67　选择性必修3　第九单元　第54讲　重组DNA技术的基本工具

一堂一案第54讲重组DNA技术的基本工具选择性必修3生物技术与工程第九单元生物技术与工程课标要求1．概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展而来的。2．阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。3．实验：DNA的提取和鉴定考情分析1．基因工程的基本工具2025·江苏卷T19 2025·福建卷T15

2024·湖南卷T5 2023·重庆卷T122023·湖北卷T4 2023·全国新课标卷T62．DNA的粗提取与鉴定2025·河北卷T5 2025·陕晋青宁卷T5

2024·山东卷T13 2024·安徽卷T142023·广东卷T11 2023·福建卷T4考点1重组DNA技术的基本工具一、填空表述1．(人教版选择性必修3P67)基因工程：按照人们的愿望，通过__________等技术，赋予生物新的____________，创造出更符合人们需要的新的______________________。2．(人教版选择性必修3P71)限制酶能够识别__________________________________，并且使每一条链中特定部位的______________断开，产生____________________。转基因遗传特性生物类型和生物产品双链DNA分子的特定核苷酸序列磷酸二酯键黏性末端或平末端3．(人教版选择性必修3P72)T4DNA连接酶和E．coliDNA连接酶都能将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的______________，但____________________连接具有平末端的DNA片段的效率要远远低于________________________。4．(人教版选择性必修3P72)质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的______________________。磷酸二酯键E．coliDNA连接酶T4DNA连接酶环状双链DNA分子5．(人教版选择性必修3P72)载体必须具备的条件：(1)能在受体细胞中保存下来并能________；(2)具有一个或多个________________，以便与外源基因连接；(3)具有____________。6．(人教版选择性必修3P72～73)在基因工程中使用的载体除质粒外，还有______________________等。它们的来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大差别。自我复制限制酶切割位点标记基因噬菌体、动植物病毒7．原核细胞中的限制酶不切割自身DNA的原因是____________________________________________________________________________________________________________________________________________(至少答2点)。8．不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中的意义是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________。含有某种限制酶的细胞的DNA分子不具备这种限制酶的识别序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开用不同的限制酶切割，若产生相同的黏性末端，把两个DNA片段连接后，原来的酶切位点将不存在，不能被原来的限制酶所识别，有利于保持重组DNA分子的稳定性二、概念检测1．DNA连接酶可以连接目的基因与载体的氢键，形成重组DNA。 (

)提示：DNA连接酶可以将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。2．使用不同的限制酶也能产生相同的黏性末端。 (

)×√3．某同学将质粒DNA进行限制酶酶切时，发现DNA完全没有被酶切，分析可能的原因并提出的解决方法为酶切条件不合适，调整反应条件如温度和酶的用量等。 (

)提示：酶切条件不合适通常会使切割效果下降，调整反应条件如温度和pH等，调整酶的用量没有作用。4．质粒通常采用抗生素合成基因作为标记基因。 (

)提示：质粒上的抗生素抗性基因常作为标记基因，便于重组DNA分子的筛选。××(人教版选择性必修3P70～71图文信息)图中甲、乙分别表示质粒和含目的基因的DNA片段，几种可供选择使用的限制酶识别序列及其切割位点如下：(1)请绘出BclⅠ和Sau3AⅠ产生的末端。(2)经限制酶Sau3AⅠ切割后得到的DNA片段可以与上述其余限制酶中的____________(填限制酶名称)切割后得到的DNA片段连接，理由是______________________________________________________________________________________________________________。(3)构建基因表达载体时需要使用DNA连接酶。下列属于DNA连接酶底物的是__________________________________________。提示：(1)(2)BamHⅠ、BclⅠ它们切割后产生的片段具有相同的黏性末端

(3)④考向1基因工程工具酶的应用1．(不定项)(2025·江苏卷)图示人体正常基因A突变为致病基因a及HindⅢ切割位点。AluⅠ限制酶识别序列及切割位点为

，下列相关叙述正确的有(

)A．基因A突变为a是一种碱基增添的突变B．用两种限制酶分别酶切A基因后，形成的末端类型不同C．用两种限制酶分别酶切a基因后，产生的片段大小一致D．产前诊断时，该致病基因可选用HindⅢ限制酶开展酶切鉴定√√BD

