2025年病理技术考试题及答案

2025年病理技术考试题及答案一、单项选择题（共25题，每题1分，总计25分）1.参照2024版《临床病理技术操作规范》，常规石蜡制片流程中，4%中性缓冲甲醛固定液对大多数实体组织的最佳固定时间为A.1~2hB.6~12hC.12~48hD.72h以上2.恒冷箱冷冻切片机制备术中快速诊断切片时，针对大多数不含大量脂肪的软组织标本，适宜的箱体工作温度为A.-10℃B.-15℃C.-20~-25℃D.-35℃以下3.HE染色中，苏木精对细胞核染色的核心原理是A.带正电荷的氧化苏木精与DNA分子上带负电的磷酸基以离子键结合B.带负电荷的氧化苏木精与组蛋白上带正电的氨基结合C.苏木精通过氧化还原反应与核酸分子共价结合D.苏木精通过脂溶性穿透核膜与核内蛋白疏水结合4.按照2025年国家病理质控中心（PQCC）发布的常规病理质量控制指标，常规HE切片的诊断优良率需达到多少方可满足临床诊断基本要求A.≥85%B.≥90%C.≥95%D.≥98%5.下列特殊染色方法中，用于显示组织中真菌菌丝、孢子结构的首选高敏方法是A.过碘酸-雪夫（PAS）染色B.六胺银（GMS）染色C.抗酸染色D.革兰染色6.采用二代测序（NGS）技术检测FFPE组织样本体细胞变异时，未行显微切割富集的样本要求肿瘤细胞占比至少达到A.≥5%B.≥10%C.≥20%D.≥30%7.胃肠道恶性肿瘤根治标本巨检时，按照肿瘤分期质控要求，淋巴结检取总数至少需达到多少枚方可满足准确分期需求A.≥6枚B.≥12枚C.≥16枚D.≥20枚8.下列封固剂中，适用于HE、免疫组化切片长期保存（≥30年）的是A.甘油明胶B.中性树胶C.水合氯醛糖浆D.水溶性PVA封固剂9.齐-尼抗酸染色中，结核分枝杆菌的显色结果为A.蓝色B.红色C.紫色D.黑色10.参照2024版《数字病理诊断应用规范》，用于常规病理诊断的全切片图像（WSI）最低扫描分辨率要求为A.10倍物镜扫描（等效0.25μm/像素）B.20倍物镜扫描（等效0.5μm/像素）C.40倍物镜扫描（等效0.25μm/像素）D.60倍油镜扫描（等效0.1μm/像素）11.下列固定液中，不适用于免疫荧光标本长时间保存、易导致荧光淬灭和抗原破坏的是A.4%多聚甲醛B.10%中性缓冲甲醛C.预冷丙酮D.95%乙醇12.参照最新制片规范，常规石蜡切片烤片的适宜温度和时间设置为A.45℃烤30minB.60℃烤30~60minC.80℃烤2hD.100℃烤10min13.Masson三色染色中，胶原纤维的显色结果为A.红色B.蓝色/绿色C.黑色D.棕黄色14.病理科常规处理结核分枝杆菌等第二类病原微生物感染的标本制片、染色操作时，需在哪一级生物安全实验室开展A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-415.下列哪种问题会导致HE染色切片出现核质共染、细胞核染色过浅、色调灰暗A.固定时间超过72hB.盐酸酒精分化时间不足C.苏木精染液氧化过度、成熟失效D.伊红染色时间过长16.细胞学标本制备中，对于痰液、宫颈黏液等黏稠标本，最适宜的涂片方法是A.推片法B.压拉涂片法C.棉签涂抹法D.离心沉淀法17.免疫组化检测广谱细胞角蛋白（CK-pan）时，下列哪种组织是最适宜的阳性对照A.正常扁桃体组织B.正常乳腺上皮组织C.正常淋巴结组织D.正常脑组织18.参照2024版《临床分子病理实验室质控规范》，FFPE样本提取的基因组DNA满足NGS检测要求的OD260/280纯度比值范围为A.1.6~1.8B.1.8~2.0C.2.0~2.2D.1.2~1.619.冷冻切片制备过程中，组织块内出现大量冰晶、破坏细胞微细结构的最主要原因是A.冷冻速度过慢B.冷冻速度过快C.切片厚度过厚D.组织固定不及时20.下列特殊染色方法中，用于显示组织中弹力纤维的是A.维多利亚蓝染色B.Gordon-Sweets网状纤维染色C.油红O染色D.普鲁士蓝染色21.