2026年自然杀伤细胞管理师中试题(附答案)

2026年自然杀伤细胞管理师中试题(附答案)一、单项选择题（每题1分，共20分）1.自然杀伤细胞（NK细胞）表面特征性标志组合正确的是（）A.CD3+、CD56+B.CD3-、CD56+C.CD19+、CD56-D.CD4+、CD8+2.NK细胞活化性受体NKG2D的配体主要表达于（）A.正常体细胞表面B.病毒感染细胞或肿瘤细胞表面C.未成熟树突状细胞表面D.B淋巴细胞表面3.体外扩增NK细胞时，常用的基础培养基是（）A.RPMI-1640无血清培养基B.DMEM高糖培养基C.MEM培养基D.胎牛血清完全培养基4.NK细胞冻存时，常用的冷冻保护剂终浓度为（）A.5%DMSOB.10%DMSOC.15%DMSOD.20%DMSO5.评价NK细胞功能的经典实验是（）A.MTT法检测靶细胞增殖B.流式细胞术检测CD107a脱颗粒C.ELISA检测IL-2分泌量D.WesternBlot检测穿孔素表达6.临床级NK细胞制备过程中，微生物检测应包括（）A.细菌、真菌、支原体B.细菌、病毒、寄生虫C.内毒素、支原体、朊病毒D.细菌、真菌、噬菌体7.NK细胞通过ADCC效应杀伤靶细胞时，依赖的分子是（）A.CD16（FcγRIII）B.CD56（NCAM）C.NKG2AD.KIR2DL18.以下哪种细胞因子对NK细胞体外扩增促进作用最弱？（）A.IL-2B.IL-15C.IL-7D.TGF-β9.NK细胞输注前质量控制中，活率要求不低于（）A.70%B.80%C.90%D.95%10.冷链运输NK细胞制剂时，液氮罐的温度需维持在（）A.-80℃以下B.-120℃以下C.-150℃以下D.-196℃11.NK细胞与CTL细胞的主要区别在于（）A.需MHC分子提呈抗原B.无需预先致敏即可杀伤靶细胞C.分泌细胞因子类型不同D.主要分布于淋巴组织12.制备NK细胞时，PBMC分离常用的密度梯度离心液是（）A.碘克沙醇B.葡聚糖C.聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll）D.Percoll13.NK细胞扩增过程中，若出现大量死细胞，最可能的原因是（）A.培养基pH值7.2B.细胞接种密度1×10^6/mLC.培养瓶未包被抗CD16抗体D.细胞因子添加量不足14.以下哪项不属于NK细胞的免疫调节功能？（）A.促进树突状细胞成熟B.抑制活化的T细胞增殖C.分泌IFN-γ激活巨噬细胞D.直接吞噬病原体15.临床输注NK细胞时，过敏反应的主要诱因是（）A.细胞活率过高B.制剂中残留血清蛋白C.细胞数量过多D.输注速度过慢16.NK细胞功能检测中，流式法检测CD107a的原理是（）A.CD107a是溶酶体相关膜蛋白，脱颗粒时转移至细胞膜B.CD107a是活化受体，与配体结合后表达上调C.CD107a是抑制性受体，活化后表达下调D.CD107a是粘附分子，促进细胞间接触17.以下哪种疾病不属于NK细胞治疗的潜在适应症？（）A.急性髓系白血病B.黑色素瘤C.系统性红斑狼疮（活动期）D.巨细胞病毒感染18.NK细胞制剂放行前，需进行的生物学效力检测是（）A.细胞表型分析（CD3-、CD56+）B.杀伤活性检测（E:T=10:1时靶细胞死亡率）C.内毒素检测（≤5EU/mL）D.支原体PCR检测（阴性）19.冻存NK细胞复苏时，正确的操作是（）A.37℃水浴快速融化至完全解冻B.4℃水浴缓慢融化C.室温放置30分钟自然解冻D.直接加入培养基稀释后离心20.关于NK细胞的记忆性，以下描述正确的是（）A.所有NK细胞均具有长期记忆功能B.病毒感染或疫苗接种可诱导部分NK细胞产生记忆表型C.NK细胞记忆性依赖于T细胞辅助D.记忆性NK细胞表面CD56表达下调二、多项选择题（每题2分，共20分。每题至少2个正确选项，错选、漏选均不得分）1.NK细胞的抑制性受体包括（）A.KIR2DL1B.NKG2A/CD94C.DNAM-1D.CD94/NKG2C2.影响NK细胞体外扩增效率的因素有（）A.起始PBMC中NK细胞比例B.