病理技术考试试题及答案

病理技术考试试题及答案一、单项选择题（每题1分，共20分）1.病理常规工作中使用的10%中性缓冲福尔马林固定液，其实际甲醛含量为（）A.40%B.10%C.4%D.1%2.常规病理诊断用石蜡切片的标准厚度为（）A.1-2μmB.3-5μmC.8-10μmD.12-15μm3.HE染色过程中，细胞核被苏木素着色的核心原理是（）A.细胞核内核酸带负电荷，与带正电荷的氧化苏木精通过离子键结合B.细胞核蛋白带正电荷，与带负电荷的苏木精通过离子键结合C.苏木精通过渗透扩散作用进入细胞核完成着色D.苏木精与核内抗原通过特异性抗原抗体反应结合4.下列选项中，不属于组织固定核心目的的是（）A.抑制组织内溶酶体酶活性，防止细胞自溶与组织腐败B.保持细胞内原有结构与化学成分的形态、位置，避免移位或溶解C.使组织硬化，增强组织韧性，便于后续脱水、切片操作D.完全灭活组织内所有抗原成分，避免免疫交叉反应5.免疫组化热抗原修复方法中，临床最常用的pH6.0修复缓冲液为（）A.醋酸盐缓冲液B.柠檬酸盐缓冲液C.磷酸盐缓冲液D.碳酸盐缓冲液6.过碘酸-希夫（PAS）染色法主要用于检测组织中的哪类成分（）A.中性脂肪B.脱氧核糖核酸C.多糖类物质（糖原、黏多糖、真菌细胞壁多糖）D.弹力纤维7.用于透射电镜观察的超薄切片，组织固定首选的固定液为（）A.10%福尔马林B.2.5%戊二醛C.95%乙醇D.Bouin液8.病理切片常规封固用中性树胶的折光率约为（），与玻璃折光率接近，可保证镜下观察清晰度A.1.30B.1.42C.1.52D.1.709.下列染色方法中，专门用于显示网状纤维的是（）A.油红O染色法B.维多利亚蓝染色法C.Gomori氨性银染色法D.Masson三色染色法10.常规石蜡组织处理过程中，梯度乙醇脱水的正确顺序为（）A.100%乙醇→95%乙醇→90%乙醇→80%乙醇→70%乙醇B.70%乙醇→80%乙醇→90%乙醇→95%乙醇→100%乙醇C.30%丙酮→50%丙酮→70%丙酮→100%丙酮D.25%二甲苯→50%二甲苯→75%二甲苯→100%二甲苯11.HE染色过程中，用于分化操作的试剂通常为（），作用是褪去胞质及结缔组织中过染的苏木素，清晰显示核浆对比A.1%盐酸乙醇B.1%稀氨水C.0.5%伊红染液D.二甲苯12.组织透明环节的核心作用是置换组织内的脱水剂，为石蜡浸入创造条件，临床最常用的常规透明剂为（）A.无水乙醇B.二甲苯C.液态石蜡D.丙酮13.免疫组化链霉亲和素-过氧化物酶（SP）三步法的正确操作顺序为（）A.一抗孵育→酶标链霉亲和素孵育→生物素化二抗孵育→DAB显色B.生物素化二抗孵育→一抗孵育→酶标链霉亲和素孵育→DAB显色C.一抗孵育→生物素化二抗孵育→酶标链霉亲和素孵育→DAB显色D.酶标链霉亲和素孵育→一抗孵育→生物素化二抗孵育→DAB显色14.石蜡切片过程中，切片出现不规则龟裂、组织呈碎屑状的最常见原因是（）A.组织固定时间不足B.脱水、透明时间过长，浸蜡温度过高导致组织脆硬C.切片刀刀刃缺口D.展片水温低于40℃15.非放射性标记的原位杂交实验中，目前最常用的探针标记物为（）A.放射性核素³²PB.地高辛C.辣根过氧化物酶D.碱性磷酸酶16.下列针对感染性病理标本的处理操作，错误的是（）A.