常规病理切片制作质控中国专家共识（2025版）

常规病理切片制作质控中国专家共识（2025版）前言病理学诊断被誉为疾病诊断的“金标准”，而常规病理切片的制作质量则是确保这一金标准准确无误的基石。随着精准医疗时代的到来，对病理诊断的准确性和时效性提出了更高的要求，这不仅依赖于病理医师的精湛诊断水平，更离不开技术员制备的高质量切片。为了进一步规范我国常规病理切片制作流程，提升行业内整体制片水平，减少因制片质量导致的误诊或漏诊，特组织国内相关领域专家，在结合最新临床病理技术进展及既往实践经验的基础上，经过深入研讨与反复论证，共同制定本共识。本共识旨在为各级医疗机构病理科提供可操作性强、科学严谨的技术规范与质量控制标准，推动我国病理技术工作的标准化、规范化和同质化发展。一、适用范围与基本原则本共识适用于各级医疗机构病理科、第三方独立病理诊断中心及从事相关病理技术工作的实验室。常规病理切片制作涵盖从标本固定、取材、脱水、包埋、切片、染色到封片的全过程。质量控制应遵循全员参与、全过程监控、持续改进的原则。实验室应建立完善的室内质量控制（IQC）体系和参加室间质量评价（EQA）活动，确保每一张切片都能满足显微镜下观察及诊断需求。同时，应注重生物安全防护，保障技术人员健康，防止环境污染。二、人员资质与培训要求病理技术人员的专业素质是制片质量的根本保障。从事常规病理切片制作的技术人员必须具备相应的医学背景知识，并经过系统的病理专业技术培训与考核。科室应建立常态化的人员培训机制，内容包括但不限于解剖学、组织学、病理学基础理论，以及各种仪器设备的操作规程、维护保养和故障排除技能。新入职技术人员需在上级技师指导下经过规范化轮转培训，考核合格后方可独立上岗。对于关键岗位，如取材、切片、染色等环节，应定期进行技能考核与比武，以保持并提升技术水平。三、标本接收与前处理质控标本接收是病理流程的起点，严格的信息核对与规范化固定是保证后续制片质量的前提。接收标本时，必须核对申请单与标本标签信息的一致性，包括患者姓名、科室、床号、住院号/ID号、标本部位及数量等。若发现信息不符、标本干涸或容器破损等情况，应及时与临床科室联系并在病历中记录备注。固定是制片过程中最关键的环节之一，固定不及时或不充分将直接导致细胞自溶、结构模糊，严重影响诊断。标本离体后应尽快固定，常规使用10%中性缓冲福尔马林（NBF）作为固定液。固定液的体积应至少为标本体积的5至10倍，大标本应剖开后固定，确保固定液充分渗透组织。固定时间通常视标本大小而定，一般为6至24小时，特殊标本如胃肠镜活检标本固定时间不少于3小时，但也不宜过长，以免因过度固定导致抗原丢失或染色困难。固定温度以室温（18℃-25℃）为宜，严禁在高温环境下固定，以免组织质地变硬、收缩变形。四、组织取材质控要点取材是病理医师与技术员协作的第一步，取材的准确性与规范性直接影响后续脱水效果及切片的完整性。取材应在专用的取材台进行，保持通风良好及照明充足。取材医师应仔细观察大体标本，描述其大小、形状、颜色、质地、病灶范围及与周围组织的关系。选取具有代表性的病变组织及切缘组织，取材块的大小一般控制在1.5cm×1.5cm×0.3cm左右，厚度不宜超过0.4cm，过厚的组织块会导致脱水、透明不完全。对于不同类型的组织，应采用不同的处理策略。