[由题图可知，基因A突变为基因a是由于T—A替换成了G—C，属于碱基的替换，A错误；HindⅢ切割后形成的是黏性末端，AluⅠ切割后形成的是平末端，B正确；突变后的基因a中间片段不存在HindⅢ的切割位点，存在AluⅠ的切割位点，基因a分别用HindⅢ和AluⅠ酶切后产生的片段大小不一致，C错误；正常的基因A用HindⅢ酶切后产生4个片段，突变后的基因a用HindⅢ酶切后产生3个片段，D正确。]2．(2023·新课标卷)某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具，将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。限制酶的切割位点如图所示。下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是(

)A．质粒和目的基因都用酶3切割，用E．coliDNA连接酶连接B．质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割，用T4DNA连接酶连接C．质粒和目的基因都用酶1和酶2切割，用T4DNA连接酶连接D．质粒和目的基因都用酶2和酶4切割，用E．coliDNA连接酶连接√C

[酶3切割后得到的是平末端，应该用T4DNA连接酶连接，A错误；质粒用酶3切割后得到平末端，目的基因用酶1切割后得到的是黏性末端，二者不能连接，B错误；质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4DNA连接酶连接后，还能保证目的基因在质粒上的连接方向，此重组表达载体的构建方案最合理且高效，C正确；若用酶2和酶4切割质粒和目的基因，会破坏质粒上的抗生素抗性基因，连接形成的基因表达载体缺少标记基因，无法进行后续的筛选，D错误。]归纳提升限制酶的选择要求(1)位置要求：限制酶的酶切位点不能位于启动子、终止子、复制原点、标记基因当中，所选酶切位点应位于启动子和终止子之间，若载体有多个标记基因，并非都不能破坏，要至少保留一个，用于重组DNA的鉴定和筛选。另外，目的基因上如果有该酶的酶切位点，不能选择。(2)酶切要求①单酶切：为使目的基因与载体形成的DNA片段末端能够连接，通常使用同一种限制酶将两者切割(如下图，选用XhoⅠ)，但单酶切会出现目的基因与质粒的自身环化和随意连接，还可造成目的基因的多拷贝插入。②双酶切：双酶切可以确保目的基因的正确插入，要求两个酶切位点位于目的基因的两侧，如下图可选择PstⅠ和BamHⅠ，但也要注意酶切位点个数和相对位置，如：不能选择XhoⅠ和BamHⅠ进行双酶切。另外，不同的限制酶所产生的末端相同，两端也可连接，因MunⅠ和EcoRⅠ酶切后产生的末端相同，可选择XhoⅠ和MunⅠ酶切目的基因，用XhoⅠ和EcoRⅠ酶切质粒。(3)数量要求：如果所选限制酶的切割位点不止一个，如选择SmaⅠ进行酶切，则切割重组后会丢失复制原点，那么载体进入受体细胞后不能自主复制，所选限制酶在载体上最好只有一个酶切位点。(4)特殊要求：例如根据Ti质粒的T-DNA片段选择限制酶，假设切割目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ，则甲、乙、丁质粒均不宜选取，丙质粒宜选取。考向2基因工程载体的应用3．(链接人教版选择性必修3P72图3-4、正文)天然Ti质粒的结构如图所示，T-DNA上的基因只能在植物细胞中表达。vir基因表达产物可在T-DNA左右边界序列中产生切口，并复制出单链T-DNA进入植物细胞。生长素基因和细胞分裂素基因的表达产物可促进植物细胞增殖成瘤状物但不分化出植物幼苗。冠瘿碱是农杆菌感染植物细胞后生长必需的有机物。关于将天然Ti质粒改造为基因表达载体的说法错误的是(