标本离体后立即放入10%中性福尔马林固定，固定时间不少于24小时B.标本取材必须在二级生物安全柜内操作，操作人员佩戴双层手套、护目镜C.剩余废弃组织经121℃高压蒸汽灭菌后按感染性医疗废物处置D.检测完成后的阳性蜡块无需特殊标识，可与普通蜡块一同存放，废弃时按生活垃圾处理17.采用常规Masson三色染色时，胶原纤维的着色为（）A.鲜红色B.蓝色/绿色C.棕黑色D.橙黄色18.常规石蜡切片捞片时，展片水浴的适宜温度范围为（）A.30℃以下B.42-48℃C.60-65℃D.70℃以上19.下列固定液中，最适合用于组织内糖原成分保存的是（）A.10%中性福尔马林B.Carnoy液C.Bouin液D.4%多聚甲醛20.免疫组化DAB显色系统中，抗原抗体阳性结合部位的显色结果为（）A.鲜红色B.棕黄色C.蓝黑色D.紫蓝色二、多项选择题（每题2分，共20分，多选、少选、错选均不得分）1.下列关于病理组织固定操作的规范要求，说法正确的有（）A.固定液的加注量应为待固定组织总体积的10-20倍B.常规组织采用10%中性福尔马林固定的适宜时间为6-24小时，避免固定不足或固定过度C.取材时组织块厚度不宜超过0.5cm，保证固定液充分渗透至组织中心D.固定温度以室温或4℃为宜，避免高温固定导致组织抗原破坏、形态收缩2.HE染色过程中，导致细胞核染色过浅、核结构显示不清的常见原因有（）A.标本固定不及时，组织发生自溶，核蛋白降解B.苏木素染液使用时间过长、氧化过度，染色能力下降C.盐酸乙醇分化时间过长，过度洗脱细胞核结合的苏木素D.切片脱蜡不彻底，蜡质残留阻碍染液与组织结合3.免疫组化染色过程中，导致非特异性背景染色的常见原因有（）A.一抗工作浓度过高，或孵育温度过高、时间过长B.内源性过氧化物酶、生物素未充分封闭C.抗体孵育过程中切片局部干燥，导致抗体非特异性粘附D.各步骤间洗涤不充分，未结合的残留抗体未被冲洗干净4.石蜡切片制备过程中，导致切片厚薄不均、褶皱较多的原因有（）A.切片机样本夹、刀架固定旋钮松动，切片时组织块或切片刀移位B.切片刀角度调整不当，适宜角度应维持在4°-6°，角度过大或过小均会影响切片质量C.组织块内部硬度不均，如存在未脱钙的骨组织、钙化灶或缝线残留D.展片时水温过高导致切片熔化5.下列特殊染色方法与检测目标的对应关系，正确的有（）A.油红O染色——中性脂肪B.齐-尼抗酸染色——结核分枝杆菌C.六胺银染色——真菌菌丝及孢子D.普鲁士蓝染色——含铁血黄素颗粒6.病理技术全流程质量控制的覆盖环节包括（）A.标本接收、信息核对环节B.标本固定、取材、脱水、包埋、切片环节C.常规染色、免疫组化、分子病理检测等实验操作环节D.蜡块、切片、病理申请单等档案管理环节7.下列关于冰冻切片技术的说法，正确的有（）A.冰冻切片制备速度快，无需脱水透明浸蜡流程，适用于术中快速病理诊断B.冰冻切片因细胞内冰晶形成、未经充分固定收缩，细胞形态清晰度较石蜡切片差C.冰冻切片可用于脂肪染色、酶组织化学染色等无法用石蜡切片完成的检测项目D.冰冻切片切取后无需固定，可直接进行染色操作8.免疫组化实验中，常用的抗原修复方法包括（）A.高压蒸汽热修复B.微波热修复C.胰蛋白酶/胃蛋白酶酶消化修复D.强酸浸泡修复9.