脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训专家讲座

器材准备浓汁标本1支，粪便标本1支;碘酒棉球1瓶，酒精棉球1瓶，眼科镊子2把;伊红美兰平板2个，营养琼脂平板5个。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第1页自然界中微生物已经发觉微生物大约13万5千各种，被认为非常危险有600种，在人间传染病原微生物380种。这些微生物存在于地球各个角落，从严寒极地到酷热赤道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢),都有它们踪迹。空气、水、土壤、人体体表以及与外界相通腔道，都有不一样种类和数量微生物存在。存在于人体消化道细菌超出800种，数量可达100万亿（1014)，菌体重量1～1.5千克。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第2页医学微生物学试验

综合性试验三

ComprehensiveExperiment3

空气与人体体表细菌学检验空气细菌学检验P38手指皮肤细菌学检验P41脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第3页空气细菌学检验P38

空气是人类赖以生存环境之一，也是主要疾病传输媒介。空气中病原菌主要来自病人排泄物和分泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶胶形式悬浮于空中，使空气受到污染。环境:不利于微生物生长。种类:主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致病菌数量比较多。作用:可快速全球传输。危害:引发培养基、生物制品污染，病原菌引发呼吸道传染病。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第4页试验方法：自然沉降法是依据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力作用下，以垂直自然方式沉降到培养基表面；培养以后，计数菌落形成单位（colonyformingunit，CFU)，了解空气污染情况。试验步骤：每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（试验室、宿舍、卫生间、饭堂或任选地点)，将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁，平板暴露于空气中15分钟，然后盖上盖子，作标识。37℃温箱培养24小时，观察结果。★CFU/m3＝50000N÷AT≈86N(直径7cm平板)。N：平板上菌落数。A：平板面积(平方厘米)。T：采样时间(分钟)。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第5页空气细菌学检验

暴露法(ExposureMethod)空气细菌学检验

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暴露法(ExposureMethod)脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第6页手指皮肤细菌学检验P41

在日常生活中，手接触范围广，使用频率高，受到污染机会也最多。一只外观比较"洁净”手，可携带10万个细菌、200各种病毒。所以，经手传输疾病很多，范围很广，包含肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病，以及一切可经手间接传输疾病。常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢靠，用普通洗手方法，常不易去除。暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露部位。暂住菌是外来非正常菌群，种类和数量不定。引发人类致病通常是暂住菌。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第7页医务人员，经常要与病人接触，不论是直接接触，还是间接接触，都有传输病菌可能。即使病菌直接起源是患者,不过造成病菌扩散主要路径则是气溶胶和医务人员手。所以，经常洗手和消毒是控制医院内交叉感染主要方法。实际上，预防感染办法中，最简单又十分有效方法就是洗手。据测定，只用自来水洗手可使暂住菌总数降低40%，用肥皂洗手可降低80%以上。洗手？脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第8页常规洗手方法（甲和丙操作)将手充分浸湿,涂抹肥皂或洗涤液。重复搓揉双手,搓揉时间不应少于30秒。用流水冲洗洁净,整个洗手过程不少于1分钟。※能有效地去除大多数手上暂住菌。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第9页医学微生物学试验室标准洗手方法（乙和丁操作)用流动水冲洗,将手充分浸湿,涂抹肥皂、洗涤液。分别搓擦10～15次。保持双手低于肘部,流水冲洗一分钟以上。1.掌心对掌心搓擦2.手指交织掌心对手背搓擦3.手指交织掌心对掌心搓擦4.两手互握互搓指背5.拇指在掌中转动搓擦6.指尖在掌心中搓擦脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第10页1.掌心对掌心搓擦2.手指交织掌心对手背搓擦3.手指交织掌心对掌心搓擦4.两手互握互搓指背5.拇指在掌中转动搓擦6.指尖在掌心中搓擦脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第11页医务人员洗手指征接触传染病患者之后。接触携带多耐药性细菌病人之后。接触病人血液、体液、分泌物和排泄物之后。接触高危病室两个病人之间、新生儿室两个新生儿之间接触旧钱币之后。上厕所前后。进行微生物操作或作血、尿等生化、免疫测定之后。在施行各种手术前后。诊疗、治疗、护理尤其易感染病人之前。进食之前。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第12页132

