传特征及三维结构，是解析致病机制、发现新靶点及研究免疫微环境的理想模型。借助基因编辑及多组学技术，可在类器官体系中精细解析融合蛋白的调控网络，识别下游的脆弱性节点。类器官与免疫细胞共培养体系可动态评估免疫治疗策略的杀伤效能。推荐将NUT癌类器官用于基础研究与靶点发现，以推动新型治疗策略的临床转化。（证据等级：B；推荐等级：推荐）6.3肿瘤演化与克隆动力学研究NUT癌虽由NUTM1重排驱动，但患者间及同一患者不同病程阶段仍存在显著的克隆异质性。类器官可在体外稳定传代的过程中保留原始肿瘤的克隆组成，结合单细胞测序及谱系追踪技术，研究者可动态监测不同亚克隆在药物选择压力下的消长规律，揭示耐药克隆的起源与演化路径。这一研究范式为理解NUT癌治疗失败的根本原因及制定克隆演化感知的序贯治疗策略提供了独特视角。【专家共识8】NUT癌类器官能够在体外稳定保留原始肿瘤的克隆组成与异质性。结合单细胞测序及谱系追踪技术，可动态监测药物压力下不同亚克隆的消长规律，揭示耐药克隆的演化路径。推荐将NUT癌类器官模型用于肿瘤演化研究，为制定基于克隆动力学的序贯治疗策略提供理论依据。（证据等级：B；推荐等级：推荐）7展望NUT癌类器官技术的建立与标准化，为这一罕见且高度侵袭性恶性肿瘤的研究与诊疗带来了新的希望。随着未来多中心协作网络的构建与类器官生物样本库规模的扩大，中线癌类器官有望从单中心研究工具发展为区域乃至国家层面的共享资源平台，系统整合不同融合亚型、不同病程阶段的类器官模型，为大规模药物筛选及生物标志物发现提供支撑。在技术创新层面，类器官与微流控芯片、三维生物打印及血管化培养体系的融合，将进一步提升其对体内肿瘤微环境的模拟保真度；与单细胞多组学、空间转录组学及人工智能辅助图像分析等前沿技术的深度整合，有望推动中线癌致病机制的精准解析及治疗靶点的高效发现。在临床应用转化方面，基于类器官的药物敏感性检测有望纳入NUT癌个体化治疗决策路径，为患者提供循证医学指导下的精准用药方案。本共识的发布为NUT癌类器官研究提供了初步框架性指导。未来亟须建立跨学科、跨机构研究协作网络，推动中线癌类器官规范化建立和临床转化应用，最终为这一罕见难治性肿瘤的精准防治提供更加可靠的实验平台和技术支撑。参考文献：[1]LuoW,StevensTM,StaffordP,etal.NUTM1-RearrangedNeoplasms-AHeterogeneousGroupofPrimitiveTumorswithExpandingSpectrumofHistologyandMolecularAlterations-AnUpdatedReview[J].CurrOncol,2021,28(6):4485-4503.[2]LuoJ,BishopJA,DuBoisSG,etal.Hidinginplainsight:NUTcarcinomaisanunrecognizedsubtypeofsquamouscellcarcinomaofthelungsandheadandneck[J].NatRevClinOncol,2025,22(4):292-306.[3]MatsuuraH,MakimotoG,OdaN,etal.APromptDiagnosisandTreatmentofaCaseofNuclearProteinoftheTestisCarcinomaCharacterizedbyaBronchialLesionandHighSerumAlpha-fetoproteinLevelFollowingGenomicTesting[J].InternMed,2024,63(19):2655-2660.[4]GuyattG,OxmanAD,AklEA,etal.GRADEguidelines:1.Introduction-GRADEevidenceprofilesandsummaryoffindingstables[J].JClinEpidemiol,2011,64(4):383-394.[5]LemelleL,PierronG,FréneauxP,etal.NUTcarcinomainchildrenandadults:Amulticenterretrospectivestudy[J].PediatrBloodCancer,2017,64(12):e26693.[6]CharlabR,RaczR.TheexpandinguniverseofNUTM1fusionsinpediatriccancer[J].ClinTranslSci,2023,16(8):1331-1339.[7]YeZ,YanH,LiX,etal.RadiotherapyOutcomesandPrognosticFactorsinHeadandNeckNUTCarcinoma:ASingle-CenterCohortAnalysis[J].HeadNeck,2026,48(4):975-985.[8]LeeT,ChoJ,BaekCH,etal.PrevalenceofNUTcarcinomainheadandneck:Analysisof362caseswithliteraturereview[J].HeadNeck,2020,42(5):924-938.