病理实验室生物安全防护的核心要求包括（）A.取材室、标本处理室配备二级生物安全柜、洗眼器、应急喷淋装置B.操作感染性标本时穿戴隔离衣、N95口罩、护目镜、双层手套C.废弃组织标本、污染锐器经高压灭菌后按感染性医疗废物分类处置D.每日工作结束后采用1000mg/L含氯消毒剂擦拭工作台面，紫外线常规消毒10.病理切片封片操作中，常见的质量问题包括（）A.封固剂加注过快或盖玻片放置不当，导致组织区域残留气泡B.封片时切片未充分烘干，残留水分导致镜下出现云雾状浑浊C.封固剂加注过多溢出盖玻片，污染切片标签与镜台D.盖玻片尺寸过小，导致部分观察区域未被封固剂覆盖三、判断题（每题1分，共10分，正确打√，错误打×）1.市售40%甲醛溶液可直接作为常规固定液用于病理标本固定，无需稀释或添加缓冲成分。（）2.HE染色中，伊红属于碱性染料，可将细胞质、胶原纤维、肌纤维等嗜酸性结构染成粉红色。（）3.组织脱水操作需从高浓度乙醇开始逐步过渡到低浓度乙醇，减少组织收缩变形。（）4.免疫组化染色时同步设置阳性对照、阴性对照、空白对照，是保证染色结果可靠性的关键质控措施。（）5.石蜡包埋操作时，需将组织的观察切面朝下放置，与包埋盒底部紧密贴合，保证切片时可暴露最大病变切面。（）6.免疫荧光染色后的切片可室温避光长期保存，不会出现荧光淬灭现象。（）7.甲苯胺蓝染色显示肥大细胞时，肥大细胞胞质颗粒因异染性特性被染成紫红色，与周围蓝色背景形成明显对比。（）8.分子病理检测（如EGFR、HER2基因检测）所用的石蜡切片厚度一般为5-10μm，可根据组织标本大小适当调整，保证提取核酸的浓度与质量。（）9.病理组织取材时，标本上的手术缝线、金属标记物无需去除，可随组织一同包埋切片。（）10.根据《病理科建设与管理指南（试行）》要求，常规病理石蜡块、HE染色切片的保存期限应不少于15年。（）四、简答题（每题8分，共32分）1.简述常规石蜡切片制备的完整操作流程及各环节的核心注意事项。2.简述HE染色过程中出现核浆分界不清、染色对比度差的常见原因及优化措施。3.简述免疫组化染色中非特异性染色的主要来源及防控方法。4.简述病理科日常工作中的生物安全防护核心要点。五、案例分析题（共18分）某三级医院病理科在开展乳腺癌根治标本HER2免疫组化检测的过程中，连续3个批次的染色结果出现以下三类问题：①烤片及抗原修复环节，近30%的切片出现部分区域组织脱落，尤其是肿瘤实质质地较脆的区域脱片最为明显，无法完成结果判读；②染色完成后镜下观察，间质区域可见弥漫性浅棕黄色背景，肿瘤细胞膜染色边界模糊，无清晰的膜定位，无法按照HER2判读标准进行评分；③部分切片镜下可见散在分布的蓝黑色点状沉渣，遮挡肿瘤细胞观察视野。请结合病理技术操作规范，逐一分析上述问题的可能诱因，并提出对应的整改方案。参考答案一、单项选择题1.C2.B3.A4.D5.B6.C7.B8.C9.C10.B11.A12.B13.C14.B15.B16.D17.B18.B19.B20.B二、多项选择题1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABC5.ABCD6.ABCD7.ABC8.ABC9.ABCD10.ABCD三、判断题1.×2.×3.×4.√5.√6.×7.√8.√9.