65　选择性必修3　第九单元　第52讲　动物细胞工程

一堂一案第52讲动物细胞工程选择性必修3生物技术与工程第九单元生物技术与工程课标要求1．阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。2．阐明动物细胞核移植一般是将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中，并使重组细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的过程。3．阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。4．概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。5．简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值考情分析1．动物细胞培养2025·广东卷T5 2025·广西卷T6

2025·安徽卷T14 2025·江西卷T32025·湖北卷T6 2024·浙江1月卷T132024·黑吉辽卷T142．动物细胞融合技术与单克隆抗体2025·甘肃卷T16 2025·贵州卷T16

2024·江西卷T16 2024·海南卷T72023·辽宁卷T7 2023·北京卷T122022·山东卷T15 2022·福建卷T133．动物体细胞核移植技术2025·重庆卷T4 2025·山东卷T14考点1动物细胞培养一、填空表述1．(人教版选择性必修3P43)一般来说，动物细胞培养需要满足以下条件：温度2．(人教版选择性必修3P44)在体外培养细胞时，培养液还需要定期更换，以便清除代谢物，防止_____________________________________________。3．(人教版选择性必修3P44)细胞贴壁：_____________________________________。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会________________的现象。细胞代谢物积累对细胞自身造成危害细胞贴附在培养瓶的瓶壁上的现象停止分裂增殖4．(人教版选择性必修3P45)人们通常将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为____________。将分瓶后的细胞培养称为____________。贴壁细胞需要重新用____________等处理，使之分散成单个细胞，然后再用__________收集。之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。5．细胞在培养过程中分裂受阻的原因：___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。原代培养传代培养胰蛋白酶离心法悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻；对于贴壁细胞来说，除上述因素外，还会因为接触抑制而停止分裂增殖6．(人教版选择性必修3P46)在一定条件下，干细胞可以分化成其他类型的细胞。干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括__________________________等。7．动物细胞培养一般用________培养基，植物组织培养一般用________培养基。胚胎干细胞和成体干细胞液体固体2．营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制。 (

)提示：胚胎干细胞培养时，需要一定浓度的CO2，CO2的作用是维持培养液的pH。二、概念检测1．在没有CO2的有氧环境中进行胚胎干细胞培养。 (

)提示：营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞也会发生接触抑制。提示：高温会使血清含有的促进细胞生长和增殖所需要的营养物质失活，而使培养的动物细胞生长缓慢等。3．进行动物细胞培养时，血清应经过高温处理后加入培养基。 (

)4．将特定基因或特定蛋白导入已分化的T细胞，可将其诱导形成iPS细胞。(

)×××√(人教版选择性必修3P44～45正文及P45图2-12)干细胞的成功培养是动物细胞培养领域的重要成就之一，许多科学家投入相关的研究中。下图为动物细胞培养过程中，细胞数量的指数变化示意图。回答下列问题：(1)动物体的干细胞包括胚胎干细胞和__________，后者的特点是_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)动物细胞培养一般会选用幼龄动物的器官或组织进行细胞培养，原因是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)从图上可以看出，随着细胞传代次数增加，传代的间隔时间______________(填“显著变大”“显著变小”或“基本相等”)，随着培养时间的增加，悬浮培养的细胞会出现细胞分裂受阻的现象，其原因是_________________________________________________________________________________________(答出三点即可)。(4)图中无限细胞系是由许多能无限增殖的细胞组成的，试分析无限细胞系形成的根本原因是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________。提示：(1)成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞和组织，不具有发育成完整个体的能力(2)幼龄动物的器官或组织的分裂能力强(3)基本相等细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素(答出三点即可)(4)传代培养的细胞遗传物质发生改变，细胞获得不死性，能无限增殖考向1动物细胞培养1．(链接人教版选择性必修3P45图2-12)某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。下列叙述错误的是(

)

