CT26.WT成瘤流程梳理：关键步骤与注意事项_第1页
CT26.WT成瘤流程梳理：关键步骤与注意事项_第2页
CT26.WT成瘤流程梳理：关键步骤与注意事项_第3页
CT26.WT成瘤流程梳理：关键步骤与注意事项_第4页
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文档简介

01细胞基础信息细胞名称：CT26.WT（小鼠结肠癌细胞）细胞别称：CT26WT细胞货号：SNL-117（RRID：CVCL_7256）培养基：1640+10%FBS+1%P/S培养环境：37℃；5%CO2；饱和湿度CT26.WT培养参考形态（细胞形态受多方面因素影响，不同实验室可能略有差异）02细胞背景CT26细胞是以N-亚硝基-N-甲基氨基甲酸酯(NNMU)诱导形成的未分化结肠癌细胞株，它克隆形成的细胞株命名为CT26.WT。用包含编码典型肿瘤相关抗原(TAA)β-半乳糖苷酶(β-gal)、lacZ基因的逆转录病毒载体LXSN稳定转染CT26.WT细胞，得到致死的亚克隆CT26.CL25。即使CT26.CL25细胞表达了典型的TAA-β-半乳糖苷酶，在正常小鼠中CT26.CL25细胞和CT26.WT细胞的生长率与致死率也保持基本一致。CT26.WT细胞与CT26.CL25细胞一起可用作测试免疫治疗程序的模型，并用于研究宿主免疫反应。2001年7月提交给ATCC的培养物被发现被支原体污染，通过用BMCycline治疗21天治愈后代，治疗后6周，通过Hoechst染色、PCR和标准培养试验对细胞进行支原体检测，所有测试均为阴性。CT26.WT细胞可以用于3D细胞培养。03尚恩说明1.尚恩生物仅进行小鼠背部皮下成瘤实验，其他部位成瘤实验建议参考文献资料并在有丰富经验的技术人员指导下进行操作；2.成瘤实验受细胞活性、细胞数量、小鼠状态、个人操作等多方面因素影响，本文内容作为尚恩生物成瘤实验情况介绍，仅供参考；3.尚恩生物始终秉持对实验动物高度敬重的心态，致敬每一只为人类科研事业献身的实验动物。本文相关操作遵循实验动物福利规范，由实验动物专业人员操作，内容仅限科研人员交流心得，禁止以猎奇心态传播本文内容。04成瘤操作1.细胞采用10cm培养皿贴壁培养，培养到80%左右密度时，消化细胞收集细胞悬液；2.细胞悬液900rpm离心3min，用4-5mLPBS重悬细胞；3.再次900rpm离心3min，用0.5mLPBS重悬细胞；4.取少量PBS重悬的细胞进行计数及活率检测，根据计数结果，按100万/只小鼠活细胞悬液；（取出的单只小鼠所需细胞悬液体积低于100uL可以补加PBS至100uL，超过200uL需要离心收集沉淀并用100uLPBS重悬，体积介于100-200uL可以直接正常注射）5.使用1mL注射器吸取细胞悬液，注射到小鼠皮下或其他部位；6.观察记录小鼠瘤体生长情况，通常实验建议小鼠瘤体不大于20mm，重量不超过小鼠体重10%，具体规定各单位实验动物伦理委员会审查标准略有差异，建议提前咨询。05成瘤记录图1：各阶段瘤体生长情况图2：瘤体解剖情况06注意事项1.皮下、肌肉注射成瘤时使用75%酒精棉消毒皮肤并充分暴露，确保细胞悬液完全注入指定位置，为方便观察可以对注射部位附近进行剃毛处理；2.饲养过程中需保持饲养环境稳定、清洁，食物、水充足且干净；3.探查瘤体时，用手指轻柔探查，禁止大力揉捏成

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