培养基中血清来源（人源/动物源）C.细胞因子组合（IL-2+IL-15+IL-21）D.培养体系（静态培养/生物反应器）3.NK细胞治疗的优势包括（）A.无需HLA配型B.不易引发移植物抗宿主病（GVHD）C.可杀伤多种MHCI类分子缺失的肿瘤细胞D.体内存活时间长于CAR-T细胞4.制备临床级NK细胞时，需遵循的规范包括（）A.《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）》B.GMP（药品生产质量管理规范）C.ISO13485（医疗器械质量管理体系）D.《实验动物管理条例》5.NK细胞功能检测的常用方法有（）A.乳酸脱氢酶（LDH）释放法B.流式细胞术检测IFN-γ分泌C.实时荧光定量PCR检测穿孔素mRNAD.台盼蓝染色计数活率6.冷链运输NK细胞制剂时，需监控的参数包括（）A.运输箱内温度波动范围B.制剂冻存管密封性C.运输时间（从冻存到输注≤72小时）D.运输过程中的震动频率7.NK细胞输注后可能出现的不良反应包括（）A.发热（细胞因子释放综合征）B.低血压C.血小板减少D.过敏反应（皮疹、呼吸困难）8.以下哪些操作会降低NK细胞活率？（）A.分离PBMC时离心速度过高（3000g）B.冻存时程序降温（1℃/min）C.复苏后直接加入大量冷培养基稀释D.扩增过程中每3天半量换液9.NK细胞与巨噬细胞的相互作用表现为（）A.NK细胞分泌IFN-γ激活巨噬细胞B.活化的巨噬细胞分泌IL-12增强NK细胞杀伤功能C.NK细胞直接吞噬巨噬细胞D.巨噬细胞通过ADCC协助NK细胞杀伤靶细胞10.关于NK细胞质量控制，以下说法正确的是（）A.纯度需≥85%（CD3-、CD56+细胞比例）B.内毒素检测应≤5EU/mLC.支原体检测需采用PCR法或培养法，结果阴性D.杀伤活性检测靶细胞常选用K562（MHCI类分子低表达）三、案例分析题（每题10分，共30分）案例1：某实验室制备NK细胞制剂，放行前检测发现活率仅75%（要求≥90%），且支原体PCR阳性。问题：（1）分析活率不达标可能的原因；（2）支原体污染的可能来源及处理措施。案例2：患者输注NK细胞后2小时出现发热（38.5℃）、寒战，血压90/60mmHg（基础血压120/80mmHg）。问题：（1）判断可能的不良反应类型；（2）提出紧急处理方案。案例3：某批次NK细胞扩增培养第5天，显微镜观察到细胞聚集成团，部分细胞形态不规则、胞质颗粒减少，流式检测CD56+比例从第3天的65%降至45%。问题：（1）分析可能的培养操作问题；（2）提出改进措施。四、简答题（每题6分，共30分）1.简述NK细胞的识别机制（“缺失自我”与“诱导自我”）。2.列举NK细胞体外扩增的关键步骤（从PBMC分离到收获细胞）。3.说明NK细胞质量控制中“生物学效力”的定义及检测方法。4.简述NK细胞冻存-复苏的核心原则及操作要点。5.分析NK细胞治疗相比T细胞治疗的优势与局限性。答案一、单项选择题1.B2.B3.A4.B5.B6.A7.A8.D9.C10.D11.B12.C13.D14.D15.B16.A17.C18.B19.A20.B二、多项选择题1.AB2.ABCD3.ABC4.ABC5.ABC6.ABD7.ABD8.AC9.AB10.ABCD三、案例分析题案例1答案：（1）活率不达标可能原因：①PBMC分离时离心力过大或时间过长导致细胞机械损伤；②扩增培养基营养不足（如细胞因子浓度降低、葡萄糖耗尽）；③冻存时程序降温不当（如未使用程序降温盒）或复苏操作缓慢（未37℃快速融化）；④培养过程中微生物污染（如细菌/真菌）影响细胞活性。（2）支原体污染来源：可能为培养基、血清、胰酶等试剂污染，或操作时未严格遵循无菌规范（如超净台未充分消毒、手套带菌）。处理措施：立即停用该批次所有相关试剂；对实验室环境（超净台、培养箱）进行甲醛熏蒸或过氧化氢消毒；废弃污染的细胞制剂，重新从原代PBMC开始制备，并加强支原体检测（每批次扩增前后均检测）。案例2答案：（1）可能为细胞因子释放综合征（CRS），分级为1-2级（发热+低血压）。