按照《医疗机构病理科建设与管理指南（2023版）》要求，常规石蜡组织块（蜡块）的最低法定保存期限为A.10年B.15年C.30年D.永久保存22.免疫组化染色中，用于灭活组织内源性过氧化物酶、减少非特异性显色的常用封闭试剂是A.5%~10%正常山羊血清B.0.3%~3%过氧化氢溶液C.0.1%胰蛋白酶D.1%牛血清白蛋白（BSA）溶液23.常规用于HE诊断的石蜡切片标准厚度为A.2~3μmB.4~5μmC.7~8μmD.10μm24.下列固定液中组织收缩率可达20%以上，不适用于肌肉、神经组织形态固定的是A.4%中性甲醛B.Bouin固定液C.95%乙醇D.Zenker固定液25.免疫组化染色质量判读中，下列哪种情况属于可接受的合格染色结果A.背景轻度染色，但阳性信号定位准确、清晰可辨B.阳性信号强度高，但定位与预期靶标位置不符C.切片存在明显横跨组织的皱褶，但染色强度适宜D.存在严重边缘效应，阳性信号仅分布于组织边缘二、多项选择题（共15题，每题2分，总计30分，多选、少选、错选均不得分）1.常规石蜡制片流程中，可能导致切片脱片的原因包括A.载玻片未行多聚赖氨酸/APES防脱处理B.烤片温度不足、时间过短C.组织固定不充分、结构松散D.高pH值抗原修复时间过长E.切片厚度超过6μm2.符合优质HE切片质量标准的描述包括A.细胞核呈均匀蓝紫色，核膜、核仁清晰可辨，无核固缩、核溶解假象B.胞质呈层次分明的粉红色，肌纤维、结缔组织红染适度有差异C.切片平整无皱褶、无刀痕、无气泡，无明显甲醛色素、汞盐沉积D.切片完整，无组织挤压、龟裂，厚薄均匀E.核质对比度适宜，无过染、淡染，组织结构清晰3.免疫组化染色中，导致假阴性结果的常见原因包括A.抗原修复不充分，抗原表位未充分暴露B.一抗稀释浓度过高、孵育时间不足C.标本固定时间过长，抗原被甲醛过度交联遮蔽D.二抗、酶标检测系统失活E.内源性生物素未充分封闭4.下列分子病理检测技术中，可应用于FFPE组织样本的包括A.Sanger测序B.荧光定量PCRC.二代测序（NGS）D.荧光原位杂交（FISH）E.流式细胞术5.下列特殊染色方法与检测目标的对应关系，正确的有A.油红O——中性脂质B.普鲁士蓝——三价铁离子（含铁血黄素）C.六胺银——真菌、基底膜D.齐-尼抗酸染色——结核、麻风分枝杆菌E.刚果红——淀粉样物质6.冷冻切片技术的适用临床及科研场景包括A.手术中快速病理诊断B.免疫荧光染色标本制备C.脂质、酶类物质的组织化学染色观察D.脂肪组织的病理诊断E.大宗病例长期回顾性分子检测研究7.病理巨检室的生物安全防护要求，符合规范的包括A.操作时穿戴一次性隔离衣、医用防护口罩、双层手套B.巨检操作台面配备局部负压通风装置，风速满足生物安全要求C.处理已知传染性标本时佩戴护目镜或防护面屏D.标本经4%甲醛固定24h后即可在开放台面无防护操作E.操作完成后采用1000mg/L含氯消毒剂擦拭台面，作用30min后清洁8.组织固定的核心目的包括A.抑制细胞自溶酶活性，保持组织细胞原有形态结构，防止腐败B.凝固细胞内蛋白质、核酸等生物大分子，减少抗原、核酸降解C.使组织硬化、韧性增加，便于后续脱水、浸蜡、切片处理D.改变组织内成分折光率，增强染色对比度E.杀灭标本内的细菌、病毒等病原微生物，降低生物安全风险9.用于诊断的数字病理全切片图像（WSI），质量控制要求包括A.组织区域无扫描盲区，全片完整覆盖B.焦距准确，细胞微细结构清晰无虚焦C.色彩校准合格，色彩还原度与光镜下染色效果一致D.图像压缩率符合要求，无马赛克、条带状伪影E.切片标签信息与图像文件信息完全匹配，无错配10.免疫组化染色中，临床常用的抗原修复方法包括A.热诱导抗原修复（高压加热、水浴加热、微波加热）B.酶消化修复（胰蛋白酶、胃蛋白酶消化）C.酸水解修复D.高强度超声修复E.反复冻融修复11.标本固定前需及时切开、保证固定液充分渗透的标本类型包括A.直径>1cm的实性肿瘤标本B.全脾、全子宫等大块实性切除标本C.