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文档简介
1、主题2微生物培养和应用,主题1微生物的实验室培养,1,培养基可以分为什么种类?培养基通常含有什么营养成分,除此之外还满足什么要求?获得纯培养物的关键是什么?消毒,灭菌是什么,常用的方法是什么?牛肉奶油蛋白胨固体培养基制备方法步骤?学习目标,怎么倒盘子?2,微生物群,原生生物:原核生物:真菌:病毒:酵母等例子:水母和单细胞藻类,无细胞结构,细菌,蓝藻,原核细胞,3,4,1,徽章,1。概念:微生物的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _,营养素,生长和繁殖,2 .根据培养基的类型和用途、物理特性,固体培养基:加
2、琼脂;分离、鉴定、计数、液体培养基:无絮凝剂;用于工业生产。半固态培养基:添加少量琼脂;可以用来保存菌株。5、化学成分,根据合成培养基:明确成分;分类感情。天然培养基:成分不明确;用于工业生产。根据目的,确认培养基:将某种试剂或化学药品放在培养基中,以区分不同种类的微生物。根据特定种类微生物或某些理化抗性的特定营养要求选择培养基。用青霉素选择酵母等。6,选择培养基,微生物学中允许某些种类的微生物生长,同时阻止其他种类的微生物生长的培养基。7,根据识别培养基,微生物的代谢特性,在培养基中添加用于确认各种微生物的指示剂或化学药品,仅识别效果,不抑制其他微生物,8,固体培养基,液体培养基,9,培养基
3、中一般包含哪些营养成分,满足哪些要求?10、任何培养基一般都需要水、碳源、氮源、无机盐等营养素,满足:生长因子(维生素、特定氨基酸、嘌呤、嘧啶等)和氧、二氧化碳、渗透压等不能自行合成的化合物等pH、特殊营养素的微生物生长要求,11,I .徽章:微生物生存环境和营养物质,1 .基本成分:碳源,氮源,水,无机盐类,碳源,无机碳源:有机碳源:CO2,CO32-,HCO3-,牛肉奶油,蛋白胨等,自养微生物,13,培养基准备原则,目的明确:营养包容,适当浓度,适当比例,适宜pH:有机碳源,从属营养:微生物种类,根据培养目的选择原料,自养:没有碳源,无菌范围:实验操作空间消毒,工人的手,衣服消毒,实验仪器
4、灭菌,实验过程,酒精灯操作,初顺工作台,15,2,无菌操作技术,1。获得纯培养物的钥匙?防止外来杂细菌入侵,2,无菌技术除了用于防止实验室培养菌被其他外来微生物污染外,还有什么目的?防止微生物对工作人员的感染,16,消毒和灭菌,消毒:用比较轻的物理或化学方法,只杀死体内表面或内部的某些对人体有害的微生物(孢子和孢子除外)。杀菌:使用强烈的物理化学因素杀死物体内的所有微生物,包括孢子和孢子。杀菌及消毒技术是微生物相关工作中最常见、最重要的技术。17,孢子,某些细菌在特定条件下,在细胞内形成称为孢子的椭圆形休眠体。孢子的壁厚,对恶劣环境的抵抗力强。每个细胞只形成一个孢子,因此没有生殖功能。,细菌,
5、原生动物,真菌,植物等产生的生殖细胞。可以直接发展成新的个体。孢子,特殊休眠结构,18,消毒方法:1,沸腾消毒方法336100 沸腾5-6分2,巴氏杀菌方法:70-75 煮30分钟或80 煮15min 3,化学药品消毒氯消毒水源4,紫外线,适用对象:工作空间,液体,手等,19,灭菌方法:1,燃烧灭菌2,干燥热灭菌:160-170 加热1-2h。3,蒸压:100kPa,121 至15-30分钟,20,请判断以下材料或器具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择相应的方法。(1)培养用培养基和培养皿(2)玻璃棒、试管、烧瓶、吸管(3)实验者的手、想法、消毒、灭菌、灭菌、21,练习:分别思考和讨论以下设