[9]CarterT,CrookM,MurchA,etal.IncidenceofNUTcarcinomainWesternAustraliafrom1989to2014:areviewofpediatricandadolescentcasesfromPerthChildren'sHospital[J].BMCCancer,2021,21(1):740.[10]VirarkarM,MalleryM,SalehM,etal.Clinical,Radiographic,PathologicCharacterizationandSurvivalOutcomesofNuclearProteinoftheTestisCarcinoma[J].JComputAssistTomogr,2021,45(3):431-441.[11]FrenchCA,ChengML,HannaGJ,etal.ReportoftheFirstInternationalSymposiumonNUTCarcinoma[J].ClinCancerRes,2022,28(12):2493-2505.[12]ZhengD,ElnegiryAA,LuoC,etal.Brd4::Nutm1fusiongeneinitiatesNUTcarcinomainvivo[J].LifeSciAlliance,2024,7(7):e202402602.[13]NiD,XingJ,NiuG,etal.Patient-derivedorganoids(PDOs):anovelpreclinicalplatformtoovercomechallengesincancerimmunotherapy[J].FrontCellDevBiol,2026,14:1757516.[14]YinM,ShenC,ZhangM,etal.DevelopmentofPatient-DerivedOrganoidsfromNUTCarcinoma:ARobustandFullyDocumentedCultureSystem[J].JOrganoidBiosci,2025,3:48-51.[15]StorckS,KennedyAL,MarcusKJ,etal.PediatricNUT-midlinecarcinoma:Therapeuticsuccessemployingasarcomabasedmultimodalapproach[J].PediatrHematolOncol,2017,34(4):231-237.[16]LeemanR,PinkneyK,BradleyJA,etal.NUTCarcinomaWithoutUpfrontSurgicalResection:ACaseReport[J].JPediatrHematolOncol,2021,43(5):e707-e710.[17]ParikhSA,FrenchCA,CostelloBA,etal.NUTmidlinecarcinoma:anaggressiveintrathoracicneoplasm[J].JThoracOncol,2013,8(10):1335-1338.[18]LuoJ,SanchezM,LeeE,etal.InitialChemotherapyforLocallyAdvancedandMetastaticNUTCarcinoma[J].JThoracOncol,2024,19(5):829-838.[19]SmabersLP,WensinkGE,VerissimoCS,etal.Patient-DerivedOrganoidsPredictTreatmentResponseinMetastaticColorectalCancer[J].ClinCancerRes,2025,31(23):5015-5026.[20]HuY,ZhuJ,ZhengY,etal.Studyondrugsensitivityandclinicalapplicationoftumororganoid-basedcolorectalcancermodels[J].AmJTranslRes,2025,17(9):7468-7481.[21]杨欣怡,尹毅锐,黄哲昆,等.胃癌类器官在化疗药物敏感性测定中的研究进展[J].中国临床医学,2025,32(4):685-691.[YangXY,YinYR,HuangZK,etal.Researchprogressofgastriccancerorganoidsinchemotherapydrugsensitivitytesting[J].ZhongguoLinChuangYiXue,2025,32(4):685-691.][22]MorceauF,El-KhouryV,LeeK,etal.PancreaticCancerOrganoids:ModelingDiseaseandGuidingTherapy[J].Cancers[23]MaJ,TianY,ZhangY,etal.Earlysensitivityandrapidresistancetodrugtherapyinprimarypulmonarynuclearproteinintestiscarcinoma[J].AnticancerDrugs,2025,36(8):698-701.