《培养基制备与质控规范》条款解析

LABORATORYSOP·培训宣贯《培养基制备与质控规范》条款解析逐条对照·操作规范·质控红线汇报时间：2026条款解析导览01标准依据与框架三大权威标准与三类测试方法02制备过程质控称量溶解pH灭菌分装关键参数03性能测试方法定量半定量定性与判定限值04菌落形态与无菌性典型案例与质量红线05接收贮存与新版要点全生命周期与2024版新增标准依据与框架先立标准，再谈条款01权威依据三大权威依据奠定质控基础GB4789.28食品安全领域核心聚焦培养基和试剂的质量要求与测试方法《中国药典》2020年版四部通则药品与无菌检查依据GB/T27405·ISO11133实验室质量控制规范支撑覆盖制备、生产、贮存与性能测试全流程逐条对照前，先确认适用体系把药典限值套用到食品检验培养基上先确认本单位检品适用的标准体系，再匹配对应条款《培养基制备与质控规范》条款解析·202604/30标准更新·性能测试分类GB4789.28新版归纳三类测试GB4789.28—2024已代替

GB4789.28—2013，最大变化：把培养基和试剂的性能测试方法归纳为三类测试类别

一定量方法测试对象固体培养基的目标菌生长率测试结果PR生长率测试类别

二半定量方法测试对象液体增菌培养基选择性液体计数培养基非目标菌抑制性评价测试类别

三定性方法测试对象菌落形态、鉴别特征生化反应是否符合要求三类归纳让生产商、检测机构、实验室自制培养基的质控更便于执行与记录逐条对照第一步：先判断培养基类型，再锁定对应测试类别《培养基制备与质控规范》条款解析·202605/30标准条款解析行业标准的结构性更新标准版本SN/T1538.1—2016取代2005版术语项数2332项适用范围扩展至三类培养基商品化即用型脱水合成成分制备与ISOTS11133-1:2009相比，差异集中于三点本地化差异增加中国药典水质检测特殊要求强化商业即用型培养基验收条款附录B疑难解答为独有内容行业标准在通用框架之外补上本地化要求；核验验收条款时，应优先比对这一版结构。《培养基制备与质控规范》条款解析·202606/30制备过程质控参数失控，质量无从谈起02制备前准备制备前准备：器皿试剂仪器三查先熟悉配方与制备要求，确保环境洁净，必要时在生物安全柜或洁净工作台内操作。器皿检查一查玻璃器皿洁净、无划痕；重复使用须严格清洗干燥新购置器皿经酸洗、中和、冲洗后方可使用吸管、移液枪头须无菌或经灭菌处理试剂核对二查核对组分名称、规格、批号、有效期外观无潮解、结块、变色脱水培养基核对溶解性说明与储存条件仪器校准三查天平定期校准，保证称量精度pH计使用前用标准缓冲液校准灭菌器定期做生物监测与物理参数验证《培养基制备与质控规范》条款解析·20260708/30操作要点·培养基制备称量与溶解的控制要点称量环节01按配方准确量取各组分；微量成分换用更高精度天平02采用增量法减少误差；试剂撒落立即清理并更换溶解环节01先加约总量三分之二溶剂，搅拌至充分溶解，必要时加热助溶02含糖、蛋白质等热敏性物质防止过度加热导致分解变性03全程搅拌并观察溶解状况常见失误加热过久形成焦化颗粒、搅拌不充分导致局部浓度不均后果直接为后续pH调整和灭菌埋下隐患《培养基制备与质控规范》条款解析·20260909/30制备质控要点pH调整须预留灭菌漂移01先测后调完全溶解并冷却至室温后，用校准过的pH计测定，再以盐酸或氢氧化钠溶液逐滴缓慢调整，充分搅拌避免局部过酸过碱。02预留漂移高压灭菌后pH会降低

0.1～0.2，矫正时应比实际需要值高出0.1～0.2。03补水定容调整完毕须补足因溶解、加热与调pH损失的水分至规定总量。04终值复核合格范围为规定pH±0.2；灭菌后须再测一次，确保终值落在区间内。终值pH是制备环节最易被忽视、却直接影响微生物生长的参数。预留漂移·灭菌前后判定0.1～0.2高压灭菌后pH降低幅度矫正时应比实际需要值高出同等幅度±0.2合格范围（规定pH±0.2）灭菌后须再测一次确认终值《培养基制备与质控规范》条款解析·202610/30操作要点·平板制备分装量与热敏添加剂的时机分装量90mm平皿直径18mL~20mL注入量对应琼脂层至少

