生物制品热原限值确定指南（试行）

生物制品热原限值确定指南（试行）1适用范围本指南适用于我国境内上市的人用生物制品的热原限值确定与管理，涵盖重组蛋白类制品、单克隆抗体、疫苗、血液制品、细胞治疗产品、基因治疗产品、体内诊断用生物制品、抗毒素及抗血清等类别，不适用于体外诊断试剂、完整皮肤外用类生物制剂。热原限值是生物制品放行检验、上市后质量监管的核心安全性指标，所有拟用于人体的可吸收给药途径生物制品均应按本指南要求确定合理的热原限值。2术语与定义2.1热原：指能引起恒温动物体温异常升高的致热性物质，生物制品中热原主要包括革兰氏阴性菌产生的脂多糖类细菌内毒素、工艺残留的宿主细胞致热蛋白、细胞因子类致热杂质、化学合成类致热杂质等，其中细菌性内毒素是热原风险的主要来源。2.2细菌内毒素限值（L）：指单位质量、单位体积或单剂生物制品中允许含有的内毒素最大量，单位通常为EU/mg、EU/ml、EU/剂。2.3热原阈剂量（K）：指健康人群单位体重可耐受的最大不致热内毒素暴露量，单位为EU/kg。2.4最大给药剂量（M）：指临床拟用的单位体重每小时最大给药剂量，单次快速给药时按给药时长1小时计算，持续输注时按24小时累计最大剂量换算为每小时剂量，单位为mg/(kg·h)、ml/(kg·h)、IU/(kg·h)。2.5家兔热原试验：指将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内，观察家兔体温升高情况，判定供试品中热原是否符合规定的方法，适用于存在内毒素检测干扰的生物制品。2.6鲎试验：指利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理检测内毒素含量的方法，包括动态浊度法、显色基质法、凝胶法三类。3基本原则3.1风险优先原则：热原限值确定需优先保障临床用药安全，基于给药途径、适用人群、给药剂量的风险等级设置梯度限值，高风险场景从严要求。3.2科学溯源原则：限值计算需基于经验证的临床最大给药剂量、人群致热阈值数据，避免主观调整，所有取值需留存溯源依据。3.3可操作原则：限值设置需匹配现有检测技术的灵敏度与工艺控制能力，若计算限值低于检测方法定量限，需结合临床安全性数据、工艺控制水平进行合理调整，调整幅度不得超过2倍。3.4叠加防控原则：对于临床常规联合使用的生物制品、复方生物制品，需考虑多组分热原暴露的叠加效应，避免累计暴露超过人群热原阈值。4热原限值核心计算方法生物制品细菌内毒素限值通用计算公式为：L=K/M其中：L为细菌内毒素限值，单位需与给药剂量单位匹配；K为对应人群、给药途径的热原阈剂量，取值规则见第5、6章节；M为单位体重每小时最大给药剂量，取值需符合以下要求：（1）按体重调整给药剂量的制品，M取临床研究中确定的目标人群最大给药剂量，包含负荷剂量、急救场景超剂量使用的最大允许剂量；（2）按固定剂量给药、无体重调整要求的制品，成人用制品按标准体重60kg换算M值，儿科用制品按适用年龄段最小体重换算：新生儿（出生28天内）取3kg，1岁以内婴幼儿取5kg，1-6岁儿童取20kg，7-17岁青少年取40kg；（3）持续输注类制品，M取24小时最大累计给药剂量除以24小时换算为每小时单位体重剂量；（4）按剂给药的疫苗、预充制剂，M按单剂剂量除以对应人群标准体重计算。计算示例：某成人静脉用单抗，临床最大单次给药剂量为20mg/kg，快速静脉推注（给药时长1小时），K值取5EU/kg，则L=5EU/kg÷20mg/(kg·h)=0.25EU/mg。若制品存在鲎试验干扰无法采用内毒素限值管控，需采用家兔热原试验设置限值，要求为：按每公斤家兔体重注射人用最大剂量的1-10倍（静脉给药按1倍，肌内、皮下给药按5-10倍），3只试验家兔中每只体温升高均不超过0.6℃，或3只家兔体温升高总和不超过1.4℃。