②尿中葡萄糖邻甲苯胺法-体育学实验教学体系

运动性疲劳的生化判断实验二十二⑴目的①通过实验使学生掌握运动性蛋白尿及尿糖的测定方法及

该二项指标在运动实践中的应用和意义,为体育教学和运动训练提供指导。②学习掌握尿蛋白磺基水杨酸比浊法

、尿中葡萄糖邻甲苯胺法检测的实验原理。③进一步巩固离心机

、分析天平

、分光光度计等仪器的基本操作。④通过研究设计型实验的实验设计与研究过程,提高学生的学习兴趣,培养学生查阅文献资料

、独立思考

、创新

思维

、动手操作

、分析问题和解决问题的能力,使学生

基本掌握从事一般科学研究的方法。

1

实验目的与要求⑵

要求①4-5人一组

，

自由组合编组

，

选定一人担任小组长。②

查找国内外近十年有关运动训练中尿蛋白及尿糖变化的

文献资料并总结

，

以小组为单位进行讨论

，

拟定实验的

内容与指标。③

根据拟定的实验内容与指标

，

讨论拟定运动实验对象的

训练方案：

运动方式

、运动强度与时间等（包括学会训

练实验动物)。④

掌握实验对象取材

、标本处理的方法与尿蛋白磺基水杨

酸比浊法

、尿中葡萄糖邻甲苯胺法的操作方法。⑤

详细制定实验步骤与方法

，

严格按照实验步骤与要求进

行实验。

⑴实验仪器①尿蛋白磺基水杨酸比浊法:试管

、可见光分光光度计等②尿中葡萄糖邻甲苯胺法:试管

、水浴锅

、烧杯、可见光分光光度计等2

实验仪器与试剂⑴

实验

仪器⑵

试剂①尿蛋白磺基水杨酸比浊法：3%磺基水杨酸溶液：

称取A.R纯品磺基水杨酸3.0g和无水硫酸钠7.0g，

以蒸馏

水溶解至100ml，

必要时过滤备用。②尿中葡萄糖邻甲苯胺法：邻甲苯胺的处理：

邻甲苯胺显红棕色

，

则应重蒸馏

，

收集199-201℃的馏出物

，

馏出液微带黄色

。

蒸馏时

弃去首尾部分

。

向蒸馏所得之邻甲苯胺中按每500ml加入0.5g盐酸羟胺

，

置56℃水浴中加温

，

不断振摇，

使其溶解

，

置棕色瓶中塞贮冰箱中备用。

➢O-TB试剂（邻甲苯胺显色剂)：

在清洁的1000ml容量瓶中，加入硫脲1.5g，

加冰醋酸约400-500ml使其溶解

，

溶解后加入60ml经上述处理的邻甲苯胺

，

再加饱和硼酸溶液40ml，

然后

用冰箱醋酸加至1000ml刻度

，

摇匀

，

贮于棕色瓶中。➢

饱和硼酸溶液称取硼酸6g，

加蒸馏水至100ml，

置室温数日

，

取上清液应用。➢

葡萄糖标准贮备液（10mg/1ml)取无水纯葡萄糖（A.R)2-3克，

置于洁净的烧杯内

，

在40-50℃干燥箱中烘干至恒重

，

置于干燥器中保存

。准确称取烘干的葡萄糖1.000g，

加约50ml0.25%安息香酸溶液溶解

，

倒入100ml容量瓶中

，

用0.25%安息香酸溶液稀释至刻度

，

置冰箱中保存。➢

葡萄糖标准应用液（1ml含1mg)将葡萄糖标准贮备液用0.25%安息香酸溶液稀释10倍即成。➢0.25%安息香酸溶液：

称取安息香酸2.5g，

加蒸馏水使溶解后

，

倒入1000ml容量瓶中

，

用蒸馏水稀释至刻度。

⑴设计本次实验方案①实验对象的选择（不同项目运动员)运动训练方式

、

强度

、

持续时间及取样时间的选择。②尿糖及尿蛋白的实验测定方法选择

，

尿蛋白采用磺基水杨酸比浊法

、尿糖采用邻甲苯胺法进行检测。③确定实验数据的统计学处理方法⑵在教师的指导下准备仪器药品并进行实验⑶对实验结果进行分析与讨论

，

写出实验报告或小论文。

3

实验内容➢

尿液是经肾小球滤过,通过肾小管和集合管的重吸收

及排泄产生的终末产物,因此尿液的组成和性状可直

接反映机体的代谢状况,在运动性疲劳的状态下,尿

液的组成和性状可发生变化,故运动医学上常常通过

尿液的检验来评定运动员的运动负荷强度和量度

、机

能状态等等。➢

正常人终尿中的蛋白质含量极少,24h尿中排出的总

量约为20-80mg,平均40mg,一般定性实验为阴性。

当尿内蛋白增多,用常规定性方法检查为阳性或定量

检查超过每24小时150mg时称为蛋白尿。

4

实验原理与应用➢

运动员的尿蛋白含量与正常人含量无差别

。

由于运动而使尿中

蛋白质量增多的现象称为运动性蛋白尿

。运动后尿蛋白可以作

为评定运动员运动负荷强度和量度

、

身体机能状态及对训练负

荷适应情况的指标

。运动性蛋白尿在运动后能迅速地自行复原，

不同于病理性蛋白尿。➢

在评定运动负荷时

，

运动强度越大

，

尿蛋白生成量越多

。在运

动实践中应用尿蛋白指标

，

也可以评定运动后的恢复情况

。评

定恢复状态时有以下情况:①运动后4h或次日晨恢复到正常

植

，

说明机能恢复

。②次日晨还处于较高水平

，

说明机能未恢

