《分枝杆菌感染实验诊断标准》解读

《分枝杆菌感染实验诊断标准》解读【摘要】中华人民共和国国家卫生健康委员会于2026年5月发布《WS/T884—2026分枝杆菌感染实验诊断标准》，并将于2026年11月1日起正式实施。本文系统梳理该标准框架、核心技术条款、流程规范与质控要求，旨在为各级医疗机构实验室的规范执行提供具体指导。【关键词】分枝杆菌感染；实验室；诊断；分子生物学；总结性报告(主题)根据世界卫生组织《2025年全球结核病报告》，结核病已重新位列全球单一传染源致死原因之首[1]。我国结核病负担依然处于高位，且非结核分枝杆菌（nontuberculousmycobacteria，NTM）肺病近年来发病率持续上升。然而，既往在标本采集运输保存、镜检、培养、免疫学检测、分子检测、药物敏感试验、结果报告、生物安全及质量控制等全链条环节一直缺乏统一的行业标准；加之各级实验室操作、判读和报告方面参差不齐，导致低载量标本漏检、耐药检测不规范、NTM菌种鉴定不足等问题突出[2]。中华人民共和国国家卫生健康委员会于2026年5月25日正式发布由华中科技大学同济医学院附属同济医院、武汉市肺科医院、首都医科大学附属北京胸科医院、中国疾病预防控制中心等单位联合起草的《WS/T884—2026分枝杆菌感染实验诊断标准》（以下简称“标准”）。该标准旨在规范分枝杆菌感染实验室诊断的全流程，包括操作程序、结果判读与报告发布，从而推动各级医疗机构之间的结果互认。本文将解读该标准的适用范围、标本质量管理、主要检测技术、实验诊断流程，并提炼其亮点，同时，分析实施中的重点和难点，以期为医疗机构实验室规范开展分枝杆菌感染诊断提供实践指导。一、适用范围本标准适用于各级医疗机构临床微生物实验室，将于2026年11月1日起实施。其适用范围为人体标本中结核分枝杆菌复合群（Mycobacteriumtuberculosiscomplex，MTBC）及NTM的实验诊断，不适用于麻风分枝杆菌检测。所有开展分枝杆菌相关检测的医疗机构检验科室及第三方医学检验实验室均可遵照执行，实际应用中应注意区分适用边界，不得将本标准套用于麻风分枝杆菌检测。二、标本质量管理对每份标本进行质量核查并拒收不合格者，是保障检测流程规范运行、获得可靠结果的关键环节。须逐一核对每份标本的质量达标情况及信息记录完整性。不合格标本应予以拒收，并通知重新采集送检。若信息记录不完整，应及时联系标本采集科室或相关人员，补充必要信息以补全记录。若无法在床旁即时完成检测，则须正确标记标本，并安全、及时地转运至实验室；转运时应充分考虑运输距离及在途时间，以确保样本的完整性[3]。（一）标本送检指征1.可疑肺结核：咳嗽、咳痰≥2周，或咯血，或胸部影像学检查（如胸部X线检查、胸部CT检查）提示肺结核者，应采集3份痰液标本送检（即时痰、夜间痰、清晨痰）。2.可疑NTM肺病：结构性肺病、慢性阻塞性肺疾病，或长期使用激素/免疫抑制剂者，若出现反复肺部感染或常规抗感染治疗效果不佳，应送检分枝杆菌检测。3.肺外分枝杆菌感染：表现为淋巴结脓肿、骨关节病变、皮肤窦道，或脑脊液、胸腹腔积液等无菌体液异常者，应送检相应标本。4.免疫缺陷人群筛查：HIV感染者、器官移植受者、自身免疫病患者等免疫功能低下人群，应将分枝杆菌检测纳入常规筛查项目。（二）标本类型、采集量与保存标本类型、采集量与保存等要求具体见表1。（三）标本拒收规则出现以下任一情形，标本应拒收，并通知临床科室重新采集：（1）标本量不足、容器渗漏、标识缺失或组织标本已使用固定液（如甲醛）处理。（2）痰液标本以唾液为主（质量不合格），或室温放置超过规定时限。（3）标本外观明显污染（如混浊、异味、肉眼可见菌落等）。三、主要检测技术（一）显微镜检查涂片显微镜检查操作简便、成本低廉，可快速检测标本及培养物中的抗酸杆菌，是分枝杆菌感染诊断的首选初筛方法。标准明确了针对不同类别标本的涂片前预处理方法，并推荐了3种染色方法的操作步骤、注意事项及结果报告与解释，同时，比较了3种方法的优缺点、质控要求及适用场景，包括萋-尼染色（热染法，经典方法）、荧光染色（金胺O，敏感度高，推荐优先用于临床标本）；改良Kinyoun染色（冷染法，适用于快速生长分枝杆菌感染标本）。