CN119464531A 检测抗性大穗看麦娘的特异性引物组及其lamp试剂盒以及方法 （安徽农业大学）

检测抗性大穗看麦娘的特异性引物组及其本发明涉及一种检测抗性大穗看麦娘的特性引物组包括由正向外引物F3和反向外引物B3组成的第一特异性引物对，以及由正向内引物本发明提供的特异性引物组能够很好的用于检是否存在Ile_1781_Thr突变的抗性大穗看麦娘2正向外引物F3和反向外引物B3组成的第一特异性引物对，以及由正向内引物FIP和反向内所述正向内引物FIP的核苷酸序列为：5’CCGTCCAGTAACAAATGTAAGTGTAGTGCTG所述反向内引物BIP的核苷酸序列为：5’CCTATCTTGCTCGACTTGGCATGTTCAGGGC2.一种检测抗性大穗看麦娘的LAMP试剂盒，其特征在于，异性引物对与所述第二特异性引物对的质量比为1L，正向内引物FIP的浓度为35μmol/L_45μmol/L，反向内引物BIP的浓度为35μmol/L_45μ将所述模板DNA与如权利要求1所述的特异性引物组配置形成所述模板DNA与如权利要求2_5任一项所述的LAMP试剂盒配置形成LAMP反应8.根据权利要求6或7所述的抗性大穗看麦娘的检测方或者，将所述LAMP反应体系进行扩增反应的步骤分为两9.根据权利要求6或7所述的抗性大穗看麦娘的检34[0003]精噁唑禾草灵(fenoxaprop_P_ethyl)属于乙酰辅酶A羧化酶(acetyl_CoA是导致大穗看麦娘对精噁唑禾草灵等除草剂产生抗性的主要突变5[0013]在其中一个实施例中，所述LAMP试剂盒中，正向外引物F3的浓度为3μmol/L_7μmol/L，反向外引物B3的浓度为3μmol/L_7μmol/L，正向内引物FIP的浓度为35μmol/L_45μ[0014]在其中一个实施例中，所述LAMP试剂盒中还包括有IsothermalAmplification4模板DNA与如上所述的LAMP试剂盒配置形成LAMP反应×的IsothermalAmplificationBuffer，0.8mmol/L的dNTPs，14mmol/L_22mmol/L的MgSO4[0026]由此，本发明提供的特异性引物组能够很好的用于检测田间抗性大穗看麦娘种6[0029]图2为本发明实施例1中应用LAMP试剂盒检测抗性大穗看麦娘在正常光下检测结[0030]图3为本发明实施例1中测试抗性大穗看麦娘检测方法灵敏度的电泳图谱，其中，[0031]图4为本发明实施例1中测试抗性大穗看麦娘检测方法灵敏度的正常光下检测结_10ng/μL的具有Ile_1781_Thr突变的抗性大穗看麦娘DNA，CK为未加DNA的这些实施方式或实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解[0035]本发明以GenBank数据库中未发生突变的敏感大穗看麦娘乙酰辅酶A羧化酶7看麦娘，由于本发明提供的特异性引物组能够特异性识别抗性大穗看麦娘ACCase基因的6[0041]由此，本发明提供的特异性引物组能够很好的用于检测田间抗性大穗看麦娘种物对与所述第二特异性引物对的质量比优选为μmol/L_7μmol/L，反向外引物B3的浓度为3μmol/L_7μmol/L，正向内引物FIP的浓度为35μ[0045]在一实施方式中，检测抗性大穗看麦娘的LAMP试剂盒中还包括Isothermal[0047]本发明提供的检测抗性大穗看麦娘的LAMP试剂盒能够快速且特异性的检测出具8中，以25μL的上述LAMP反应体系的体积计，其中，包括浓AmplificationBuffer，0.8mmol/L的dNTPs，14mmol/L_22mmol/L的MgSO4，0.32mol/L_[0063]本发明提供的抗性大穗看麦娘的检测方法能够快速且特异性的检测出具有Ile_9[0067]以抗精噁唑禾草灵大穗看麦娘ACCase基因第1781位氨基酸由Ile突变为Thr的L浓度为100mmol/L的MgSO4[0082]通过上述优化，得到LAMP试剂盒最佳体系为：10×isothermalamplification化后的LAMP试剂盒，以含有Ile_1781_Thr突变的抗性大穗看麦娘的基因组DNA作为模板[0085]上述LAMP试剂盒检测抗性大穗看麦娘的电泳图谱如图1所示，LAMP试剂盒检测抗[0086]上述测试抗性大穗看麦娘检