×10.√四、简答题1.（1）标本接收与核对：接收标本时严格核对患者姓名、住院号、标本部位、标本数量及固定状态，对信息不符、固定液不足、标本干涸的不合格标本及时退回并记录；（1分）（2）取材操作：将标本修剪为大小约2.0cm×1.5cm×0.3cm的组织块，厚度不超过0.5cm，避免因组织过厚导致固定、脱水不全；剔除组织上的缝线、钙化灶、金属夹等硬物，避免损伤切片刀；（1分）（3）固定补充：取材后的组织立即放入10%中性缓冲福尔马林中，固定液量为组织体积的10-20倍，常规标本固定6-24小时，确保组织蛋白充分交联，避免自溶；（1分）（4）脱水、透明、浸蜡：采用梯度乙醇从低浓度到高浓度逐步脱水（70%→80%→90%→95%Ⅰ→95%Ⅱ→100%Ⅰ→100%Ⅱ），每步时间根据组织类型调整为30min-2h，定期检测乙醇浓度，及时更换失效试剂；脱水完成后采用二甲苯透明2次，每次15-30min，观察至组织呈半透明状即可，避免透明过度导致组织脆硬；透明后放入熔点为56-58℃的石蜡中浸蜡3次，每次30min-1h，浸蜡温度不超过62℃，避免高温破坏组织抗原；（2分）（5）包埋：将熔蜡注入包埋模，用温镊子将组织切面朝下平放于包埋模底部，放入对应信息的包埋盒，补充熔蜡后放置于冷台冷却，保证组织平整、无气泡，标签信息清晰；（1分）（6）切片与捞片：将蜡块固定于切片机，粗修暴露组织最大切面，调整切片刀角度为4°-6°，连续切取3-5μm厚度的切片；将切片平铺于42-48℃的蒸馏水中展片，充分展平褶皱后用防脱载玻片捞取，沥干水分后放入60-65℃烤片机中烤片40-60min，增强组织粘附性。（2分）2.常见原因及优化措施如下：（1）固定环节问题：诱因包括标本固定不及时、固定液浓度不足、固定时间不够，导致细胞自溶、核蛋白降解，核染色能力下降。优化：严格执行标本离体30min内固定的要求，保证固定液浓度与加注量，大标本切开固定，避免中心固定不良；（2分）（2）染液质量问题：诱因包括苏木素染液氧化过度、染色能力下降，伊红染液pH值偏离4.5-5.0的适宜范围，导致着色力不足。优化：定期更换染液，苏木素使用前充分氧化成熟，每周过滤去除表面氧化膜与沉渣；调整伊红染液pH值，加入少量冰醋酸维持染液酸性，保证伊红着色力；（2分）（3）染色操作问题：诱因包括苏木素染色时间不足、分化时间过长导致核染色过浅，蓝化不足导致核呈灰红色，伊红染色时间过短或高浓度乙醇过度洗脱伊红导致胞质染色过浅。优化：根据染液新旧调整染色时间，分化操作时在镜下监控分化程度，分化后用流动自来水或稀弱碱性溶液充分蓝化，保证细胞核呈蓝黑色；控制伊红染色时间，低浓度乙醇脱水时控制时长，避免过度洗脱伊红；（2分）（4）脱水透明问题：诱因包括脱水试剂浓度不足、透明不彻底，导致切片发雾、结构模糊。优化：定期更换脱水、透明试剂，保证脱水透明充分，封片前确保切片完全干燥，避免残留水分导致镜下浑浊。（2分）3.非特异性染色来源及防控方法如下：（1）内源性因素干扰：诱因包括红细胞、粒细胞中的内源性过氧化物酶可与DAB反应产生棕黄色背景，肝、肾、乳腺等组织中的内源性生物素可与亲和素系统结合导致非特异着色，坏死组织、胶原纤维存在自发荧光干扰。