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文档简介
用硫代修饰的磷酸中的一种或多种;R3包括甲基、23或a_3)当所述寡核苷酸链底物为单条时,利用聚合酶催化权利415.根据权利要求14所述的制备方法,其特征在于,所述第一溶液中的溶质的浓度为16.权利要求1~2中任一项所述的核苷单体类似物、或权利要求3~4中任一项所述的核5[0006]本发明的主要目的在于提供一种核苷单体类似物、寡核6[0016]根据本申请的第三个方面提供了一种具有3’端可逆修饰端的寡核苷酸的合成方述的核苷酸单体类似物;将第一寡核苷酸链底物和第二寡核苷酸链底物连接,获得具有3’底物为单条时,利用聚合酶催化R2为三磷酸的核苷单体类似物连接至寡核苷酸链底物的3’7述核苷酸单体类似物,利用连接酶催化第一寡核苷酸链底物和第二寡核苷酸链底物连接,[0033]图1示出了根据本发明实施例11的反应体系1连接磷酸的两种产物UPLC检测结果8[0048]本申请利用式I所示的结构式的核苷单体类似物能够在酶法合成寡核苷酸的体系[0049]即本申请开发了一种与现有技术不同的新的可逆封端,当反应中存在上述的端可逆封端存在关联而导致的底物转化率低的现象时,本申请提供了多种可逆封端的选9述的核苷酸单体类似物;将第一寡核苷酸链底物和第二寡核苷酸链底物连接,获得具有3’上述的核苷单体类似物,利用连接酶催化第一寡核苷酸链底物和第二寡核苷酸链底物连述核苷酸单体类似物,利用连接酶催化第一寡核苷酸链底物和第二寡核苷酸链底物连接,[0085]本申请利用简单的酸解即可实现寡核苷酸链上偶联的核苷单体3’端可逆修饰端源于裂殖酵母PUP聚合酶,NCBI登录号为NP_594901.1)使其浓度为0.2mg/mL,加入10mM;和其经过合成连接核苷单体类似物的上清液经UPLC检;。[0106]由于第一寡核苷酸片段的3’OH端带有可逆封端修饰,因此理论上仅能检测到[0108]在干净的容器中加入反应体系,使得寡核苷酸链底物(5’HO_Cms_Ams_Gm_Am;[0112]在干净的容器中加入反应体系,使得寡核苷酸链底物(5’HO_Cms_Ams_Gm_Am;[0116]在干净的容器中加入反应体系,使得寡核苷酸链底物(5’HO_Cms_Ams_Gm_Am;;[0124]在干净的容器中加入反应体系,使得寡核苷酸链底物(5’HO_Cms_Ams_Gm_Am;;[0132]在干净的容器中加入反应体系,使得寡核苷酸链底物(5’HO_Cms_Ams_Gm_Am;[0142]三个反应体系合成的寡核苷酸的理论产物分子量分别为1706.53,1720.37,;产生的两种产物1和产物2以及本申请的核[0149]在干净的容器中加入反应体系,使得寡核苷酸链底物(5’HO_Cms_Ams_Gm_Am[0150]第四核苷单体类似物[0151]第五核苷单体类似物一个第五核苷单体类似物的寡核苷酸产物,生成了36%偶联一个第四核苷单体类似物的寡
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