[24]ChouFJ,NallanaY,TsaiHW,etal.1245EvaluatingtheefficacyoftargetedtherapiesinHER2-drivencancersusingpatient-derivedxenograftorganoids[J].JImmunoTherapyCancer,2025,13(suppl2):A1420.[25]LiuY,ZhangY,ZhangR,etal.Patient-derivedorganoids(PDOs)asapromisingplatformforpersonalizedtreatmentofcolorectalcancer:currentapplicationsandfuturechallenges[J].CancerBiolTher,2025,26(1):2567802.[26]AbouleilaY,SmabersLP,VoskuilenT,etal.Acceleratingpersonalizedmedicine:miniaturizedpatient-derivedorganoiddrugscreeningforpredictingcancertreatmentresponsesandbeyond[J].NPJBiomedInnov,2026,3(1):16.[27]VerduinM,HoebenA,DeRuysscherD,etal.Patient-DerivedCancerOrganoidsasPredictorsofTreatmentResponse[J].FrontOncol,2021,11:641980.[28]FrenchCA,RahmanS,WalshEM,etal.NSD3-NUTfusiononcoproteininNUTmidlinecarcinoma:implicationsforanoveloncogenicmechanism[J].CancerDiscov,2014,4(8):928-941.[29]AlekseyenkoAA,WalshEM,ZeeBM,etal.EctopicproteininteractionswithinBRD4-chromatincomplexesdriveoncogenicmegadomainformationinNUTmidlinecarcinoma[J].ProcNatlAcadSciUSA,2017,114(21):E4184-E4192.[30]FilippakopoulosP,QiJ,PicaudS,etal.SelectiveinhibitionofBETbromodomains[J].Nature,2010,468(7327):1067-1073.[31]HakunMC,GuB.ChallengesandOpportunitiesinNUTCarcinomaResearch[J].Genes(Basel),2021,12(2):235.[32]WanschK,PelzerU,SchneiderF,etal.Multi-drugpharmacotypingimprovestherapypredictioninpancreaticcancerorganoids[J].CancerCellInt,2025,25(1):321.[33]BenboubkerV,RamzyGM,JacobsS,etal.ChallengesinvalidationofcombinationtreatmentstrategiesforCRCusingpatient-derivedorganoids[J].JExpClinCancerRes,2024,43(1):259.[34]GuillenKP,FujitaM,ButterfieldAJ,etal.Ahumanbreastcancer-derivedxenograftandorganoidplatformfordrugdiscoveryandprecisiononcology[J].NatCancer,2022,3(2):232-250.[35]HuangY,DurallRT,LuongNM,etal.EZH2CooperateswithBRD4-NUTtoDriveNUTCarcinomaGrowthbySilencingKeyTumorSuppressorGenes[J].CancerRes,2023,83(23):3956-3973.[36]LiaoS,MaertensO,CichowskiK,etal.GeneticmodifiersoftheBRD4-NUTdependencyofNUTmidlinecarcinomauncoversasynergismbetweenBETisandCDK4/6is[J].GenesDev,2018,32(17-18):1188-1200.[37]ZhangX,ZegarT,LucasA,etal.Therapeutictargetingofp300/CBPHATdomainforthetreatmentofNUTmidlinecarcinoma[J].Oncogene,2020,39(24):4770-4779.[38]OliveiraEA,MiliteS,Fernandez-MateosJ,etal.EpigeneticHeritabilityofCellPlasticityDrivesCancerDrugResistancethroughaOne-to-ManyGenotype-to-PhenotypeParadigm[J].C