防控：采用3%H2O2室温孵育10-15min充分灭活内源性过氧化物酶；采用生物素阻断剂封闭内源性生物素，或选用非生物素检测系统（如EnVision聚合物法）消除生物素干扰；免疫荧光染色时采用自发荧光淬灭剂处理切片；（3分）（2）操作不当导致的非特异染色：诱因包括一抗浓度过高、孵育时间过长导致抗体非特异性结合，孵育过程中切片干片导致抗体粘附，洗涤不充分导致未结合抗体残留，抗原修复过度导致蛋白暴露过多。防控：通过预实验摸索一抗最佳工作浓度，优先选择4℃过夜孵育一抗；孵育时使用湿盒，保证抗体液完全覆盖组织，避免干片；每步孵育后用含0.05%Tween-20的PBS充分洗涤3次，每次5min；根据抗原特性选择适宜的修复方法，控制修复温度与时间，避免过度修复；（3分）（3）试剂因素导致的非特异染色：诱因包括抗体纯度不足存在交叉反应，封闭血清与二抗来源不匹配，无法有效封闭非特异结合位点。防控：选择经过临床验证的高特异性抗体，使用与二抗同来源的正常血清室温封闭20min，减少非特异结合；选用正规渠道采购的检测试剂盒，严格按照说明书操作。（2分）4.病理科生物安全防护核心要点包括：（1）设施与区域管理：划分清洁区、半污染区、污染区，污染区配备二级生物安全柜、洗眼器、应急喷淋装置、高压灭菌设备，手卫生设施配置到位，区域标识清晰；（2分）（2）个人防护：常规操作时穿戴工作服、一次性手套、医用外科口罩；取材、处理结核、病毒性肝炎、艾滋病等感染性标本时，加穿隔离衣、佩戴N95口罩、护目镜或面屏、双层手套；操作中手套破损立即更换，按流程进行手消毒；（2分）（3）标本操作规范：所有标本取材、切割操作均在生物安全柜内进行，避免产生气溶胶；感染性标本固定时间不少于24小时，确保病原体充分灭活；脱钙操作在通风橱内进行，避免酸液飞溅；（2分）（4）废物处置管理：废弃组织、污染耗材放入感染性医疗废物袋，锐器放入防刺穿锐器盒，经121℃高压灭菌后由有资质的单位转运处置；甲醛、二甲苯等有毒化学试剂按化学性废物分类收集，交由专业机构处置，禁止直接倒入下水道；（1分）（5）环境消毒管理：每日工作结束后用1000mg/L含氯消毒剂或75%乙醇擦拭工作台面，紫外线照射消毒30min；发生标本渗漏时，立即用2000mg/L含氯消毒剂覆盖污染区域30min后再清理；（0.5分）（6）人员管理：定期开展生物安全培训，工作人员上岗前完成乙肝疫苗等相关疫苗接种，定期开展健康体检；制定职业暴露应急预案，发生锐器伤、标本溅入黏膜等暴露事件时，立即按规范流程处置并上报。（0.5分）五、案例分析题1.针对切片脱片问题的原因分析与整改方案：（1）原因分析：①载玻片防脱处理不合格，防脱涂层（多聚赖氨酸/APES）涂布不均或失效，组织粘附力不足；②组织脱水、透明、浸蜡不充分，组织硬度不足，切片时组织褶皱多、粘附性差；③烤片温度不足、时间过短，组织与玻片未紧密贴合；④抗原修复时温度骤变，切片从常温直接放入煮沸的修复液中，或高压修复后立即冷却，热冲击导致组织脱落；⑤捞片时组织与玻片之间残留水膜，粘附力下降。（3分）（2）整改方案：更换合格的商品化防脱载玻片，自行处理的载玻片需严格按流程涂布防脱剂，密封保存避免受潮；检查脱水机试剂浓度，及时更换失效试剂，调整脱水、透明、浸蜡程序参数，保证组织处理充分；烤片温度设置为62℃，烤片时间不少于40min；抗原修