复

。

总之

，

通过测定运动后尿蛋白的排泄量

，

可以用来评定运

动量

，

特别是运动强度和运动员机能状态

，

为训练课的负荷调

整

，

掌握运动员机能状态提供参考。

5实验参考方案⑴实验对象：

实验对象为运动人体科学专业学生10名

，

采用功率自行车进行大强度运动训练建立运动实验模

型。⑵运动训练方案：

运动模型的建模

，

采用功率自行车进

行大强度运动训练（运动方案可自行设计)。

持续运

动30min，

运动强度由心率控制

，

为实验对象最大心

率达85-95％

。

⑶实验方法与步骤①尿蛋白磺基水杨酸比浊法：磺基水杨酸为生物碱性剂

，

在酸性条件下

，

磺基水杨酸的负

离子与带正电的蛋白质结合成不溶性的蛋白质盐而显混浊

。

在一定范围内

，

其混浊度与蛋白质的含量成正比

，

通过与标

准蛋白液比较

，

可求得尿中蛋白质含量

。为在运动实践中普

及应用

，

将玻璃研磨成细粉末配制成系列浓度的混浊液

，

以代替标准蛋白比浊管

，

分别相当于10，20，30……mg%蛋白，用管径相同的小试管封固

，

备用

。3%磺基水杨酸溶液：

称

取A.R纯品磺基水杨酸3.0g和无水硫酸钠7.0g，

以蒸馏水

溶解至100ml，

必要时过滤备用

。取与标准比浊管口径一

致的小试管加入待测尿溶液0.5ml，

然后加入磺基水杨酸

试剂1.5ml，

混匀后与系列标准管比浊即可。

②尿中葡萄糖邻甲苯胺法：➢

葡萄糖在热醋酸溶液中与邻甲苯胺缩合产生蓝绿色的Schiff碱

，

颜色深浅与葡萄糖含量成正比。➢

邻甲苯胺显红棕色

，

则应重蒸馏

，

收集199-201℃的馏出物，

馏出液微带黄色

。蒸馏时弃去首尾部分

。

向蒸馏所得之邻甲

苯胺中按每500ml加入0.5g盐酸羟胺

，

置56℃水浴中加温

，

不断振摇

，

使其溶解

，

置棕色瓶中塞贮冰箱中备用。➢O-TB试剂（邻甲苯胺显色剂)：

在清洁的1000ml容量瓶中，

加入硫脲1.5g，

加冰醋酸约400-500ml使其溶解

，

溶解后加

入60ml经上述处理的邻甲苯胺

，

再加饱和硼酸溶液40ml，

然后用冰箱醋酸加至1000ml刻度

，

摇匀

，

贮于棕色瓶中。➢

饱和硼酸溶液：

称取硼酸6g，

加蒸馏水至100ml，

置室温数

日

，

取上清液应用。

➢

葡萄糖标准贮备液（10mg/1ml)：

取无水纯葡萄糖（A.R)2-3克

，

置于洁净的烧杯内

，

在40-50℃干燥箱中

烘干至恒重

，

置于干燥器中保存

。准确称取烘干的葡萄糖1.000g，

加约50ml0.25%安息香酸溶液溶解

，

倒入100ml容量瓶中

，

用0.25%安息香酸溶液稀释至刻度

，

置冰箱

中保存。➢

葡萄糖标准应用液（1ml含1mg)：

将葡萄糖标准贮备液

用0.25%安息香酸溶液稀释10倍即成。➢0.25%安息香酸溶液：

称取安息香酸2.5g，

加蒸馏水使溶

解后

，

倒入1000ml容量瓶中

，

用蒸馏水稀释至刻度

。将24h尿液充分混匀

，

量取总尿量

。再取0.1ml尿液

，

按

表3-23进行操作：O-TB试剂5.0表3-235.0各管置沸水浴中5min

，

取出置自来水中冷却3min在630nm处以蒸馏水调零测定各管OD值标准管—0.1测定管0.1—待测尿液葡萄糖标准液单位:ml⑴实验结果：➢

运动后排除尿蛋白平均为0.089g，

及尿糖显著升高到0.3g，

与运动前比较两者差异都具有统计学

意义（P<0.05)。

6实验报告（实验结果与分析)内容⑵实验结果分析➢

运动后排除尿蛋白升高的原因是,剧烈运动时,由于血液的重新分配而使肾血流量减少,血液

中H+增加,促使肾小球透性增加,而造成一过

性蛋白尿

。如果不伴有其他症状(血尿,腰肾区

疼痛,全身无力等),且在运动结束8小时后尿

蛋白即呈阴性,这就是运动性蛋白尿,否则为

病理性蛋白尿。

➢

正常人尿中葡萄糖含量极微

，

尿糖呈阴性反应

。但在剧

烈运动以后

，

尿中常出现葡萄糖

，

呈阳性反应

。运动后

尿中出现糖

，

其原因可能是运动时

，

肾上腺分泌增加，血糖上升

，

当升高超过肾糖阈时（160mg/100ml)，

尿

中出现葡萄糖

，

运动时

，

也可能由于肾脏缺血

，

缺氧，肾功能下降

，

影响原尿中葡萄糖的重吸收而出现运动性

糖尿

。运动员在赛前

，

教练员在指导比赛时

，

也可能出

现糖尿

，

这是由于情绪紧张而引起肾功能的改变

，

属情

绪性糖尿

。糖尿病人

，

尿中也有葡萄糖

，

这是由于胰岛

素分泌不足或缺乏所致。

⑴设计运动方案