)A．vir基因表达产物具有限制酶和DNA聚合酶活性，需保留B．生长素基因和细胞分裂素基因不能使植物细胞表现全能性，可删除C．删除冠瘿碱合成基因可减少已转化的植物细胞在培养过程中发生农杆菌的污染D．在T-DNA中插入复制原点可利于其在植物细胞染色体中复制√D

[vir基因表达产物可在T-DNA左右边界序列中产生切口，并复制出单链T-DNA进入植物细胞，说明vir基因表达产物具有限制酶和DNA聚合酶活性，需保留，A正确；生长素基因和细胞分裂素基因的表达产物可促进植物细胞增殖成瘤状物但不分化出植物幼苗，说明生长素基因和细胞分裂素基因不能使植物细胞表现全能性，可删除，B正确；冠瘿碱是农杆菌感染植物细胞后生长必需的有机物，删除冠瘿碱合成基因可减少已转化的植物细胞在培养过程中发生农杆菌的污染，C正确；将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，把目的基因整合到植物细胞染色体DNA上，使目的基因随植物细胞染色体的复制而复制，其复制依赖于植物细胞染色体的复制机制，并非自身携带复制原点，D错误。]一、填空表述1．(人教版选择性必修3P74)__________不溶于酒精，但______________溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA和蛋白质。2．(人教版选择性必修3P74)DNA在不同浓度的NaCl溶液中__________不同，它能溶于____________________的NaCl溶液。考点2

DNA的粗提取与鉴定DNA某些蛋白质溶解度2mol/L3．(人教版选择性必修3P74)在一定________下，DNA遇二苯胺试剂会呈现________，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。4．本实验不能用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是________________________________________________________。5．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免________________________________________________________。6．DNA的粗提取与鉴定的实验流程是_________________________________________________________。温度蓝色哺乳动物成熟的红细胞无细胞核和其他细胞器(无DNA)加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成丝状沉淀取材、研磨→去除滤液中杂质→DNA的析出→DNA的鉴定2．离心研磨液是为了加速DNA的沉淀。 (

)二、概念检测1．过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止DNA降解。 (

)提示：离心研磨液是为了使细胞碎片沉淀。3．粗提取的DNA中可能含有蛋白质。 (

)4．向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻璃棒上有白色物。 (

)提示：向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，鸡血细胞吸水涨破，DNA溶于蒸馏水，观察不到白色丝状物。5．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行。 (

)提示：动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行。√×√××(人教版选择性必修3P74探究·实践)某小组开展了DNA的粗提取与鉴定实验，选择了不同温度(20℃、－20℃)条件下保存的花菜、辣椒和蒜黄作为实验材料，部分实验步骤如图1所示。回答下列问题。(1)选择花菜等植物材料时，为了使研磨的效果更好，可以在处理材料时加入适量的______________(填酶的名称)。(2)小组成员向滤液中加入了适量的嫩肉粉(含木瓜蛋白酶)，于室温下保存15分钟后才进行后续操作，嫩肉粉的作用是________________________________。(3)DNA鉴定结果如图2所示。据图2分析：相同温度条件下，______________的DNA粗提取含量最高。同种实验材料在－20℃条件下DNA粗提取含量更高，其原因可能是______________________________________________________________(从酶的角度作答)。提示：(1)纤维素酶(和果胶酶)(2)促使部分蛋白质水解(3)蒜黄与20℃相比，－20℃的低温抑制了酶的活性，DNA的降解速率更慢考向DNA的粗提取与鉴定的原理、操作流程及实验结果分析1．(链接人教版选择性必修3P75图示信息)如图为鸡血细胞中DNA的粗提取与鉴定实验过程中的部分操作示意图，请据图分析，下列相关叙述中，正确的是(

)A．该实验的正确操作顺序是③→①→②→④→⑤B．用同样方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量相近C．⑤表示要鉴定步骤①中所得到的白色丝状物主要成分为DNA，可使用二苯胺试剂来鉴定，沸水浴冷却后，出现蓝色的试管组别是对照组D．步骤①的目的是初步分离DNA与蛋白质，析出并获得DNA；步骤④中在2mol/L的NaCl溶液中，DNA的溶解度较大√D