A．图中所示过程为传代培养B．①中消化液可以替换成胃蛋白酶C．②中培养液需加入血清，有利于促进细胞增殖D．若细胞不再出现接触抑制，细胞可能发生了癌变√B

[动物组织经处理后的初次培养称为原代培养，图示是将分瓶后的细胞培养，称为传代培养，A正确；胃蛋白酶的最适pH为1.5，在培养环境中失活，通常用胰蛋白酶处理贴壁细胞，B错误；由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在使用合成培养基时，通常需要加入血清等一些天然成分，C正确；贴壁细胞在生长增殖到表面相互接触时通常会停止分裂增殖，即接触抑制，而癌细胞的接触抑制现象丧失，D正确。]2．(2025·广东卷)将人眼睑成纤维细胞传代培养后，再培养形成支架，在该支架上接种人口腔黏膜上皮细胞，培养一段时间后分离获得上皮细胞片层，可用于人工角膜的研究。上述过程不涉及(

)A．制备细胞悬液B．置于5%CO2等适宜条件下培养C．离心收集细胞D．用胰蛋白酶消化支架后分离片层√D

[动物细胞培养时，为增大细胞与培养液的接触面积，需要制备细胞悬液，A正确；置于5%CO2等适宜条件下培养，其中5%的CO2可维持培养液的pH，B正确；在成纤维细胞传代培养过程中需要通过离心收集细胞，C正确；不用胰蛋白酶消化支架，避免将上皮细胞片层分离成单独细胞，D错误。]考向2干细胞培养及其应用3．(链接人教版选择性必修3P46相关信息)诱导多能干细胞(iPS细胞)在生物医药领域有广阔的应用前景。研究人员利用多种小分子化合物协同诱导小鼠胎儿成纤维细胞，成功获得iPS细胞。下列叙述错误的是(

)A．小分子化合物改变了小鼠胎儿成纤维细胞的基因表达B．小鼠胎儿成纤维细胞形成iPS细胞的过程属于细胞分化C．利用胰蛋白酶处理小鼠胎儿某些组织可获得分散的成纤维细胞D．培养小鼠胎儿成纤维细胞和iPS细胞时需提供一定浓度的CO2√B

[小分子化合物通过调控基因表达使成纤维细胞重编程为iPS细胞，改变了原有基因表达模式，A正确；成纤维细胞形成iPS细胞的过程是去分化，而非细胞分化，B错误；胰蛋白酶可分解细胞间质蛋白，使组织分散为单个细胞，符合动物细胞培养操作，C正确；动物细胞培养通常需要5%CO2以维持培养液的pH，成纤维细胞和iPS细胞培养均需此条件，D正确。]一、填空表述1．(人教版选择性必修3P48)动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同。诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和__________________等。2．(人教版选择性必修3P48)细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使____________成为可能。考点2动物细胞融合技术与单克隆抗体灭活病毒诱导法远缘杂交3．制备单克隆抗体需要的技术手段：动物细胞融合和动物细胞培养。制备单克隆抗体的原理：____________________________。4．第一次筛选的目的是筛选出______________，方法是用特定的选择培养基培养。经过筛选后未融合的细胞或融合后具有同种核型的细胞都会死亡，只有____________________才能生长。5．第二次筛选的目的是筛选出_____________________________，方法是________________。细胞膜的流动性和细胞增殖杂交瘤细胞融合的杂交瘤细胞能产生所需抗体的杂交瘤细胞专一抗体检验6．(人教版选择性必修3P50)单克隆抗体的优点是_______________________________________________________，并且可以大量制备。7．与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞(含浆细胞)__________(填“需要”或“不需要”)通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是________________________________________________________________。能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合不需要

使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合二、概念检测1．有的病毒经过灭活处理后，可用于细胞工程中介导动物细胞的融合。 (

