纯培养和显微技术课件

純培養和顯微技術

微生物的基本特點：小！在絕大多數情況下都是利用微生物的群體來研究其屬性；微生物的物種（菌株）一般也是以群體的形式進行繁衍、保存；培養技術在微生物學中具有重要意義！在研究中所使用的微生物培養群體：培養物：在一定的條件下培養、繁殖得到的微生物群體混合培養物：含有多種微生物的培養物；純培養物：只有一種微生物的培養物；通常情況下只有純培養物才能提供可以重複的結果純培養技術是進行微生物學研究的基礎！微生物個體微小的特點也決定了顯微技術是進行微生物研究的另一項重要技術，因為絕大多數微生物的個體形態及其內部結構只能通過顯微鏡才能進行觀察和研究。微生物的基本特點：小！第一節微生物的分離和純培養

從混雜的群體中分離特定的某一種微生物，是研究和利用微生物的第一步。一、無菌技術用於分離、培養微生物的器具事先不含任何微生物；在轉接、培養微生物時防止其他微生物的污染；其自身不污染操作環境1、微生物培養的常用器具及其滅菌常用的器具：試管、瓶子、培養皿等1887年，RJPetri發明

Petridish高溫幹熱滅菌高壓蒸汽滅菌試管、瓶子、培養皿等常用的滅菌方法：1、微生物培養的常用器具及其滅菌常用的器具：無菌操作：火焰附近（酒精燈、煤氣燈）進行無菌操作：在無菌箱或操作室內無菌的環境下進行二、用固體培養基分離純培養培養基：液體培養基；固體培養基；半固體培養基；二、用固體培養基分離純培養培養基：液體培養基；固體培養基；半固體培養基；瓊脂柯赫（RobertKoch）的助手WHeese和他的夫人FranHeese二、用固體培養基分離純培養菌落（colony）：

單個（或聚集在一起的一團）微生物在適宜的固體培養基表面或內部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態結構的子細胞生長群體（P13）眾多菌落連成一片菌苔（lawn）不同微生物在特定培養基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩定的特徵（形狀、顏色等），可以成為對該微生物進行分類、鑒定的重要依據（見P14圖2-3）。（P6圖2-3）同一細菌在不同的培養平板上形成不同的特徵菌落二、用固體培養基分離純培養使微生物在固體培養基平板上形成單個菌落的基本方法：稀釋！二、用固體培養基分離純培養1、稀釋倒平板法2、塗布平板法操作較麻煩，對好氧菌、熱敏感菌效果不好！使用較多的常規方法，但有時塗布不均勻！二、用固體培養基分離純培養3、平板劃線法二、用固體培養基分離純培養3、平板劃線法二、用固體培養基分離純培養4、厭氧微生物的分離厭氧罐厭氧手套箱厭氧罐厭氧手套箱二、用固體培養基分離純培養4、厭氧微生物的分離稀釋搖管法三、用液體培養基分離純培養0.050.05+0.0025+0.004=0.975稀釋法進行液體分離必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，大多數（一般應超過95%）表現為不生長。例如：若同一稀釋度的試管中有95%表現為不生長，則生長的試管中僅含一個細胞的幾率為：5%；含二個細胞的幾率為：0.25%；含三個細胞的幾率為：0.004%在有細菌生長的試管中得到純培養的幾率為97.5%四、單細胞（孢子）分離一般採用顯微操作儀，在顯微鏡下進行；操作難度與細胞或個體的大小成反比；五、選擇培養分離抑制大多數其他微生物的生長；使待分離的微生物生長更快；使待分離的微生物在群落中的數量上升，方便用稀釋法對其進行純化。微生物群落中數量占少數的微生物的分離純化：使待分離的微生物生長“突出”；直接挑取待分離的微生物的菌落獲得純培養。五、選擇培養分離1.利用選擇平板進行直接分離待分離的微生物生長，其他微生物的生長被抑制高溫下培養：分離嗜熱細菌；培養基中不含N：分離固氮菌；培養基加抗生素：分離抗性菌；五、選擇培養分離1.利用選擇平板進行直接分離待分離的微生物的生長特徵明顯不同於其他微生物顏色反應：分離特定的菌株；牛奶平板：分離蛋白酶產生菌；五、選擇培養分離2.富集培養從自然界中分離到所需的特定微生物特定的環境條件僅適應於該條件的微生物旺盛生長待分離微生物在群落中的數量大大增加六、二元培養物培養物中只含有二種微生物，而且是有意識的保持二者之間的特定關係的培養物稱為二元培養物。病毒和宿主細胞；纖毛蟲、變形蟲和粘細菌；在一定時間內使菌種不死、不變、不亂（參見P19）基本要求：基本方法：生活態休眠態培養基傳代培養寄主傳代培養冷凍乾燥斜面、平板液氮、低溫冰箱沙土管、冷凍真空乾燥七、微生物的保藏技術第二節顯微鏡和顯微技術幾個基本概念：放大解析度反差被觀察物越小，放大倍數應越大，否則難以看清！能辨別兩點之間最小距離的能力被觀察物區別於背景的程度被觀察物區別於背景的程度與顯微鏡的自身特點有關，但也取決於進行顯微觀察時對顯微鏡的正確使用及良好的標本製作和觀察技術，這就是顯微技術。一、顯微鏡的種類及原理1.普通光學顯微鏡複式顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理1.普通光學顯微鏡光學顯微鏡一般配置的最大放大倍數是多少？為什麼？如何實現光學顯微鏡一般配置的最大放大倍數？其原理？目鏡：10~20╳；物鏡：100╳；總放大倍數1000~2000╳；使用油鏡，即在100╳物鏡和載玻片之間滴加香柏油；0.5l解析度（最小可分辨距離）=————

nsinqλ：光波波長n：玻片與物鏡間介質的折射率θ：為物鏡鏡口角的半數1.普通光學顯微鏡1.普通光學顯微鏡0.5l解析度（最小可分辨距離）=————

nsinqq為物鏡鏡口角的半數，它取決於物鏡的直徑和工作距離1.普通光學顯微鏡0.5l解析度（最小可分辨距離）=————

nsinqN：玻片與物鏡間介質的折射率空氣(n=1.0)、水(n=1.33)、香柏油(n=1.52)、玻璃(n=1.54)普通光學顯微鏡又稱明視野顯微鏡其照明光線直接進入視野，屬透射照明。一、顯微鏡的種類及原理2.暗視野顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理3.相差顯微鏡4.螢光顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理4.螢光顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理一、顯微鏡的種類及原理5.透射電子顯微鏡；6.掃描電子顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理5.透射電子顯微鏡；6.掃描電子顯微鏡一、顯微鏡的種類及原理7.掃描隧道顯微鏡本章小結

培養物、純培養物、無菌操作、菌落、菌苔稀釋倒平板法、塗布平板法、平板劃線法選擇培養分離、富集培養稀釋法、菌種保藏TEM、SEM、STM、AFM