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文档简介

1、地图克隆的基本原理和方法，何宗顺，2011年12月7日，地图克隆的基本原理是功能基因在基因组中具有相对稳定的基因座。通过寻找与目标性状密切相关的分子标记，在利用分子标记技术对目标基因进行精细定位的基础上，由于水稻全基因组序列的释放，我们可以得到定位片段的候选基因，并通过分析候选基因来确定目标基因。地图克隆步骤：初级作图，精细作图，候选基因，完成试验，功能分析，初级作图，初级作图方法和作图群体，作图群体，纯合突变体与ZS97杂交，杂交种子的基因分型，寻找杂交种子(即种子可以分离)，种植杂交F1种子可以得到F2群体。r/r，r/r，r/r，F2，r/r，r/r，f1，P1纯合突变体，p2zs97，

2、初级作图法，整体分离分析：群体分离分析的原理是在分离的群体中划分个体(F2，BC1等。)根据研究对象的性状(如抗病性和疾病易感性)分为两组，每组取8-15个样本。在每一组中，每一个单独的DNA以相等的量(相等的浓度和相等的体积)混合，形成两个DNA池(如抗病池和疾病易感性池)。同时，有必要构建双亲的牛血清白蛋白库(ZH11/ZS97)。因为在分组中只选择目标性状，所以理论上两个群体的目标基因片段应该有所不同。ZH11，ZS97，HL15(W)，HL15(M)，HY1(W)，HY1(M)，HY2(W)，HY2(M)，HY3(W)，HY3(M)，HY5(W)，HY5(M)，ZH11，ZS97，HL

3、15(W)，HL15(M)，ZH11，ZS97，HL15(W)，HL15(M)，构建的牛血清白蛋白池经聚合酶链反应扩增，用255个SSR标记进行多态性分析在发现紧密连锁的分子标记后，我们应该进行“阳性”测试：即发现的分子标记是否真的与目标性状连锁。我们从F2代群体中随机选择了大约200个小群体，并用分子标记扩增这些样品，看看表型和基因型是否一致。同时，我们可以利用这个小群体进行初步的基因定位。精细映射，1。表型观察，2。交换植物的筛选，3。开发新的分子标记，R/R，R/R，F2，R/R，R/R，F1，P1纯合突变体，P2Z97，ZH11:“A”ZS97:“B”交换有两种类型的带：H和B，单个植

4、物123 45 67 89 10，M1M2 M3M4 M5，H A B H A A A B，H A B A A A A A A A A A A A A A A A A，A H A A A B H A A A B 开发新标记：新的SSR标记：InDel/Caps标记：在待开发标记的日本阳光片段序列和93-11之间进行扩增，并选择插入或缺失大的位点来设计引物。 标记：可以通过测序找到ZH11/ZS97之间的单碱基差异，或者咨询谢老师。候选基因，可以通过将最终精细定位片段的物理位置输入/cgi-bin/gbrowse/rice/.来显示候选基因。在找到候选基因之后，可以分析候选基因以排除非目标基因，这可以通过

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