荧光染色镜检阴性结果需观察≥50个视野，光学染色阴性结果需观察≥300个视野。结果采用标准中的定量分级报告（抗酸杆菌阴性、抗酸杆菌±、抗酸杆菌阳性1+～4+）。每检测日均应进行室内质控，以龟分枝杆菌（Mycobacteriumchelonae，ATCC93326）为阳性质控，大肠埃希菌（Escherichiacoli，ATCC25922）为阴性质控。需注意，抗酸杆菌染色法敏感度低（痰标本细菌检出限为5000～10000个/mL），阴性结果不能排除分枝杆菌感染。除分枝杆菌外，奴卡菌属、红球菌属等也可呈抗酸杆菌染色阳性，需通过培养或分子方法进一步鉴别。此外，涂片结果应报告“抗酸杆菌阳性”，而非“MTBC阳性”[4]。（二）分离培养分离培养是分枝杆菌感染诊断的“金标准”，也是药物敏感试验的基础。本标准建议所有标本在培养接种前均应进行前处理（如NaOH法或N-乙酰半胱氨酸-NaOH法），以消化黏液、灭活杂菌并浓缩菌体。此外，本标准对不同样本类型的前处理方式进行规范：无菌体液可直接离心后取沉淀接种；粪便样本则需与无菌生理盐水混匀、静置后取上清液，再进行常规前处理，以提高检出率并减少污染[5]。固体培养应将标本接种于罗氏培养基或米氏培养基，于36℃±1℃孵育，观察至少8周（某些菌种需延长至8～12周）。液体培养使用全自动分枝杆菌培养监测系统或手工法，连续培养42d，无菌生长则报告分枝杆菌培养阴性。接种后应定期观察菌落生长及污染情况，若出现污染，应核查原因，必要时重新采集样本并再次培养。本标准建议对于疑似分枝杆菌感染患者的标本同时进行固体和液体培养，以提高检出率。每批标本处理时，应使用5～10mL无菌生理盐水或者缓冲液作为阴性对照，以监测实验操作、试剂耗材及环境中可能存在的污染。若阴性对照检测为阳性，则整批样本检测结果无效，应核查操作全过程。（三）菌种鉴定菌种鉴定是鉴别MTBC与NTM的关键环节。标准推荐以下3种方法：（1）MPT64抗原检测（免疫层析法）：MPT64为MTBC分泌的特异性抗原，适用于新鲜培养物，可在数分钟内获得检测结果。（2）基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法（matrix-assistedlaserdesorptionionizationtime-of-flightmassspectrometry，MALDI-TOFMS）：适用于纯培养物，通常可鉴定到种或复合群水平。（3）核酸鉴定：包括直接测序法或其他经验证的分子检测方法，适用于培养物中的分枝杆菌核酸，可用于疑难菌株的鉴别。（四）核酸检测分子生物学方法是结核病实验室检测的重要工具，具有较高的敏感度和特异度，可有效缩短MTBC鉴定及耐药检测的时间。本标准详细列出了常用的核酸扩增试验（nucleicacidamplificationtest，NAAT），包括实时荧光PCR、等温扩增、巢式PCR、多重PCR、基因芯片、线性探针及测序技术（如Sanger测序、全基因组测序、宏基因组测序、靶向测序及纳米孔测序）等，并系统比较了各技术原理与应用特点（表2）。不同分子生物学方法用于核酸鉴定和耐药检测的靶标不同。常用核酸鉴定靶标包括16SrRNA基因、ITS（16S-23SrRNA基因间隔区）、rpoB基因、hsp65基因及IS6110、IS1081序列；耐药相关靶标涵盖利福平（rpoB基因507～533密码子）、异烟肼（katG基因315密码子或inhA基因启动子）、氟喹诺酮类药物（gyrA、gyrB基因）等。近年来，测序技术发展迅速，全基因组测序、靶向二代测序及纳米孔测序等测序方法成本持续下降。获得测序结果后，结合适当的生物信息学分析，几乎可获取病原体基因组全部信息。本标准将核酸检测系统按复杂度分为低、中、高3个等级，便于不同层级实验室根据自身条件选择适宜技术。在结果判读方面，检测结果为阴性时，不能完全排除分枝杆菌感染；结果为阳性时，应结合临床症状进行综合判断。