)2．利用抗原—抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞。 (

)3．胰高血糖素受体单克隆抗体(mAb)的制备可能涉及细胞融合技术。 (

)4．抗体—药物偶联物通常由抗体、接头、药物(如细胞毒素)三部分组成。 (

)√√√√(人教版选择性必修3P48～49图2-16、P50思考·讨论)长春新碱(VCR)能够干扰肿瘤细胞的有丝分裂，也会影响正常细胞的增殖，导致药物副作用的发生。H18杂交瘤细胞产生的抗人肝癌单克隆抗体(HAb18)对于人体肝癌的诊断和靶向治疗具有重要的意义。回答下列问题：(1)HAb18的制备依赖的生物技术有__________________________。制备过程中，首先需要向小鼠体内注射肝癌细胞悬液，其目的是_________________________________________________________。(2)将VCR与抗人肝癌单克隆抗体HAb18通过接头连接形成抗体—药物偶联物(ADC)，可实现对肝癌细胞的特异性杀伤。ADC中的抗体的作用是_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)单克隆抗体被广泛用作诊断试剂的原因是______________________________________________________________________________________________________________________________________。提示：(1)动物细胞培养、动物细胞融合刺激机体发生免疫应答，从而得到能产生HAb18的B淋巴细胞(2)发挥靶向运输作用，携带VCR与肝癌细胞特异性结合(3)单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差别，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备考向1动物细胞融合技术1．(链接人教版选择性必修3P48正文)科研人员诱导A、B两种动物细胞融合并进行培养(仅考虑两两融合)。据A、B两种细胞的生活环境(下表)以及融合细胞只能生长在选择培养基Ⅱ上，生长环境的pH为4～6的事实，分析下列说法正确的是(

)A细胞只能在选择培养基Ⅰ上生长，生长环境的pH为4～6B细胞只能在选择培养基Ⅱ上生长，生长环境的pH为7～8A．动物细胞培养使用的培养基都是天然培养基B．PEG融合法和高Ca2+－高pH融合法均可诱导两种细胞融合C．将融合后的细胞置于CO2培养箱以维持培养液的pH在7～8D．选择培养基Ⅱ上存活下来并生长的细胞不一定是目标融合细胞√D

[动物细胞培养使用的培养基都是合成培养基，A错误；A细胞和B细胞生长环境对pH有要求，不可用高Ca2+－高pH融合法，B错误；CO2的主要作用是维持培养液的pH，将融合后的细胞置于CO2培养箱以维持培养液的pH在4～6，C错误；选择培养基Ⅱ上生存下来的有融合细胞和B细胞，不一定是目标融合细胞，D正确。]考向2单克隆抗体的制备及应用2．(不定项)(2025·黑吉辽蒙卷)如图是制备抗白细胞介素-6(IL-6)单克隆抗体的示意图。下列叙述错误的是(

)A．步骤①给小鼠注射IL-6后，应从脾中分离筛选T淋巴细胞B．步骤②在脾组织中加入胃蛋白酶，制成单细胞悬液C．步骤③加入灭活病毒或PEG诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性D．步骤④经过克隆化培养和抗体检测筛选出了杂交瘤细胞√√√ABD

[本实验的目的为制备抗IL-6单克隆抗体。步骤①：用IL-6对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞，A错误。步骤②：在脾组织中加入胰蛋白酶或胶原蛋白酶，制成单细胞悬液；胃蛋白酶的适宜pH为1.5，而动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，在此环境下胃蛋白酶会失活，B错误。步骤③：诱导骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合，可以用灭活病毒或PEG诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性，C正确。步骤④：目的是筛选出杂交瘤细胞，应通过特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才会生长；步骤⑤：经过克隆化培养和抗体检测筛选出能分泌特定抗体的杂交瘤细胞，D错误。]3．(2025·陕西咸阳月考)抗体—药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素与单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC组成及作用机制如图，下列叙述错误的是(

)

A．使用ADC能减轻对正常细胞的伤害B．抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞可用于生产单克隆抗体C．选择性杀伤肿瘤细胞利用了单克隆抗体特异性强的特点D．溶酶体裂解后释放的药物会促使肿瘤细胞坏死√D