（2）紧急处理方案：①立即暂停输注，监测生命体征（心率、血压、血氧）；②给予物理降温（冰袋）或退热药物（对乙酰氨基酚）；③补充生理盐水或林格液纠正低血压（目标血压≥100/60mmHg）；④静脉注射地塞米松5-10mg（若症状无缓解，可升级至托珠单抗）；⑤检测血清细胞因子（IL-6、TNF-α）及C反应蛋白（CRP）水平；⑥持续观察至少24小时，确认无恶化后可恢复输注（减慢速度）。案例3答案：（1）可能的操作问题：①细胞接种密度过低（<1×10^6/mL）导致营养竞争不足，或过高（>5×10^6/mL）导致代谢废物积累；②培养基换液不及时（超过48小时未换液），乳酸、氨等代谢产物堆积；③细胞因子添加量不足（如IL-2浓度低于500IU/mL）；④培养瓶表面未包被刺激分子（如抗CD16抗体、IL-21），影响NK细胞黏附与活化；⑤原代PBMC中NK细胞比例过低（<10%），扩增过程中其他细胞（如T细胞、单核细胞）过度增殖。（2）改进措施：①调整接种密度至2-3×10^6/mL，每2-3天半量换液（补充新鲜培养基+细胞因子）；②增加IL-15浓度至20ng/mL（原10ng/mL），或添加IL-21（5ng/mL）协同刺激；③使用包被抗CD16抗体（10μg/mL）的培养瓶，促进NK细胞黏附活化；④在扩增第3天加入CD3抗体磁珠（或使用CD3+细胞depletion试剂），去除竞争性T细胞；⑤下次制备时优化PBMC分离条件（如缩短离心时间），提高起始NK细胞比例（通过流式分选富集CD3-CD56+细胞）。四、简答题1.NK细胞的识别机制包括“缺失自我”和“诱导自我”：①“缺失自我”：正常细胞表达MHCI类分子，与NK细胞抑制性受体（如KIR、NKG2A）结合，传递抑制信号，NK细胞不活化；病毒感染或肿瘤细胞MHCI类分子表达下调或缺失，抑制信号减弱，NK细胞活化并杀伤靶细胞。②“诱导自我”：靶细胞表面异常表达应激配体（如MICA/B、ULBP），与NK细胞活化性受体（如NKG2D、DNAM-1）结合，传递活化信号，即使MHCI类分子正常表达，NK细胞仍可被激活（如某些实体瘤细胞）。2.NK细胞体外扩增关键步骤：①PBMC分离：外周血与Ficoll密度梯度液1:1混合，2000g离心20分钟（无制动），收集界面层PBMC，PBS洗涤2次；②NK细胞富集（可选）：磁珠分选（CD3-磁珠去除T细胞，或CD56+磁珠阳性分选），提高起始NK细胞比例；③接种培养：将PBMC或富集的NK细胞以1-3×10^6/mL接种于无血清培养基（如X-VIVO15），添加IL-2（500-1000IU/mL）、IL-15（10-20ng/mL）、IL-21（5ng/mL），培养瓶包被抗CD16抗体（10μg/mL）或饲养细胞（如γ射线灭活的K562-mbIL21细胞）；④换液扩增：每2-3天半量换液，补充新鲜培养基及细胞因子，维持细胞密度在2-5×10^6/mL；⑤收获检测：培养7-14天后，离心收集细胞，PBS洗涤2次，进行质量控制（活率、纯度、杀伤活性、微生物检测）。3.生物学效力定义：NK细胞制剂在体内发挥杀伤靶细胞及免疫调节功能的能力，是评估产品有效性的核心指标。检测方法：①杀伤活性检测：采用LDH释放法或流式细胞术，以K562细胞（MHCI类分子低表达，NK敏感靶细胞）为靶细胞，设置效应细胞（NK）与靶细胞（T）比例（E:T=5:1、10:1），培养4小时后检测靶细胞死亡率（计算公式：杀伤活性%=（实验孔LDH-自发释放孔LDH）/（最大释放孔LDH-自发释放孔LDH）×100%）；②脱颗粒检测：流式细胞术检测CD107a（溶酶体相关膜蛋白，脱颗粒时转移至细胞膜），反映NK细胞活化后释放穿孔素、颗粒酶的能力；③细胞因子分泌：ELISA或流式胞内染色检测IFN-γ、TNF-α分泌量，评估免疫调节功能。4.冻存-复苏核心原则：慢冻快融，减少冰晶形成对细胞的损伤。操作要点：冻存：①细胞活率≥90%时进行冻存；②配制冻存液（基础培养基+10%DMSO+5-10%人血白蛋白）；③细胞悬液与冻存液1:1混合（终浓度