例如，脂肪组织、肌肉组织及淋巴结等致密或富含脂质的组织，应适当增加脱水、透明时间；囊壁、皮肤等组织应防止卷曲，可用滤纸包裹或伊红标记切缘。取材过程中，应避免使用暴力挤压组织，以免人为造成细胞形态改变。取材刀片应锋利，每次切取后应清洗刀面，防止不同标本间的交叉污染。取材结束后，必须彻底清洗取材台及工具，防止福尔马林气体挥发及病原微生物扩散。五、组织脱水、透明与浸蜡质控组织处理是使组织支撑物（石蜡）浸入组织内部，置换出组织内水分的过程，其质量直接关系到切片的成败。目前多采用全自动脱水机进行处理，但技术员需根据组织类型、数量及环境温湿度变化，灵活调整处理程序和时间。脱水通常采用梯度酒精（从低浓度到高浓度），低浓度酒精（70%-80%）可保护细胞形态，高浓度酒精（95%-100%）则负责彻底脱水。若脱水不净，后续透明剂将无法进入，导致浸蜡失败；若脱水过度，组织则会过度收缩变脆。透明剂（如二甲苯、环保透明剂）的作用是置换酒精并增加组织的透明度，便于石蜡渗入。透明时间不宜过长，以免组织过硬。浸蜡是处理过程的最后一步，应使用熔点适宜的石蜡（通常为56℃-58℃），浸蜡时间应充分，确保蜡液完全置换出组织中的透明剂。实验室应定期更换试剂，一般情况下，每日工作结束后应检查试剂体积及纯度，脱水试剂（尤其是低浓度酒精和高浓度酒精）应根据标本量定期更换，确保脱水效能。六、组织包埋技术规范包埋是将处理好的组织块包埋在石蜡中形成蜡块的过程，包埋质量直接决定了切片的平整度与完整性。包埋前应彻底熔化石蜡，保持恒温。包埋镊子温度应适宜，既不能过高烫伤组织，也不能过低导致石蜡凝固过快产生气泡。包埋时应特别注意组织的方向与层面。对于管腔结构（如胃肠道、血管、支气管），应垂直包埋以显示管壁全层；对于皮肤组织，应垂直包埋以显示表皮与真皮的关系；对于需要观察肌层神经的组织，应顺肌纤维方向包埋。组织块应放置在包埋盒底部的中央，四周留有适当余蜡，确保切片时能修出完整的组织面。包埋面应平整，多个组织块放入同一蜡块时，应排列整齐且处于同一水平面上，方向一致，避免切片时部分组织切全而部分组织切不到。包埋后，蜡块应迅速冷却，可采用冷台或冰水冷却，但冷却速度不宜过快，以免石蜡产生结晶影响切片。冷却后的蜡块应修整平整，标记清晰，存放在阴凉避光处备用。七、石蜡切片制作核心技术切片是病理技术中最具技术含量的环节之一，高质量的切片应薄厚均匀、完整无皱褶、无刀痕、无裂隙。切片前，必须对切片机进行校准，确保刀架角度、蜡块固定装置稳固。切片刀应锋利，通常采用一次性刀片，每切一个蜡块建议更换一个刀刃部位，防止刀刃钝化导致的切片厚薄不均或组织破碎。切片厚度一般设定为3至5微米，常规诊断以4微米为宜；对于淋巴结、造血系统肿瘤等需要观察细胞细微结构的标本，建议切薄至2-3微米；对于骨组织等硬组织，可适当切厚至5-6微米。切片时，动作应均匀流畅，修片至组织面完全暴露后开始正式切片。切片应连成带状，利用毛笔轻轻辅助展开，放入温水展片仪中。展片水温应比石蜡熔点低5℃-10℃，一般为40℃-45℃左右，时间不宜过长，以免组织细胞膨胀变形。待切片充分展开、皱褶舒展后，用载玻片捞取组织，组织应位于载玻片中央且略偏上1/3处，便于后续染色和封片。捞片后，应标编号码，放入60℃-65℃烤箱中烘烤至少30分钟至1小时，以熔化多余石蜡并使组织紧密吸附于玻片上。