[ADC是将细胞毒素与单克隆抗体结合，能实现对肿瘤细胞的选择性杀伤，可以减轻对正常细胞的伤害，A正确；抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞，说明产生的抗体能和某抗原发生特异性结合，可用于生产单克隆抗体，B正确；单克隆抗体具有特异性强的特点，ADC正是利用这一特点，使得细胞毒素能够精准作用于肿瘤细胞，实现对肿瘤细胞的选择性杀伤，C正确；从图中可以看出，溶酶体裂解后释放的药物促使肿瘤细胞发生的是细胞凋亡，D错误。]归纳提升单克隆抗体制备过程中两次筛选的原因、方法及目的项目第一次筛选第二次筛选筛选原因诱导融合后会得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞项目第一次筛选第二次筛选筛选方法用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞都会死亡，只有杂交瘤细胞才能生长用多孔培养板培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞一、填空表述1．“去核”是去除________________________。重构胚是指人工重新构建的胚胎，具有________________________。2．(人教版选择性必修3P54)目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是______________。也有人采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。考点3动物体细胞核移植技术和克隆动物纺锤体—染色体复合物发育成完整个体的能力显微操作法3．选择去核卵母细胞作为受体细胞的原因：(1)营养丰富；(2)体积大，易操作；(3)__________________________________。4．与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是_______________________________________________________________________________________________。含有激发细胞核全能性表达的物质动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难2．在克隆哺乳动物过程中，通常作为核移植受体细胞的是去核的初级卵母细胞。 (

)二、概念检测1．克隆牛技术涉及体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植等过程。

(

)提示：在克隆哺乳动物过程中，通常选择减数分裂Ⅱ中期的去核卵母细胞作为受体细胞，即次级卵母细胞。3．猴的核移植细胞通过胚胎工程已成功地培育出了克隆猴。 (

)4．体细胞核移植时，去核卵母细胞的“核”是指纺锤体—染色体复合物。 (

)√×√√2019年1月24日，5只生物钟紊乱体细胞克隆猴登上中国期刊《国家科学评论》封面，标志着中国体细胞克隆技术走向成熟。利用这项技术可批量生产实验用疾病模型猴。如图是体细胞克隆猴的培育过程，请回答下列问题：(1)在将体细胞的核移植到卵母细胞之前，必须先对卵母细胞进行去核操作的原因是_____________________________________________________________________________________________________。(2)研究人员将体细胞与去核卵母细胞融合前，用灭活的仙台病毒进行了短暂处理，灭活的仙台病毒所起的作用是__________________。这一步骤比将体细胞核注入去核卵母细胞要好，原因是__________________________________________________________________________________________________________。(3)体细胞与去核卵母细胞融合形成重组细胞后，需用组蛋白去甲基化酶Kdm4d等物质进行融合激活处理，使其发育成克隆胚胎。Kdm4d等物质的作用是_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)上述体细胞核移植技术培育的克隆动物，不是对细胞供体动物进行了100%复制，原因是______________________________________________________________________________________________。提示：(1)使核移植的胚胎或动物的核遗传物质全部来自体细胞供体动物(2)诱导细胞融合操作简便，对卵母细胞损伤小(3)降低组蛋白的甲基化水平(4)克隆动物细胞核中的DNA来自供体细胞核，线粒体中的DNA来自受体卵母细胞，另外，生物的性状还受环境的影响考向动物体细胞核移植技术及应用1．(2025·黑吉辽蒙卷)研究显示，约70%的小鼠体细胞核移植胚胎未能成功发育至囊胚期，且仅有约2%的胚胎移植到代孕母鼠后可正常发育。下列叙述错误的是(

)A．体细胞核进入去核的MⅡ期卵母细胞形成重构胚B．移植前胚胎发育率低，可能是植入的体细胞核不能完全恢复分化前的功能状态C．胚胎移植到代孕母鼠后成活率低，可能是早期胚胎未能及时从滋养层内孵化D．为提高胚胎成活率，可用胚胎细胞核移植代替体细胞核移植√C

[体细胞核移植是将体细胞的核注入去核的MⅡ期卵母细胞中形成重构胚，A正确；移植前胚胎发育率低，一方面可能是植入的体细胞核不能完全恢复分化前的功能状态，另一方面可能是对动物胚胎进行操作的技术尚不完善，B正确；早期胚胎是在透明带内进行孵化的，C错误；动物胚胎细胞分化程度低，表达全能性相对容易，为提高胚胎成活率，可用胚胎细胞核移植代替体细胞核移植，D正确。]2．(人教版选择性必修3P55概念检测T2改编)2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用如下技术路线。据图分析，下列叙述正确的是(