3mm

厚。厚度不足会失水过快、菌落扩散受影响。防污染避免沾污容器口与外壁分装时避免沾污容器口与外壁，防止操作环节引入偏差。灭菌后倾注平板用三角烧瓶，斜面培养基用试管。热敏添加剂47℃~50℃培养基冷却后加入并充分混匀过高破坏活性，过低难以混匀，直接影响选择性与指示性。判定口径：分装量、琼脂厚度与添加剂加入温度三项硬参数共同锁定平板质量。《培养基制备与质控规范》条款解析·202611/30灭菌参数灭菌参数依成分灵活选择稳定培养基MH琼脂、营养琼脂→常规高压蒸汽灭菌121±1℃/15min常规高压蒸汽灭菌含糖培养基葡萄糖等易碳化成分→降低灭菌温度，防糖类破坏108℃

或

115℃防糖类破坏热敏成分血清、牛乳→避开持续高温间歇灭菌法分段多次灭菌过度与不足皆有风险过度灭菌破坏营养，不足则无法保证无菌——不可只凭经验判断。灭菌后用化学指示胶带验证生物指示剂定期验证，形成参数闭环《培养基制备与质控规范》条款解析·202612/30性能测试方法合格与否，性能说话03性能测试性能测试回答三个核心问题三问定性能逐批验收的三个判断维度目标菌生长能否正常生长非目标菌抑制是否被有效抑制特征反应鉴别、鉴定或计数特征能否正确表现按类型绑定判断不同培养基·不同判定重点非选择性培养基重点看生长能力选择性培养基目标菌生长+非目标菌抑制，两者并重鉴定培养基阳性或阴性反应是否正确逐批质控不是看完外观就放行，而是围绕这三问逐项验证；核验时，每一批测试结果须与对应培养基类型绑定判断，而非用一个普适标准套用所有培养基。《培养基制备与质控规范》条款解析·202614/30条款解析·定量法定量法：生长率PR的计算与判定PR定义PR=待测培养基平板菌落总数平均值参比培养基平板菌落总数平均值判定限值培养基类型PR要求非选择性分离、计数培养基≥0.7选择性分离培养基≥0.5

最低

0.1选择性计数培养基≥0.7选择性培养基还须呈现目标菌典型生长，以附录F对应项目为准，PR不是唯一标准。记录时同时留存待测与参比两平板原始计数，保证可追溯。《培养基制备与质控规范》条款解析·202615/30接种水平·限值清单接种水平限值逐项记住接种量决定测试灵敏度，限值必须逐项记牢。固体培养基目标菌生长率细菌、酵母菌50–250CFU/平板霉菌30–150CFU/平板液体培养基目标菌测试非选择性增菌、选择性增菌、选择性液体计数10–100CFU/管悬浮、运输培养基100–1000CFU/管选择性增菌/选择性液体计数非目标菌每管接种水平1000–5000CFU/管实际接种量须经平板计数核实，不能只凭稀释倍数推定——接种偏差会直接扭曲PR结果。《培养基制备与质控规范》条款解析·202616/30判定方法·半定量法半定量法与生长指数G判定适用对象液体增菌培养基、选择性液体计数培养基，以及固体培养基的非目标菌抑制评价。六区划线法1μL接种环，A区按0.5cm间隔划4条平行线，B区、C区同样处理，D区划1条线，记录总分得生长指数

G。判定目标菌

G大于6

判为可接受；液体培养基记录浊度、产气及再接种计数，结合附录F评价。六区划线·分值示意A/B/C区各4条平行线·D区1条线G>6判为可接受半定量把肉眼判断转化为可记录分值，降低操作员间主观差异。《培养基制备与质控规范》条款解析·202617/30ABCDG质控菌株菌株管理与三级保藏体系两条硬要求·其一传代红线灵敏度检测菌株传代次数不得超过5代须采用适宜保藏技术，保证生物学特性稳定。常用菌株金黄色葡萄球菌ATCC6538大肠埃希菌ATCC8739铜绿假单胞菌ATCC9027枯草芽孢杆菌ATCC6633白色念珠菌ATCC10231黑曲霉ATCC16404三级保藏体系标准菌株冻干保存储备菌株-70℃工作菌株4℃