[DNA的粗提取与鉴定步骤是加入蒸馏水，破碎细胞→过滤，获取含DNA的滤液→去除滤液中杂质→DNA的析出→鉴定，因此图中表示正确的实验操作顺序是③→②→①→④→⑤，A错误；猪血红细胞中没有细胞核，提取不到DNA，用同样方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量不相同，B错误；⑤表示要鉴定步骤①中所得到的白色丝状物主要成分为DNA，可使用二苯胺试剂来鉴定，沸水浴冷却后，出现蓝色的试管组别是实验组，C错误；步骤①的目的是析出并获得DNA，步骤④中在2mol/L的NaCl溶液中，DNA的溶解度较大，D正确。]2．(2024·山东卷)关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法正确的是(

)A．整个提取过程中可以不使用离心机B．研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，应充分摇匀再倒入烧杯中C．鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变D．仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰√A

[在DNA的粗提取与鉴定实验中，可将获得的研磨液用纱布过滤后，在4℃的冰箱中放置几分钟，再取上清液，也可以直接将研磨液用离心机进行离心后取上清液，A正确；研磨液在4℃冰箱中放置几分钟后，DNA在上清液中，应取上清液倒入烧杯中，B错误；鉴定过程中用沸水浴加热，DNA双螺旋结构会发生改变，C错误；加入二苯胺试剂后沸水浴处理的时间要在5分钟以上，且要等到冷却后再观察结果，这样才可以观察到较为明显的显色反应，仅设置一个对照组可以排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰，D错误。]1．(2025·广东茂名联考)生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础理论和相关技术的发展催生了基因工程。下列叙述正确的是(

)A．艾弗里的肺炎链球菌转化实验为DNA在不同种生物个体之间转移提供了证据B．构建重组DNA导入原核细胞并使外源基因成功表达标志着基因工程正式问世C．用PCR扩增DNA是获取目的基因的唯一方法，为获取目的基因提供了有效手段D．从细菌、噬菌体等微生物中分离出DNA连接酶为DNA的切割和连接创造了条件题号1352468791011智慧分层作业(五十四)重组DNA技术的基本工具√题号1352468791011B

[艾弗里的肺炎链球菌转化实验为DNA在同种生物不同个体之间转移提供了证据，A错误；构建重组DNA导入原核细胞并使外源基因成功表达标志着基因工程正式问世，B正确；获取目的基因有多种方法，用PCR扩增目的基因不是唯一的方法，C错误；DNA连接酶不能切割DNA，D错误。]题号13524687910112．(2025·河北衡水模拟)下列关于基因工程工具酶的叙述，正确的是(

)A．大多限制酶的识别序列由6个核苷酸组成B．限制酶可切割特定核苷酸序列之间的氢键C．DNA聚合酶和DNA连接酶都是构建重组DNA的关键酶D．T4DNA连接酶只能连接黏性末端，不能连接平末端√题号1352468791011A

[限制酶通常识别双链DNA的特异序列，大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，A正确。限制酶切割的是磷酸二酯键，而非氢键(氢键由解旋酶断开)，B错误。DNA连接酶用于连接DNA片段间的磷酸二酯键，是构建重组DNA的关键酶；而DNA聚合酶用于将单个脱氧核苷酸连接到链上(如DNA复制)，不直接参与重组DNA的连接，C错误。T4DNA连接酶可连接黏性末端和平末端，D错误。]3．(2026·湖南怀化模拟)链状DNA分子经限制酶切割产生的黏性末端如图所示。下列叙述正确的是(

)A．限制酶切断的是同一条链上两个特定相邻碱基间的氢键B．图中同一条链上两个相邻碱基N间有脱氧核糖、磷酸基团各2个C．每条链5′端、3′端的C原子分别与羟基、磷酸基团相连接D．理论上，图示黏性末端最多可能有256种题号1352468791011√题号1352468791011D