胃肠道切除标本，需沿纵轴剪开、冲洗内容物后固定D.带包膜的甲状腺叶、乳腺叶切除标本，每隔1cm做书页状切开E.直径<0.5cm的胃肠镜穿刺活检标本12.HE染色过程中，可能导致细胞核染色过深的原因包括A.苏木精染液浓度过高、染色时间过长B.盐酸酒精分化时间过短C.返蓝液pH值不足、返蓝不充分D.切片厚度超过6μmE.烤片温度超过70℃13.关于荧光原位杂交（FISH）技术的应用，下列说法正确的有A.可用于检测基因扩增、易位、缺失、融合等多种基因变异B.可在FFPE组织切片、细胞块、细胞学涂片上开展检测C.每批次检测必须设置已知阳性、阴性对照，验证检测体系有效性D.结果判读时需至少计数50个形态完好的肿瘤细胞信号E.因固定交联影响，无法应用于存档FFPE样本检测14.病理技术实验室的室内质量控制内容包括A.新批号试剂使用前的性能验证，确认染色、检测效果符合要求B.每批次HE、特殊染色、免疫组化染色同步设置阳性、阴性对照C.定期抽检切片质量，统计切片优良率，及时整改流程问题D.切片机、染色机、PCR仪、恒温设备等的定期校准、维护E.参加国家或省级病理质控中心组织的室间质量评价活动15.关于细胞学标本制备的规范要求，下列说法正确的有A.标本采集后需尽快固定（一般≤30min），防止细胞自溶、退变B.巴氏染色适用于宫颈脱落细胞学的常规筛查C.液基细胞学制片可有效去除标本中的血液、黏液杂质，减少细胞重叠D.胸腔积液、腹腔积液等液体标本采集后需添加适当抗凝剂，防止细胞凝固聚集E.传统涂片需薄而均匀，避免细胞过度重叠影响诊断三、判断题（共10题，每题1分，总计10分，正确打√，错误打×）1.4%中性缓冲甲醛固定液的pH值为7.2~7.4，渗透压与人体组织液接近，固定时不易导致细胞收缩变形。2.Gordon-Sweets网状纤维银染色中，网状纤维被染成黑色，胶原纤维呈红色，细胞核呈灰黑色。3.免疫组化染色时，一抗孵育温度越高、时间越长，阳性信号越强，且不会增加非特异性染色风险。4.冷冻切片厚度越薄越利于观察细胞细节，因此术中快速冷冻切片常规设置为2μm厚度。5.油红O脂质染色必须使用冷冻切片，不能使用常规石蜡切片，因为石蜡制片过程中的二甲苯、乙醇等有机溶剂会溶解脂质成分，导致假阴性。6.分子病理检测中，若FFPE样本提取的DNA严重降解（片段平均长度<200bp），仍可用于Sanger测序检测长片段基因变异。7.PAS染色可通过氧化反应显示组织中的糖原、黏多糖、真菌细胞壁多糖成分，阳性产物呈紫红色。8.组织固定时，固定液的体积需至少达到标本体积的5~10倍，才能保证固定液充分渗透，避免中心区域固定不全。9.免疫荧光染色切片封片需使用抗淬灭封固剂，切片需避光4℃保存，避免荧光信号快速淬灭。10.石蜡切片脱蜡不彻底会导致HE染色不均匀，出现斑片状淡染区、染色拒染现象。四、简答题（共3题，每题7分，总计21分）1.简述常规石蜡HE切片出现皱褶、压痕的常见原因及预防处理措施。2.简述免疫组化染色中出现弥漫性非特异性背景染色的常见原因。3.简述用于二代测序（NGS）检测的FFPE组织样本的前处理质控核心要点。五、案例分析题（共1题，总计14分）某三级医院病理科技术员在开展乳腺癌术后标本HER2免疫组化检测时，连续3批次染色结果均出现以下问题：弱阳性信号定位不清、间质区域弥漫性背景染色；同步设置的已知HER2（3+）阳性对照片染色强度不足，仅呈浅棕黄色，无法达到判读标准。请结合病理技术操作规范和HER2检测指南要求，分析导致上述问题的可能原因，并提出对应的整改措施。参考答案一、单项选择题1.C2.C3.A4.C5.B6.C7.B8.B9.B10.C11.D12.B13.B14.B15.C16.B17.B18.B19.A20.A21.C22.B23.B24.C25.A二、多项选择题1.ABCD2.ABCDE3.ABCD4.ABCD5.ABCDE6.ABCD7.ABCE8.ABCDE9.ABCDE10.ABC11.ABCD12.ABD13.ABCD14.ABCD15.ABCDE三、判断题1.