)

A．图中的核心技术是核移植，但涉及基因编辑，会带来伦理问题B．该技术可有效治疗镰状细胞贫血症等因遗传物质改变而引起的疾病C．图中细胞在体外培养时，需置于含95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中D．“三亲婴儿”的外貌特征只与提供细胞核的父母相似，与提供细胞质的女性无关√C

[“三亲婴儿”技术主要是通过核移植等技术，将不同个体的细胞核和细胞质进行组合，从而实现生殖目的，此过程未对基因进行编辑操作，所以不会因基因编辑带来伦理问题，A错误。“三亲婴儿”技术主要是为了避免母亲线粒体中的致病基因传递给后代，主要解决的是线粒体遗传病问题，而镰状细胞贫血症是核基因控制的遗传病，该技术不能有效治疗镰状细胞贫血症等因核基因改变而引起的疾病，B错误。图中细胞在体外培养时，需置于含95%空气和5%CO2

的混合气体的CO2

培养箱中。其中，O2

是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH，C正确。“三亲婴儿”的细胞核基因来自母亲B和父亲C，细胞质基因来自捐献者A，因此其外貌特征与提供细胞核的父母和提供细胞质的女性都有关，D错误。]121．(2025·广东部分学校联考)CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)因具有高效表达外源蛋白的能力，被广泛用于抗体药物的大规模生产。培养CHO细胞时，常采用悬浮培养体系，下列有关CHO细胞悬浮培养的叙述，错误的是(

)A．每次进行传代培养前需用胰蛋白酶处理以分散组织细胞B．悬浮培养可使细胞与营养物质充分接触，利于细胞生长C．应将细胞置于5%的CO2和95%的空气的气体环境中培养D．动物细胞培养基上除加入适当的营养物质外还需加入血清题号1352468791011智慧分层作业(五十二)动物细胞工程√12题号1352468791011A

[CHO细胞采用悬浮培养，传代时无需胰蛋白酶处理，直接离心分瓶即可，而胰蛋白酶用于贴壁细胞的分散，A错误；悬浮培养时细胞处于游离状态，与培养液接触更充分，利于吸收营养和排出代谢废物，B正确；动物细胞培养需5%CO2以维持培养液的pH稳定，C正确；动物细胞培养基需添加血清等天然成分，提供生长必需物质如激素和生长因子，D正确。]12题号13524687910112．(2025·湖北卷)利用犬肾细胞MDCK扩增流感病毒，生产流感疫苗，具有标准化、产量高等优点。但MDCK细胞贴壁生长的特性不利于生产规模的扩大，严重制约疫苗的生产效率。研究人员通过筛选，成功获得一种无成瘤性的(多代培养不会癌变)、可悬浮培养的MDCK细胞——XF06。下列叙述错误的是(

)A．XF06悬浮培养可提高细胞密度，进而提升生产效率B．细胞贴壁生长特性的改变是由于流感病毒感染C．可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒D．采用无成瘤性细胞生产疫苗，是为了避免疫苗中有致瘤DNA的污染√12题号1352468791011B

[根据题意，与贴壁生长的细胞培养相比，XF06悬浮培养能更充分利用空间，有利于提高细胞密度，从而提升生产疫苗的效率，A正确；细胞贴壁生长特性的改变是筛选的结果，不是流感病毒感染导致的，B错误；在细胞裂解液中，流感病毒和其他细胞裂解物的密度、质量等性质不同，可采用离心技术从感染病毒的细胞裂解液中分离出流感病毒，C正确；根据题意可知，无成瘤性MDCK细胞经多代培养不会发生癌变，采用无成瘤性细胞生产疫苗，能避免疫苗中有致瘤DNA的污染，D正确。]123．(2025·广东深圳期中)间充质干细胞(MSCs)具备较强的自我更新能力，且维持未分化状态。体外培养时，利用诱导因子处理可以将MSCs诱导分化形成肝细胞，以治疗肝损伤。下列叙述正确的是(