[限制酶的作用对象是DNA分子的两条链中脱氧核糖和磷酸之间的磷酸二酯键，A错误；图中同一条链上两个相邻碱基N间有脱氧核糖2个、磷酸基团1个，B错误；图中每条链5′端、3′端的碳原子分别与磷酸基团、羟基相连接，C错误；图中黏性末端含有4个碱基，因此，理论上，图示黏性末端最多可能有44＝256种，D正确。]4．(2025·广西百色期末)限制酶MunⅡ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是－C↓AATTG－和－G↓AATTC－。如图表示的是含目的基因的DNA片段，选项中箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。下列选项中适于作为图示目的基因载体的质粒是(

)题号1352468791011A

B

C

D√题号1352468791011A

[由题图可知，目的基因需使用MunⅡ切割，而质粒B上的限制酶为EcoRⅠ；质粒C和D的标记基因上都有限制酶的识别位点且质粒D上无MunⅡ的切割位点，限制酶切割后，标记基因会被破坏；而用限制酶MunⅡ切割A质粒后，不会破坏标记基因，而且还能产生与目的基因两侧黏性末端相同的末端，适于作为目的基因的载体。]5．(2024·安徽卷)下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是(

)A．实验中如果将研磨液更换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低B．利用DNA和蛋白质在酒精中的溶解度差异，可初步分离DNAC．DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，该原理可用于纯化DNA粗提物D．将溶解的DNA粗提物与二苯胺试剂反应，可检测溶液中是否含有蛋白质杂质题号1352468791011√题号1352468791011D

[研磨液有利于蛋白质与DNA分离和稳定DNA的状态，若换为蒸馏水，DNA提取的效率会降低，A正确；DNA不溶于酒精，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可初步分离DNA，B正确；DNA在NaCl溶液中的溶解度随着NaCl浓度的变化而改变，因此该原理可用于纯化DNA粗提物，C正确；在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺试剂会被染成蓝色，二苯胺试剂可用于鉴定DNA，无法检测蛋白质，D错误。]

题号1352468791011√题号1352468791011

7．(2025·贵州名校联考)用新霉素抗性基因(neo)、四环素抗性基因(TetR)作为标记基因构建的质粒如图所示。从给定的限制酶中选择一种，用该酶分别切割质粒和含目的基因的DNA片段，随后将酶切产物连接构建基因表达载体(重组质粒)，并转化至受体菌中。下列叙述错误的是(

)A．若用EcoRⅠ酶切质粒与外源DNA片段，目的基因转录的产物可能不同B．若用BamHⅠ酶切，在含新霉素培养基中的菌落，不一定含有目的基因C．若用AluⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否D．若用HindⅡ酶切，携带目的基因的受体菌在含新霉素和四环素的培养基中均能生长题号1352468791011√题号1352468791011D

[若用EcoRⅠ酶切质粒与外源DNA片段，可能导致目的基因反接，目的基因转录的产物可能不同，A正确；BamHⅠ酶切破坏了四环素抗性基因(TetR)，但新霉素抗性基因(neo)不受影响，若用BamHⅠ酶切，在含新霉素培养基中的菌落，可能含有目的基因，也可能是未转入目的基因的菌落，B正确；若用AluⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否，重组质粒大于普通质粒，电泳条带的位置不同，C正确；若用HindⅡ酶切，破坏了新霉素抗性基因(neo)，携带目的基因的受体菌在含新霉素的培养基中不能生长，D错误。]题号13524687910118．(2025·陕西渭南期中)某基因表达载体构建过程中，需将目的基因1和目的基因2按照下图所示导入整合区域。用四种产生的黏性末端各不相同的限制酶将目的基因1和目的基因2切割，先后插入ZS质粒时，最佳的限制酶使用方案是(

)A．①③

B．①④C．②③ D．②④√题号1352468791011D

[若使用①③或①④，目的基因1两端都是酶1切割产生的黏性末端，当将目的基因1和目的基因2先后插入ZS质粒时，目的基因1会因为两端黏性末端相同而反向插入，A、B错误。②中目的基因1一端是酶1切割产生的黏性末端，另一端是酶2切割产生的黏性末端；③中目的基因2一端是酶1切割产生的黏性末端，另一端是酶4切割产生的黏性末端。