√2.√3.×4.×5.√6.×7.√8.√9.√10.√四、简答题1.（1）常见原因（4分）：①组织块硬度不均：组织固定不充分、脱水透明浸蜡不足，或标本含钙化、脂肪、致密纤维成分且未做均质处理，切片时软硬不一易形成皱褶；②展片参数不当：展片水温过低时切片无法自然舒展，水温过高会导致组织边缘过度卷曲形成褶皱；③捞片操作不规范：切片转移至载玻片时未完全平铺，残留气泡或牵拉组织导致错位；④切片刀状态不佳：刀刃存在缺口、切片角度不当（过陡或过缓），切片受挤压形成刀痕、压痕，厚薄不均的切片易折叠；⑤质检环节缺失：烤片前未逐张检查展片效果，微小皱褶经高温烤片后形成永久性压痕。（2）预防处理措施（3分）：①规范组织处理流程，保证固定、脱水、透明、浸蜡充分，含钙化组织提前脱钙至质地均匀，保证蜡块硬度一致；②展片水温稳定控制在42~45℃，含脂肪较多的标本可适当提高1~2℃；③定期更换一次性刀片或打磨钢制切片刀，调整切片角度为4°~6°，保证切出4~5μm厚度的连续均匀蜡带；④捞片时将蜡带平整铺于载玻片中下1/3位置，轻轻倾斜载玻片排除组织下气泡，发现皱褶及时调整后再放入烤片机；⑤烤片前逐张检查切片平整度，存在皱褶、刀痕的不合格切片及时重切。2.免疫组化非特异性背景染色的常见原因包括：①封闭环节不规范（1分）：未使用与二抗种属同源的正常血清封闭，或封闭时间不足、封闭液蛋白浓度过低，导致一抗非特异性结合组织内带电荷的蛋白位点；②抗体使用不当（1分）：一抗浓度过高、孵育温度超过37℃、孵育时间过长，导致抗体非特异性结合增加；③内源性物质未充分封闭（1分）：组织内残留的过氧化物酶、红细胞/肝脏/肾脏组织中的内源性生物素未被灭活，显色时非特异性显色；④冲洗不充分（1分）：PBS冲洗液更换不及时、冲洗次数不足、冲洗时间过短，未结合的游离抗体残留于切片表面；⑤显色控制不当（1分）：DAB显色液配制后放置过久产生沉淀，或显色时间过长、未在镜下实时监控，导致背景过染；⑥标本质量不佳（1分）：组织固定不充分、坏死区域过多，坏死组织非特异性吸附抗体导致深染；⑦操作失误（1分）：孵育过程中切片干燥，导致抗体干结在组织表面形成弥漫背景。3.FFPE样本NGS检测前处理的核心质控要点包括：①标本固定流程质控（2分）：标本离体后30min内切开放入4%中性缓冲甲醛固定，固定液体积为标本体积的5~10倍，固定时间控制在12~48h；禁止使用含重金属的固定液（如Zenker液、Bouin液）处理待检样本，避免重金属残留抑制后续核酸扩增、测序反应。②组织成分评估（2分）：连续切片后取第一张切片行HE染色，由病理医师评估肿瘤细胞占比：常规检测要求肿瘤细胞占比≥20%，占比不足时需行显微切割富集肿瘤细胞；记录坏死组织占比，坏死占比>30%的样本不适用NGS检测，避免核酸降解、正常细胞污染导致假阴性结果。③核酸质量质控（2分）：提取的核酸需检测浓度、纯度及完整性：DNA样本浓度≥50ng/μl、总量≥500ng，OD260/280比值在1.8~2.0之间，DNA片段平均长度≥200bp；RNA样本需RIN值≥7.0，无明显基因组DNA污染。④防污染质控（1分）：严格执行样本标识核对制度，保证蜡块、切片、送检单信息一致；切片时每切完一个样本更换刀片、清洁切片机持刀架和样本托，防止不同样本间核酸交叉污染。五、案例分析题（1）可能的原因（8分）：①抗原修复流程不规范：HER2检测要求采用pH9.0EDTA缓冲液高压热修复2min，若修复液pH值不符合要求、修复温度不足（如高压锅盖未密封导致温度未达121℃）、修复时间过短，会导致抗原表位未充分暴露，出现阳性对照染色强度不足；若修复过程中修复液蒸发导致切片暴露于空气中干片，会造成蛋白变性、抗体非特异性结合，出现信号定位不清、弥漫背景染色。②试剂质量不合格：一抗超过有效期、反复冻融导致效价下降，或工作稀释浓度配制错误（浓度过低），会导致阳性信号强度