4132

4手指皮肤细菌学检验第1格为洗手前,第2格为洗手后,第3格为消毒后,第4格空白对照。2人1个营养琼脂平板上:甲、丙→常规洗手下:乙、丁→标准洗手甲（丙)乙（丁)丙丁脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第13页医学微生物学试验

综合性试验一(P2)脓汁和粪便标本中病原菌检测(二)临床标本检验程序

细菌分离与培养P7※目标要求：掌握分离、纯化微生物基本操作技术。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第14页常见病原性球菌检验程序P47:

直接涂片、革兰染色、镜检脓汁、痰、咽部分泌物

观察菌落性状、溶血性、色素

血琼脂平板培养涂片染色镜检

挑取可疑菌落生化反应↑纯培养动物试验

药敏试验血液、穿刺液→肉汤增菌培养→培养液涂片染色境检常见肠道致病菌检验程序P48:粪便→SS琼脂、伊红美蓝平板培养→挑取可疑菌落↑↓血清学判定血、骨髓→增菌培养双糖铁培养基染色镜检

生化反应脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第15页平板划线分离法

StreakPlateMethod借助于划线,将混杂各种细菌,在固体培养基表面分散成单个细菌,并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖,形成肉眼可见细菌集团。※在固体培养基表面或基内,由单个细菌在局部位置不停增值稠密群体称为单菌落。※在固体培养基表面,由多个菌落融合在一起形成细菌堆积物,称为菌苔。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第16页平板分区划线分离法步骤（5区)接种环烧灼灭菌，以免污染标本。取标本在平板表面上方密集涂布5～10mm2。烧掉接种环上多出标本（火焰后面烤干→烧灼)。晃动平板，当看到平板表面象镜面有反光时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，方便控制划线。接种环与平板呈30～40度角，经过密集涂布部分1～3次，使接种环重新沾上少许标本(细菌)，然后在平板表面，以曲线形式，作大幅度往返连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。转动平板，接种环经过第一区1次，一样

方法划第二区。如此依次划完3～5区。接种环烧灼灭菌，以免污染环境。将平板倒置37℃培养18～24h。★充分利用平板面积，不能划破琼脂。

第四区脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第17页平板划线分离小组分工甲→脓汁标本→营养琼脂平板(nutrientagarplate)乙→脓汁标本→营养琼脂平板(nutrientagarplate)丙→粪便标本→伊红美蓝平板(eosinmethyleneblueplate)丁→粪便标本→伊红美蓝平板(EMBplate)脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第18页试验分组俩俩相对4人为一个小组,组号编在电源插座上。每组按从前到后,从左到右次序,分别编号为甲、乙、丙、丁。

甲乙4丙丁甲乙3丙丁甲乙2丙丁甲乙1丙丁甲乙5丙丁甲乙8丙丁甲乙7丙丁甲乙6丙丁甲乙10丙丁甲乙9丙丁讲台脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第19页杆12～14cm环直径2～4mm柄10cm接种环inoculating

loop杆12～14cm柄10cm针4～6cm接种针straightwireinoculating

wire,inoculating

needle脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第20页接种环烧灼灭菌

FlameLoop使用前,直接在酒精灯上烧灼灭菌,把环和金属丝烧红即可。使用后,先在火焰后面将把环上标本烤干,再烧灼灭菌,以免标本汽化,爆烈四溅,污染环境。金属杆快速经过火焰2～3次,杀灭表面微生物。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第21页酒精灯无菌操作区外焰:又称氧化焰,火焰呈淡紫色,温度较高。无菌操作区:火焰周围10～20cm范围内。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第22页环面水平离开液面:快速6ul,慢速2ul。环面垂直离开液面:快速3ul,慢速1ul。接种环取液体标本方法:环直径3mm脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第23页①②③无菌取材基本步骤脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第24页接种环、平板握持方法脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第25页接种环、平板握持方法脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第26页正确correct错误incorrect平板划线示意图涂布spreading细菌大多分散成单个。细菌前段很多,后段太少,分离效果差。脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第27页脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第28页5～10mm2↓＞30条线/区平板划线不少于150条线脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第29页37℃培养24小时

脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第30页37℃培养24小时

脓汁和粪便标本中病原菌的检测培训第31页生物安全警告接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快，＜50um在0.4s内扩散开，＜5um经过呼吸道直接抵达肺泡。Pike