6、备使用的消毒和灭菌方法。培养基,培养皿,空气,接种环,双手,牛奶,巴氏消毒,化学消毒,紫外线消毒,高压蒸汽灭菌,燃烧杀菌,干燥热灭菌,22,单或性质:大小、外观、光泽、颜色、透明度等。3 .功能:1 .定义:3,殖民地,菌株的重要标准,固体培养基,大量繁殖,子细胞群,23,4。大肠杆菌的纯化培养,(I)牛肉奶油蛋白胨固体培养基的制备,1 .计算:培养基的量,各成分的用量按公式计算,2。计量:3。溶解:牛肉奶油粘稠,用计量纸测定,牛肉奶油,蛋白胨容易吸收,快,蘸,牛肉奶油,计量纸,加热少量水溶解,拿纸,蛋白胨,NaCl,琼脂,水分固定容量,调整pH,化妆剂,密封:5。灭菌:6。背板:培养基,Pe
7、tri,24,倒冲,约50 ,盘盖的水滴掉落在培养基上,防止污染,烧火灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基,25,1。灭菌培养基后,冷却到50 ,才能倒入板材。你用什么方法估计徽章的温度?问题讨论,a:用手摸,不是刚热的手。2 .为什么要让锥形瓶的瓶盖通过火焰?答:燃烧杀菌,防止瓶口的微生物污染培养基。26,3。平板凝结后,为什么平板颠倒?4 .在倒盘子的过程中,如果不小心在盘子盖和盘子底之间炸了徽章,还可以用这个盘子培养微生物吗?怎么了?答:盘子盖凝结水滴,防止水滴落到徽章上,造成污染。板块反转防止徽章表面的水分挥发。答:空气中的微生物可以在盘子盖上和盘子底部之间的培养基中繁殖。27,2。大肠杆
8、菌的纯化培养:(I) (I)牛肉奶油蛋白胨固体培养基的制备,ii精制大肠杆菌:平板刮法:菌株,3个平板画,1个刮花,1。接种:环,防止刮除培养基,(实验重复),(空白对照组),28,问题2:每个划线前燃烧接种环的目的:问题3:划线结束后燃烧接种环的目的:预防接种环上可能存在的微生物污染培养基,杀死最后划线结束后残留的菌株问题1:第一阶段预防火灾接种的目的:讨论问题,29,2。接种完防火疫苗后,为什么冷却后刮?答:杀死菌株,以免接种环温度太高。3 .进行第二个和下一个线条处理时,为什么总是从上一个线条处理的终点开始进行线条处理?答:先端细菌的数量比先端细菌的数量少,每次从最后一个线条的末端开始,
9、细菌的数量逐渐减少,从而得到由单个细菌繁殖的群体。为什么不能刮胸章?刮的话,可以创造难以达到单个集落分离目的的不均匀的线;第二,留在贝齐的单个细胞不能形成一定的群体,菌落沿着刮伤的地方生长,形成带状的群体。,31,6个试管,每个9毫升无菌水,101,102,103,104,105,106,稀释涂层板法:a .梯度稀释菌液:细菌液,32,稀释涂层板法:培养:接种后将培养基和未接种培养基放入37温度调节器,培养12 24小时后观察和记录,34、微生物培养和观察,35、大肠杆菌是EMB(翡翠)的典型特征,一般琼脂培养基:圆形,边缘干净,表面光滑,半透明典型的大肠杆菌以李红美蓝琼脂平板上:深紫黑色,光滑湿润,有金属光泽的圆形殖民地为特征。36,1。未接种的培养基表面有菌落生长吗?群体长大后会说明什么呢?2 .在大肠杆菌接种培养基上观察独立群吗?大小、形状、颜色相似吗?第五,结果分析和评价,那么,培养培养基的杀菌不彻底,类似菌落,接种符合要求,37,3。培养12h和24h后观察到的实验结果是否相同?如果不同,是否分析差异产生的原因?4 .如果在徽章上观察到各种形式的殖民地,请分析可能的原因。大小可能明显不同
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