5不同给药途径限值确定要求5.1血管内给药类包括静脉注射、静脉滴注、动脉注射类制品，为热原最高风险场景之一：（1）普通成人用制品，K值取5EU/kg，该取值基于健康成人静脉注射内毒素致热阈为2-5EU/kg的毒理学数据，取最低安全阈值设置；（2）持续输注超过24小时的制品，K值按每日累计暴露不超过5EU/kg换算，即每小时K值取0.2EU/(kg·h)；（3）血液透析相关制品、体外循环用生物制品，K值取2EU/kg，需考虑累计暴露量。5.2中枢神经给药类包括鞘内注射、硬膜外注射、脑室内注射、眼内注射类制品，因血脑屏障、眼内组织缺乏内毒素清除机制，致热阈值显著降低：（1）所有人群用中枢神经给药制品，K值统一取0.2EU/kg，不得放宽；（2）婴幼儿中枢神经给药制品，K值进一步收紧至0.05EU/kg，避免高热导致神经发育损伤。5.3非血管内注射类包括肌内注射、皮下注射、皮内注射类制品：（1）普通成人用制品，K值取5EU/kg，若单次给药剂量超过10ml，需按静脉给药要求调整K值至2EU/kg；（2）儿科用非血管内注射制品，K值取2EU/kg，降低致热风险。5.4体腔与黏膜给药类包括胸腔注射、腹腔注射、阴道给药、直肠给药、破损皮肤黏膜给药类制品：（1）胸腔、腹腔注射类制品，K值取2EU/kg，需考虑体腔吸收后的全身暴露；（2）破损皮肤、黏膜给药类制品，K值取3EU/kg，若为大面积烧伤用制品，K值调整为1EU/kg；（3）完整皮肤外用类制品，无全身吸收风险的可不设置热原限值。6特殊人群用制品限值调整规则6.1儿科用制品除按最小体重换算M值外，K值需按年龄段下调：（1）新生儿用制品，所有给药途径K值均不得超过1EU/kg，静脉给药K值取0.5EU/kg；（2）1岁以内婴幼儿用制品，K值为普通成人的1/2；（3）若制品同时适用成人与儿科人群，需按儿科人群要求确定限值，不得仅按成人标准设置。6.2免疫低下人群用制品包括肿瘤患者、器官移植患者、HIV感染者、原发性免疫缺陷患者用制品，K值取1EU/kg，避免热原暴露引发严重炎症反应、感染性休克。6.3妊娠与哺乳期用制品K值取2EU/kg，降低热原暴露导致的胎儿致畸、流产、婴幼儿发热风险。6.4急救类制品包括抗蛇毒血清、抗破伤风抗毒素、卒中急救用单抗等，因临床可能使用超常规剂量，K值取2EU/kg，避免大剂量给药时累计热原暴露超标。6.5细胞与基因治疗产品自体、异体细胞治疗产品、基因治疗产品，因适用人群多为终末期患者、给药后不良反应识别难度高，每剂热原限值不得超过5EU，且内毒素含量不得超过0.5EU/ml。7限值验证要求所有确定的热原限值需经过方法学、工艺、临床三重验证，验证资料需作为注册申报资料提交：7.1方法学验证（1）采用鲎试验管控内毒素的制品，需完成干扰试验，证明供试品在最大有效稀释倍数下的内毒素回收率为50%-200%，无基质干扰；（2）采用家兔热原试验的制品，需完成预试验，排除制品本身含有的佐剂、细胞因子等非热原成分导致的体温升高，若预试验中家兔体温升高超过0.3℃的比例超过20%，需调整给药剂量或采用内毒素特异性检测方法替代。7.2工艺验证需连续3批商业化规模生产的制品热原检测结果均低于限值的1/3，证明工艺可稳定控制热原含量，若超过50%批次检测结果位于限值的1/2以上，需优化工艺或收紧限值。7.3临床验证若计算得到的限值低于现有检测方法定量限，或工艺无法稳定达到限值要求，需开展至少100例目标人群的临床热原反应观察：给药剂量为最大临床剂量，给药后3小时内体温升高超过0.5℃的受试者比例不得超过3%，且无受试者体温升高超过1℃，满足该要求的可适当放宽限值，放宽幅度不得超过2倍，且累计热原暴露不得超过对应人群的热原阈值。