对于需长期保存或特殊染色的切片，建议烘烤时间适当延长或过夜。八、常规苏木素-伊红（HE）染色质控HE染色是病理诊断中最常用的染色方法，染色质量直接关系到诊断的准确性。优质的HE染色切片应核浆对比鲜明、着色均匀、色彩红蓝适度、透明亮丽。苏木素染液应对细胞核进行染色，伊红染液应对细胞质、基质等进行染色。染色过程中，必须严格控制各个步骤的时间与试剂的pH值。分化与返蓝是HE染色的关键步骤。苏木素染色后，分化液（如盐酸酒精）的作用是除去细胞质中过染的苏木素，使细胞核着色清晰。分化时间需严格控制，需在显微镜下观察直至背景清晰。返蓝液（如氨水、温水或Scott液）的作用是使细胞核由红色恢复为蓝色。伊红染色时间不宜过长，以防颜色过深掩盖细胞核结构。对于全自动染色机，应每日检查染液量，及时补充或更换，定期清洗染色缸和管路，防止染液沉淀或交叉污染。实验室应建立每日的染色质控监测，通过设置对照切片（如肝、脾组织）来评估染色效果，一旦发现染色异常，应立即查找原因并调整参数。九、封片与归档管理封片是制片流程的最后一步，目的是保护切片并使其长期保存。常用的封片剂有中性树胶和水溶性封片剂，常规多用中性树胶。封片前，切片必须经过充分脱水与透明，彻底去除水分，否则会导致封片剂混浊，影响观察。封片时应避免产生气泡，滴加适量封片剂，轻轻盖上盖玻片，并调整位置使其居中无溢出。封片后的切片应在通风橱内晾干或置于烤箱中低温烘干。切片归档应遵循有序管理原则。建立完善的索引系统，按序号、年份或病种分类存放。蜡块与切片应配套保管，蜡块存档应防潮、防尘、防高温；切片归档应避免重叠挤压，防止破损。随着数字化病理的发展，有条件的实验室应积极进行切片的数字化扫描与存储，建立电子档案，便于远程会诊、教学科研及资料追溯。档案借阅与销毁必须严格遵守科室管理制度，履行相关审批手续，防止资料丢失。十、常见制片缺陷与应对策略在实际工作中，常因各种因素导致制片质量缺陷。技术人员应具备识别缺陷并迅速解决问题的能力。1.切片皱褶与裂隙：多由于蜡块温度过低、石蜡过硬、切片刀有缺口或展片水温不当引起。解决方法包括：将蜡块适当升温或在冷台稍作处理后重切；更换刀刃；调整展片水温。2.细胞核模糊不清：常见于固定不佳、脱水过度或分化过度。需加强固定环节管理，调整脱水时间，严格控制苏木素分化时间，及时更换返蓝液。3.染色过深或过浅：苏木素或伊红浓度过高、染色时间过长可致染色过深；反之则过浅。应根据染液使用频率和期限，定期校准染色时间。4.切片空洞或龟裂：多因脱水不彻底、透明时间不足或浸蜡温度过高。应优化脱水程序，更换失效试剂，控制浸蜡温度。5.切片脱落：玻片不洁、烤片时间不足或组织处理不当导致。应清洗载玻片（必要时使用防脱片），增加烤片时间与温度。十一、质量评价与持续改进建立科学的切片质量评价体系是持续提升制片水平的关键。科室应成立质控小组，定期对常规切片进行随机抽查或全面普查。评分标准可参照以下维度进行量化打分，实行分级管理。下表为常规病理切片质量评价标准参考表：评价项目优秀（95-100分）合格（75-94分）不合格（<75分）完整性组织完整无缺损，无人为裂痕，覆盖全部取材组织。组织基本完整，边缘有少许挤压，但不影响主要病变观察。组织严重破碎、缺失，主要病变缺失，严重影响诊断。厚度与均匀性厚薄均匀（3-5μm），无重叠，无厚薄不均现象。