这样将目的基因2插入ZS质粒时，可能会将目的基因1切除，C错误。若使用②④，目的基因1两端分别是酶1和酶2切割产生的黏性末端，目的基因2两端分别是酶3和酶4切割产生的黏性末端。

用不同的酶切割产生不同的黏性末端，这样在将目的基因1和目的基因2先后插入ZS质粒时，目的基因不会反向插入，所以该方案可行，D正确。]题号13524687910119．(不定项)(2025·辽宁沈阳一模)在基因工程操作中，科研人员利用两种限制酶(EcoRⅠ和Not

Ⅰ)处理基因载体，进行电泳检测，结果如图所示，下列相关叙述错误的是(

)A．该基因载体最可能是环状DNA分子B．该DNA分子上有2个EcoRⅠ的酶切位点C．EcoRⅠ和NotⅠ的切点之间最长相距约9kbD．限制酶作用于该载体的氢键使其断裂√√题号1352468791011BD

[由题图可知，当仅用NotⅠ切割载体时，仅产生一种长度的DNA片段(10kb)，因此该载体最有可能为环状DNA分子，该DNA分子上只有1个NotⅠ的酶切位点，A正确。当仅用EcoRⅠ切割载体时，产生2种长度的DNA片段：2kb和6kb，结合A项可知，用EcoRⅠ切割载体应产生3个DNA片段：2个2kb和1个6kb。故该DNA分子上有3个EcoRⅠ的酶切位点，B错误。两种限制酶同时切割时产生6kb、2kb和1kb3种长度的DNA片段：1个6kb、1个2kb、2个1kb，所以两种限制酶的酶切位点最长相距9kb，C正确；限制酶切割载体时直接破坏的是作用位点上两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，D错误。]题号135246879101110．(不定项)(2025·河北沧州模拟)进行DNA的粗提取时，某研究小组欲探究提纯时不同的去杂质方式对实验结果的影响，相关数据如下表所示。下列有关叙述正确的是(

)去杂质方式沉淀质量/gOD260/OD280二苯胺鉴定离心0.1681.51蓝色4℃冰箱静置0.10281.41注：OD260/OD280可反映DNA纯度，纯DNA的OD260/OD280为1.8，当存在蛋白质等物质时，这一比值会明显降低。题号1352468791011A．实验流程为取材→破碎细胞→获得沉淀物→去除杂质→提纯→DNA鉴定B．酵母菌、菠菜、菜花和猪血等均适宜作为实验材料进行DNA的粗提取C．与4℃冰箱静置相比，离心法可获得更高纯度的DNAD．为排除二苯胺加热后可能变蓝，可设置一组对照实验√√题号1352468791011CD

[该实验的流程为取材→破碎细胞→获得滤液(DNA溶解在滤液中)→去除杂质→提纯→DNA鉴定，A错误；酵母菌、菠菜、菜花细胞中均含有DNA，均适宜作为实验材料进行DNA的粗提取，但猪血中的成熟红细胞没有细胞核，不含DNA，不适合作为DNA粗提取的材料，B错误；OD260/OD280可反映DNA纯度，离心时OD260/OD280为1.51，而4℃冰箱静置时OD260/OD280为1.41，说明离心法可以获得更高纯度的DNA，C正确；可设置一组对照实验，将未加入DNA的二苯胺试剂加热，以排除二苯胺加热后可能变蓝的情况，D正确。]题号135246879101111．(16分)(2025·黑龙江模拟)阿斯巴甜是一种新型高效的甜味剂，应用广泛。研究人员将来源于蜡样芽孢杆菌的蛋白酶基因(图1)与质粒pET-20b连接，构建重组质粒，转化大肠杆菌bl21得到重组大肠杆菌，从而构建全细胞催化剂(图2)，以此菌株高效转化苄氧羰基天冬氨酸和苯丙氨酸甲酯生产阿斯巴甜。此项技术解决了工业上化学合成法生产阿斯巴甜高成本、低得率、污染严重的问题。请回答下列问题：题号1352468791011限制酶识别序列HindⅢKpnⅠPstⅠBamHⅠ题号13524687