（五）免疫学检测人体感染分枝杆菌后，菌体与机体免疫系统相互作用，诱导产生多种特异性标志物，这些标志物可作为活动性结核病的辅助诊断指标。尿液脂阿拉伯甘露聚糖（lipoarabinomannan，LAM）抗原检测为床旁快速检测方法，适用于HIV阳性合并结核病症状的成人或儿童；对于CD4+T细胞＜200个/μL的HIV感染者，无论是否出现结核病症状，均宜进行尿液LAM抗原检测。该方法检测敏感度有限，不宜常规用于HIV阴性人群。但近年研究表明，随着免疫学化学发光检测技术的进步，该方法在HIV阴性但有结核病症状的人群中亦呈现出较高的检出率[8]。LAM抗原经肾脏代谢后主要浓集于尿液，血液中亦可检出，但血液LAM抗原浓度较低，其检出率通常低于尿液LAM抗原检测。然而，有研究报道，采用较高敏感度的检测方法可提高血液中LAM抗原的检出率[9]。γ-干扰素释放试验（interferon-gammareleaseassay，IGRA）包括酶联免疫斑点试验(enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOTassay)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)。IGRA阳性提示机体感染MTBC，但不能区分活动性结核病和结核分枝杆菌潜伏感染，亦不能用于疗效监测[10]。该方法的检测靶标为人体致敏T细胞产生的γ-干扰素，因此，免疫抑制状态可能导致假阴性率升高或者不确定结果比例增加；此外，部分NTM感染存在交叉抗原，可致IGRA假阳性。（六）药物敏感试验抗微生物药物敏感试验分为表型检测（基于培养物生长表型）和基因型检测（基于耐药基因突变检测）。基因型检测可直接用于培养物及临床样本，快速提供耐药基因检测结果，供临床医生据此尽早制订治疗方案，但其他结果不能完全替代表型药物敏感试验。表型药物敏感试验分为固体培养基法和液体培养基法，后者又分为微量肉汤稀释法和仪器法。这3种方法均可用于MTBC的药物敏感试验，而快速生长型分枝杆菌和缓慢生长型分枝杆菌目前仅推荐使用微量肉汤稀释法。表型药物敏感试验手工操作环节较多，涉及菌液制备、接种、培养温度控制及结果判读等多个步骤，对操作人员要求较高[11-12]。此外，每批次药物敏感试验均应加入常规质控菌株。只有当质控菌株的药物敏感试验结果在合理的最低抑菌浓度（minimuminhibitoryconcentration，MIC）值范围内时，且阴性和阳性对照均符合判读要求时，方可对样本检测结果进行判读；否则，该批结果无效，需要重新检测。不同药物敏感试验方法的结果判读标准各异。若结果超出合理范围，应进行复测；若复测结果仍无变化，则应与临床医师沟通，注意治疗方案中可能存在交叉耐药，并据此合理调整治疗药物。NTM药物敏感试验判读时，需根据菌种选用相应的药敏板。例如，脓肿分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌复合群及堪萨斯分枝杆菌的MIC判读阈值差别较大，应注意区分。此外，磺胺类药物以80%生长抑制为MIC终点，其余药物则以完全抑制生长为终点。出现跳孔或混合菌落时，应复测[13-14]基因型药物敏感试验通过检测耐药相关基因突变快速判定耐药性，适用于菌株及临床标本（包括涂阴及培养阴性标本），是耐药结核病快速筛查和辅助诊断方法。本标准列出了各类药物对应的主要耐药基因靶标。四、分枝杆菌完整实验诊断流程分枝杆菌完整实验诊断流程见图1。五、总结本标准首次将MTBC和NTM的诊断纳入全流程管理，正式将数字PCR、全基因组测序等前沿分子检测技术写入行业标准，明确了基层、区域及省级结核实验室分级管理制度与准入检测项目，细化了生物安全、标本拒收、室内质控及室间质控的全套量化指标。新增异质性耐药检测，以适配精准抗结核治疗，统一了全国分枝杆菌检测报告术语，消除了实验室间结果解读的差异。本标准在全国范围内的实施，将对分枝杆菌感染诊断工作起到指导性作用，推动诊断流程更加规范化与标准化，提高分枝杆菌感染检测的准确率，为临床提供及时、全面、精准的检测方案，有效提升分枝杆菌感染诊断水平，并支撑我国结核病“防、筛、诊、治”一体化防控体系建设。