厚度基本均匀，局部稍有厚薄差异，不影响观察。厚薄不均明显，切片过厚导致细胞重叠，或过薄导致结构破碎。皱褶与刀痕完全无皱褶，无刀痕，无划痕。有少许细小皱褶，经显微镜调节能清晰观察；无明显刀痕。皱褶多且密，无法展开；刀痕深，切断细胞结构。核浆染色核染色清晰，呈蓝色或蓝黑色；浆染色呈红色，对比鲜明，色彩透亮。核浆染色对比度尚可，色彩略显陈旧或略有深浅不一，但不影响判读。染色模糊，核浆对比不清，染色过深（黑红）或过浅（灰白），甚至“红蓝逆转”。透明度与封片组织透明干净，封片剂无气泡，无溢出，标签粘贴牢固端正。组织基本透明，封片剂偶见微小气泡，不影响观察，标签基本端正。组织混浊，封片剂气泡多且大，溢出严重污染显微镜，标签错贴或脱落。洁净度背景清洁，无灰尘、异物、染料沉淀、真菌污染。背景较清洁，极少量灰尘或沉淀，不影响主要视野。背景脏乱，大量污染物覆盖病变组织，严重影响阅片。质控小组应每月汇总分析评分数据，查找薄弱环节，针对不合格切片进行原因分析，制定整改措施，并追踪整改效果。对于频发质量问题，应启动专项技术攻关，调整SOP文件，实现质量的闭环管理。十二、仪器设备与试剂耗材管理先进的仪器设备与优质的试剂耗材是高质量制片的重要物质基础。实验室应建立设备档案，包括采购日期、使用说明书、维护保养记录、维修记录及校准证书。关键设备如脱水机、切片机、染色机、冷冻切片机等，必须定期进行维护保养和性能校准。每日开机前应检查设备状态，运行中注意观察有无异常报警，工作结束后需进行清洁复位。试剂耗材的采购应遵循“质量第一”的原则，选择符合国家标准、信誉良好的供应商。关键试剂如福尔马林、酒精、苏木素、伊红等，每批号进货时必须进行验收检测，合格后方可投入使用。试剂的配制应有详细的配方记录，标注配制日期、有效期及配制人。易挥发性、腐蚀性试剂应存放于通风良好的试剂柜中，分类存放，标识清晰。染色液应定期过滤，去除沉淀杂质，以保持染液的清洁度与染色效能。十三、生物安全与环境保护病理科接触的标本多为人体组织，可能含有各种病原微生物，且制片过程中使用大量有毒有害化学试剂，因此生物安全与环境保护工作至关重要。所有技术人员必须严格执行标准预防措施，穿戴个人防护装备（PPE），如手套、口罩、实验服、护目镜等。取材、标本处理应在生物安全柜或通风良好的环境下进行。对于福尔马林、二甲苯等挥发性有毒试剂，应尽量使用环保型替代品，或安装高效通风排气系统及废气处理装置。废弃的组织标本应按照医疗废物分类处理，使用专用黄色垃圾袋盛装，并贴上警示标识，交由有资质的部门进行无害化处理。废弃化学试剂应严格按照国家相关规定收集、储存和处置，严禁直接倒入下水道，防止污染环境。实验室应定期进行环境监测，包括空气质量、噪声水平等，确保工作环境符合国家职业卫生标准。十四、数字化病理与远程质控的新趋势随着人工智能与数字病理技术的飞速发展，2025版的病理质控应顺应数字化趋势。鼓励有条件的实验室引入全切片扫描系统（WSI），将常规染色切片转化为数字图像。数字化切片不仅便于永久存储和远程会诊，更为客观的质控评价提供了新手段。利用计算机图像分析算法，可以自动评估切片的染色强度、均匀度、聚焦清晰度等指标，实现人工质控向智能化质控的延伸。远程质控平台使得上级医院病理中心能够实时指导下级医院的制片工作，通过线上阅片反馈，快速解决基层医