)A．MSCs属于成体干细胞，分化为肝细胞的过程体现了全能性B．体外培养MSCs时需向培养箱中添加95%的O2和5%的CO2C．诱导因子激活了MSCs内特定基因的表达D．MSCs通过减数分裂实现细胞的自我更新题号1352468791011√12题号1352468791011C

[MSCs分化为肝细胞仅形成单一类型细胞，未发育为完整个体，未体现细胞的全能性，A错误；动物细胞培养的气体环境为5%的CO2和95%空气，而非95%O2，B错误；诱导因子通过调控基因的选择性表达，激活MSCs中与肝细胞相关的特定基因，促进其分化，C正确；MSCs通过有丝分裂实现自我更新，减数分裂仅用于生殖细胞形成配子，D错误。]124．(2025·甘肃卷)肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一种细胞因子，高浓度时可以引发疾病。研究者利用细胞工程技术制备了TNF-α的单克隆抗体，用于治疗由TNF-α引发的疾病，制备流程如下图。下列叙述正确的是(

)A．①是从小鼠的血液中获得的骨髓瘤细胞B．②含未融合细胞、同种核及异种核融合细胞C．③需用特定培养基筛选得到大量的杂交瘤细胞D．④需在体外或小鼠腹腔进行克隆化培养和抗体检测题号1352468791011√12题号1352468791011B

[从小鼠的血液中不能获得骨髓瘤细胞，A错误；B细胞和骨髓瘤细胞的融合是随机的，可能有些细胞不发生融合，有些两两融合，有些多个融合，有同种核融合细胞，也有异种核融合细胞，B正确；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，但不能得到大量的杂交瘤细胞，C错误；克隆化培养和抗体检测都是在96孔板上进行，D错误。]125．(2025·贵州卷)下图为PML蛋白单克隆抗体的制备过程。下列叙述正确的是(

)题号135246879101112题号1352468791011A．应使用总蛋白进行多次免疫且每次免疫间隔适宜时间B．W细胞是先提取B淋巴细胞再用PML蛋白免疫而获得C．步骤2的目的是去除不能产生特异性抗体的细胞D．应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体√12题号1352468791011D

[PML蛋白单克隆抗体的制备过程，应用PML蛋白作为抗原间隔多次免疫小鼠，目的是获得更多的能产生PML蛋白抗体的B淋巴细胞，A错误；W细胞是先用PML蛋白免疫而获得相应的B淋巴细胞，后通过筛选提取能产生单一抗体的B淋巴细胞，B错误；根据题意可知，步骤1是诱导W细胞与骨髓瘤细胞融合，步骤2是利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，C错误；根据电泳结果可知应选择孔2中的细胞进行后续处理以制备单克隆抗体，因为孔2中的细胞能特异性产生高密度PML蛋白，D正确。]126．(2025·广东深圳期末)为研究治疗性克隆能否用于帕金森病的治疗，科研人员利用人帕金森病模型鼠进行如图所示实验。下列说法错误的是(

)

A．过程①～⑤利用并体现了动物细胞核的全能性B．鼠皮肤细胞在进行①过程前可用灭活的病毒处理C．在过程③和④中都体现了基因的选择性表达D．受体小鼠应该不需要注射相应的免疫抑制剂题号1352468791011√12题号1352468791011A

[治疗性克隆的原理是动物细胞核具有全能性，但本实验只分化出了神经元，并未体现出细胞核的全能性，A错误；鼠皮肤细胞需要与去核卵母细胞进行细胞融合，用灭活的病毒处理可促进该过程，B正确；细胞的分裂、分化等生命活动中都是部分基因在表达，过程③和④都体现了基因的选择性表达，C正确；治疗性克隆由体细胞提供细胞核进行细胞核移植，避免免疫排斥是其目的之一，因此鼠皮肤细胞应该取自受体小鼠，受体小鼠不排斥此神经元，不需要注射免疫抑制剂，D正确。]127．(2025·广东佛山模拟)2024年2月，我国科研人员首次采用体细胞核移植技术对现存藏羊群体中的优良个体进行种质复原保存，并用于良种藏羊高效繁育，选择优良欧拉型良种公羊和湖羊母羊，顺利培育了“克隆藏羊”，基本过程如图所示。下列相关分析正确的是(