参考文献[1]屈燕,李涛,马文斌,等.世界卫生组织《2025年全球结核病报告》解读[J].结核与肺部疾病杂志,2025,6(6):613-623.doi:10.19983/j.issn.2096-8493.20250178.[2]Brown-ElliottBA,FalkinhamJO,FurlongJL,etal.Laboratorydiagnosisofnontuberculousmycobacteria–anupdate–Part1★:Epidemiology,environmentsources,andguidancefortheprovider.ClinicalMicrobiologyNewsletter,2025,52:31-43.doi:10.1016/j.clinmicnews.2025.06.006.[3]WorldHealthOrganization.Practicalmanualontuberculosislaboratorystrengthening,2022update[R].Geneva:WorldHealthOrganization,2022.[4]中国医疗保健国际交流促进会临床微生物与感染分会,中华医学会检验医学分会临床微生物学组,中华医学会微生物学和免疫学分会临床微生物学组.综合医院结核分枝杆菌感染实验室检查共识[J].中华检验医学杂志,2022,45(4):343-353.doi:10.3760/114452-20211118-00722.[5]卢洪洲,钱雪琴,黄海荣.结核病实验室检测与图解[M].上海:上海科学技术出版社,2021.[6]ZhangS,XuY,HuangM,etal.EnhanceddiagnosisoftuberculouspleurisyusingamultiplexdropletdigitalPCRassaytargetingcirculatingmycobacterialDNA[J].Thorax,2026,81(8):738-748.doi:10.1136/thorax-2025-223553.[7]LiuD,HuangF,LiY,etal.TransmissioncharacteristicsinTuberculosisbyWGS:nationwidecross-sectionalsurveillanceinChina[J].EmergMicrobesInfect,2024,13(1):2348505.doi:10.1080/22221751.2024.2348505.[8]HamasurB,OkunolaAO,SerubiriJ,etal.Performanceofanext-generationrapidlipoarabinomannanurineassayfortuberculosisinoutpatientswithandwithoutHIVinSouthAfricaandUganda:atwo-centrediagnosticaccuracystudy[J].LancetMicrobe,2026:101418.doi:10.1016/j.lanmic.2026.101418.[9]DrainPK,NiuX,ShapiroAE,etal.Real-worlddiagnosticaccuracyoflipoarabinomannaninthreenon-sputumbiospecimensforpulmonarytuberculosisdisease[J].EBioMedicine,2024,108:105353.doi:10.1016/j.ebiom.2024.105353.[10]YangC,ShiX,ZhangS,etal.Longitudinaldynamicsandtreatment-associateddeterminantsofinterferon-gammaresponsesintuberculosis:a10-yearretrospectiveQuantiFERON-TBGoldstudy[J].F