短期使用菌株状态不清，一切测试结果都失去基准。《培养基制备与质控规范》条款解析·202618/30条款解析·参比培养基参比培养基：尺子必须准基

准

定

位参比培养基是定量测试的基准尺：依据配方特别制备、质量优良，用于评价待测培养基的质控水平。2024版附录E新增三类质控标准SDAMRSTSA三种常用参比培养基纳入质控标准全链条覆盖原理、成分、制法到质量标准CMCCCICC/GDMCC给出

CMCC

可用菌株编号，并提供

CICC、GDMCC

等效菌株供灵活选择机构资质红线：参比培养基须由具备相应检验能力、取得

CNAS

或

CMA

认可并通过

GB4789.28—2024

扩项的检验机构出具检测报告。尺子不准，量出的数据就无从采信《培养基制备与质控规范》条款解析·202619/30菌落形态与无菌性形态是结果，无菌是底线04质控证据菌落形态是质控的直接证据LB平板大肠埃希菌菌落小、表面光滑、湿润半透明金黄色葡萄球菌菌落小、光滑、呈黄色麦康凯琼脂大肠埃希菌呈粉红色菌落粪肠球菌抑制率应大于

90%形态异常往往先于数值暴露问题。典型照片与文字描述应挂于培养室，接种培养后逐一比对。《培养基制备与质控规范》条款解析·202621/30质控判定鉴别培养基与生化反应判定01平板典型反应HE平板肠道菌分离沙门菌黑心菌落志贺菌蓝绿色菌落血琼脂溶血特征观察肺炎链球菌甲型溶血化脓链球菌乙型溶血奇异变形杆菌迁徙生长02三糖铁三管判定菌种斜面高层硫化氢弗劳地枸橼酸杆菌产酸产酸阳性福氏志贺菌产碱产酸—铜绿假单胞菌产碱产碱—三管反应全部符合，质量才算合格。判定原则鉴别培养基依赖生化反应组合；任何单一反应异常，都应整批复查，而非放过单支。《培养基制备与质控规范》条款解析·202622/30条款解析显色培养基与测试片的新趋势显色判定科玛嘉念珠显色培养基上，克柔念珠菌呈粉色模糊菌落。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌应被抑制测试片即用型2024版定义扩展商品化即用型培养基定义扩展至测试片，与GB4789.2-2022协调一致。判定依据测试片常添加显色指示剂，菌落形态颜色与平板不同；实际操作与附录F冲突时，按企业操作说明验收，不照搬平板法形态描述逐条硬套。《培养基制备与质控规范》条款解析·2024版修订要点23/30质控红线无菌性检查的红线指标培养条件与限值倾注后培养基35

℃培养温度72

小时培养时间≤1

CFU/皿菌落数≤0.1

%阳性率抽检比例01少于100个样本：抽检

5%～10%02大量配制：任意选取

10个03无菌分装培养基：全部做无菌试验灵敏度判定01空白对照管：必须无菌生长02加菌管：均生长良好，方判合格特殊处理01含血培养基：35℃

隔夜培养后，再置室温

1天查嗜冷菌02选择性培养基：加

10倍量无菌液体培养基稀释抑制物，利于检出污染菌《培养基制备与质控规范》条款解析·202624/30接收贮存与新版要点质控不止于配制当天05到货验收接收验收先查文件与外观文件核对名称规格批号有效期COA说明书SDS逐项齐全，并记录接收日期与验收人。外观检查包装无破损、漏液、鼓包、受潮粉末无结块变色平板无干裂、积水或污染数量规格与采购订单一致特殊添加剂含抗生素、胆盐、染料、显色底物者，重点核对安全数据与储存条件——失效不显于外观，却直接影响选择性与指示性。不合格不得直接入库《培养基制备与质控规范》条款解析·202626/30贮存管理贮存按说明书也按验证结果贮存条件由说明书、标准要求、实验室验证结果三方共同决定。干粉培养基密闭、避光、干燥保存，防止吸潮结块已开封每次取用后立即拧紧瓶盖成品培养基冷藏

2～8℃

或室温，避免温度剧烈波动含高浓度胆盐的宜存放于

10～15℃开封管理记录首次开封日期，控制开封后使用期容器保持密闭，防止吸湿冰箱定期除霜并监测温度，温度记录是贮存条款落地的最直接证据。《培养基制备与质控规范》