)

A．甲羊为湖羊母羊，采集其卵母细胞在体外培养到MⅡ期后去核B．③过程通常采用的诱导方法是PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法等C．④过程依次经历囊胚、桑葚胚、原肠胚等发育阶段D．丁羊为克隆藏羊，其遗传物质全部来自乙羊，性状与乙羊一致题号1352468791011√12题号1352468791011A

[甲提供卵细胞细胞质，因此为湖羊母羊，采集其卵母细胞在体外培养到MⅡ期后去核，A正确；③过程为细胞核与细胞质融合，通常采用电融合法，灭活病毒诱导法是诱导细胞融合的方法，B错误；④过程依次经桑葚胚、囊胚、原肠胚等发育阶段，C错误；丁羊为克隆藏羊，其核遗传物质来自乙羊，质遗传物质来自甲羊，D错误。]12题号13524687910118．(2025·安徽卷)细胞工程技术已在生物制药和物种繁育等领域得到了广泛应用。下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是(

)A．从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞称为传代细胞B．将特定基因或特定蛋白导入已分化的T细胞，可将其诱导形成iPS细胞C．将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融合的细胞即为能分泌所需抗体的细胞D．采用胚胎分割技术克隆动物常选用桑葚胚或囊胚，因这两个时期的细胞未发生分化√12题号1352468791011B

[从动物体内取出组织，用胰蛋白酶处理后直接培养的细胞称为原代细胞，A错误；将特定基因或将特定蛋白导入已分化的T细胞可诱导其形成iPS细胞，B正确；将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，经诱导融合后形成的细胞不一定是能分泌所需抗体的细胞，如骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合形成的细胞，C错误；囊胚期的细胞已开始分化，D错误。]12题号13524687910119．(2025·山东淄博一模)三维细胞培养技术(3D细胞培养)是通过人工模拟细胞间质微环境，允许动物细胞在三维空间中生长和相互作用的技术。与传统的细胞培养相比，3D细胞培养更接近体内细胞的实际生长环境。下列说法正确的是(

)A．传统细胞培养时，细胞并不都需要贴附于某些基质表面才能生长增殖B．用胰蛋白酶处理传统培养的贴壁细胞，断裂其胞间连丝使之游离便于传代C．3D细胞培养前需要对动物组织进行灭菌处理，培养时需定期更换培养液D．利用3D细胞培养技术研究干细胞分化过程时，通常需要进行分瓶处理√12题号1352468791011A

[传统细胞培养时，体外培养的动物细胞可分为两大类：一类细胞能够悬浮在培养液中生长增殖，另一类细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，大多数细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，但并非所有细胞均需要，A正确；胞间连丝是植物细胞间的结构，动物细胞间不存在胞间连丝，B错误；细胞培养过程需要营造无菌、无毒的环境，包括定期更换培养液等，但不能对动物组织进行灭菌处理，C错误；分瓶处理通常是指在传统细胞培养中，当细胞密度过高时，将细胞分散到多个培养瓶中继续培养，而在3D细胞培养中，细胞是在三维结构中生长，因此通常不需要进行分瓶处理，D错误。]12题号135246879101110．(不定项)(2025·湖南岳阳模拟)与自然受精胚胎相比，体细胞核移植(SCNT)囊胚发育率偏低。研究发现，SCNT胚胎中METTL3表达不足，导致相关mRNA降解，干扰了囊胚的正常发育。METTL3过表达可提高囊胚发育率，具体机制如图所示。下列叙述错误的是(

