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文档简介
1、实验十蛋白质的化学性质,【实验目的】,1掌握蛋白质的重要化学性质。2了解核蛋白的组成。,【实验操作】,(一)蛋白质的盐析取1.5mL蛋白质溶液,加入等体积饱和硫酸铵溶液(浓度为50%饱和),微微摇动试管,使溶液混合均匀后,静置数分钟,球蛋白即析出呈絮状沉淀(如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵),用滤纸滤取上清液,滤液中再加入固体硫酸铵粉末至不再溶解,析出的即为清蛋白,再加水稀释,观察沉淀是否溶解。,(二)蛋白质的沉淀1用重金属盐沉淀蛋白质取三支试管,各加1mL蛋白质溶液,分别各加3滴6%醋酸铅溶液、3滴2%硫酸铜溶液和3滴1%硝酸银溶液,观察蛋白质沉淀的析出。,2用有机酸沉淀蛋白质取二支试管,各加1
2、mL蛋白质溶液,并加5%醋酸溶液使之呈酸性(该沉淀反应最好在弱酸中进行)。然后分别滴加饱和苦味酸、饱鞣酸溶液,直至沉淀产生为止。用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液进行类似实验(用量同前),观察现象。,(三)蛋白质的颜色反应1黄蛋白反应于试管中,加1mL蛋白质溶液和10滴浓硝酸溶液,直火加热煮沸,观察溶液和沉淀颜色。冷却后,再加入20滴10%氢氯化钠溶液,观察颜色变化。,2与茚三酮的反应在二支试管中,分别加1%赖氨酸溶液和1mL蛋白质溶液,分别加2滴茚三酮溶液,加热至沸,观察有什么现象?,3与硝酸汞试剂作用米伦反应在二支试管中,分别加1mL0.5%苯酚溶液和1mL蛋白质溶液,再各加0.5mL米
3、伦试剂(不可太多),苯酚溶液出现玫瑰红色,而蛋白质溶液加热后出现沉淀,加热凝固的蛋白质呈砖红色,有时溶液也呈红色。,4蛋白质的双缩脲反应(1)双缩脲的生成于干燥试管中,加0.2g0.3g尿素,微火加热,尿素熔化并形成双缩脲,放出的氨可用红色石蕊试纸试验。试管内有白色固体出现后,停止加热。,(2)双缩脲反应上述产物冷却后,加1mL10%氢氧化钠溶液,摇匀,再加2滴2%硫酸酮溶液,混匀,观察有无紫色出现。于试管中,加1mL清蛋白溶液和1mL10%氢氧化铜溶液,再加1滴2滴2%硫酸铜溶液共热,由于蛋白质与硫酸铜生成络合物而呈紫色。取1%赖氨酸溶液作对照,观察颜色变化。,(四)核蛋白组成的鉴定,1核蛋白的水解取20mL酵母核蛋白混悬液于离心管中离心分离,弃去清液,将沉淀转入小烧杯中,加15mL5%硫酸,盖上表面皿在水浴上煮沸约1h(煮沸过程中保持原有体积),水解毕,离心分离,取上层清液作以下检查。,2核糖的鉴定于试管中,加1mL20%间苯二酚盐酸溶液,以小火加热至沸,迅速加入5滴水解液,呈现红色,(如红色不显可再稍加热)。,3磷酸的鉴定取10滴水解液,置于试管中,加5滴7%钼酸铵溶液和2滴浓硝酸溶液,小心于火上加热,即有黄色沉淀生成。,4嘌呤与嘧啶的鉴定取约4mL水解液,置于小烧杯中,加入氨水至微碱性,过滤,在滤液中加1mL5%硝酸银铵溶液,静置片刻,即有絮状的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。
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