7.4同品种比对已上市同品种产品的热原限值作为参考值，申报品种限值不得宽于已上市同品种，若需放宽需提供充分的临床安全性数据支持。8联合用药与复方制剂限值考量8.1联合用药对于临床指南明确推荐常规联合使用的生物制品，需计算联合给药时的累计热原暴露，累计暴露不得超过对应人群、给药途径的K值。例如两种静脉给药单抗常规联合使用，单个产品的热原暴露分别为2EU/kg、2EU/kg，累计为4EU/kg，符合普通成人5EU/kg的阈值要求。8.2复方生物制品含两种及以上活性成分的复方生物制品，需分别设定每个活性成分的内毒素限值，同时设定复方制剂的总内毒素限值，总限值需符合对应给药途径、人群的K值要求，不得仅设置单组分限值。8.3疫苗佐剂成分含铝佐剂、MF59等佐剂的疫苗，需考虑佐剂本身的致热效应，热原限值需比无佐剂疫苗收紧2-5倍，避免佐剂与内毒素的致热叠加效应。9上市后限值更新管理生物制品上市后需持续监测热原相关不良反应，出现以下情形时需重新评估并调整热原限值：9.1上市后累计出现3例及以上非个体差异、非操作因素导致的热原反应（体温升高≥1℃伴寒战、呕吐等症状），且经排查排除工艺污染、运输储存不当等因素的，需收紧限值至少20%；9.2临床给药剂量调整，最大给药剂量提升超过20%的，需按新的M值重新计算限值；9.3出现新的毒理学数据，证明对应人群热原阈剂量低于原有取值的，需按新的K值调整限值；9.4检测方法升级，采用更高灵敏度的检测方法（如重组C因子法）的，需结合工艺控制水平适当收紧限值，提升产品安全性。调整后的限值需向监管部门备案，经批准后执行。10限值标示要求生物制品的热原限值需在质量标准、说明书中明确标示，标示方式需与给药方式匹配：10.1按重量/活性给药的制品，采用EU/mg、EU/IU等单位标示；10.2液体制剂按体积给药的，采用EU/ml单位标示；10.3按剂给药的疫苗、预充制剂、细胞治疗产品，采用EU/剂单位标示，同时可标注单位体积限值；10.4适用多种给药途径的制品，需分别标示不同给药途径对应的热原限值。11实施注意事项11.1本指南规定的热原限值为最低准入标准，企业需结合自身工艺控制水平制定更严格的内控标准，内控标准通常需低于法定限值的1/2-1/3，避免批间波动导致产品不合格。11.2热原管控需结合工艺过程控制，不得仅依赖终产品检验，需在原材料采购、生产过程、灌装等环节设置内毒素控制节点，每个节点的内毒素残留需符合过程控制要求。11.3若出现内毒素检测合格但家兔热原试验不合格的情况，需排查非细菌性热原残留，必要时在质量标准中增加家兔热原试验项目，或设置更严格的内毒素限值。11.4对于罕见病用药、临床急需药品，若工艺确实无法达到常规限值要求，可向监管部门提出豁免申请，提交充分的风险获益评估资料，经专家论证后可适当放宽限值。附录A不同给药途径与人群的K值取值参考表给药途径适用人群K值取值（EU/kg）静脉/动脉注射/输注普通成人5静脉/动脉注射/输注新生儿、免疫低下人群1鞘内/脑室内/眼内注射所有人群0.2鞘内/脑室内/眼内注射婴幼儿0.05肌内/皮下/皮内注射普通成人5肌内/皮下/皮内注射儿科人群2胸腔/腹腔注射所有人群2破损皮肤/黏膜给药普通人群3破损皮肤/黏膜给药大面积烧伤患者1持续静脉输注（≥24h）所有人群0.2/(kg·h)示例1：成人用乙肝疫苗，单剂0.5ml，肌内注射，按60kg标准体重计算，K值取5EU/kg，M=0.5ml/60kg，L=5EU/kg÷(0.5ml/60kg)=600EU/剂，因含铝佐剂采用家兔热原试验，限值为每只家兔注射1剂，3只家兔体温升高总和≤1.4℃。示例2：新生儿用静脉注射免疫球蛋白，单次给药剂量1g/kg，K值取0.5EU/kg，L=0.5EU/kg÷1000mg/kg=0.0005EU/