)注：m6A是细胞中常见的RNA甲基化修饰形式。A．m6A修饰不会改变AURKB蛋白mRNA的核苷酸序列B．m6A修饰可能提高了AURKB蛋白mRNA的稳定性，避免其被蛋白酶水解C．体细胞核移植技术中的去核是去除卵母细胞中由核膜包被的细胞核D．培养重构胚时，为减轻代谢物积累对细胞的伤害，可在培养液中加入抗生素√√√12题号1352468791011BCD

[m6A修饰导致AURKB蛋白mRNA发生的甲基化不会改变自身的核苷酸序列，但可能会影响翻译过程，从而改变生物的表型，A正确；据图可知，通过AURKB蛋白mRNA的m6A修饰，提高了AURKB蛋白mRNA的稳定性，防止RNA酶水解mRNA，B错误；体细胞核移植技术中的去核操作中选择处于MⅡ中期的卵母细胞的细胞核，此时的卵母细胞的核其实是纺锤体—染色体复合物，没有核膜，C错误；为了防止动物细胞培养过程中被细菌污染，可在培养液中加入一定量的抗生素，若为减轻代谢物积累对细胞的伤害，可以更换培养基，D错误。]12题号135246879101111．(不定项)(2025·山东临沂二模)PSMA是某些种类癌细胞表面高表达膜蛋白，CD28是T细胞表面受体。将两株不同杂交瘤细胞融合形成的双杂交瘤细胞，既能够悬浮在培养基中生长繁殖，又可以产生双特异性抗体PSMA×CD28。PSMA×CD28既能选择性地靶向结合某种癌细胞表面的PSMA蛋白，又能特异性地结合T细胞表面的CD28蛋白，从而激活T细胞，通过活化的T细胞来识别和杀灭目标癌细胞。图1所示为双特异性抗体PSMA×CD28的制备流程，图2所示为双特异性抗体PSMA×CD28的结构及作用机理。下列分析正确的是(

)12题号1352468791011A．①过程需给小鼠分别注射PSMA蛋白、CD28蛋白，才能最终得到图2中有效激活T细胞和杀伤癌细胞的双特异性抗体PSMA×CD28B．图1至少进行3次抗原检测进行筛选才能得到双杂交瘤细胞XY，最后一次筛选需在96孔板的孔洞中同时加入PSMA和CD28蛋白C．对⑤过程得到的双杂交瘤细胞进行传代培养前，需用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理D．获得的杂交瘤细胞XY要置于含有95%空气和5%CO2混合气体的CO2培养箱中进行培养√√12题号1352468791011AD

[双特异性抗体生产过程中，应先将癌细胞表面的PSMA蛋白和T细胞表面的CD28蛋白分别作为抗原注射到小鼠体内，使小鼠产生免疫反应，才能最终得到图2中有效激活T细胞和杀伤癌细胞的双特异性抗体PSMA×CD28，A正确；筛选双特异性抗体时需要使用制备单克隆抗体时所使用的抗原物质，该过程需要先用一种抗原(如PSMA)筛选出能够分泌抗PSMA抗体的杂交瘤细胞，再用另一种抗原(如CD28)从已筛选出的杂交瘤细胞中筛选出能分泌抗CD28抗体的杂交瘤细胞，所以筛选获得双特异性抗体时至少需要进行2次抗12题号1352468791011原检测，B错误；⑤过程得到的双杂交瘤细胞能悬浮在培养基中生长繁殖，不需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，只有贴壁生长的细胞进行传代培养前才需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，使其分散成单个细胞，C错误；动物细胞培养时，通常将细胞置于含有95%空气和5%CO2混合气体的CO2培养箱中进行培养，95%空气提供细胞代谢所需的氧气，5%CO2可以维持培养液的pH，所以获得的杂交瘤细胞XY要置于含有95%空气和5%CO2混合气体的CO2培养箱中进行培养，D正确。]题号135246879101112．(14分)(2025·陕西安康模拟)埃博拉病毒(EBOV)是一种极其危险且罕见的病毒，其引起的埃博拉出血热是世界上最致命的病毒性出血热之一。NP蛋白在EBO