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文档简介
1、实验三细菌的单染色和革兰氏染色法、微生物染色的基本原理是通过物理和化学因素的作用来进行的。 细胞和细胞物质对染料的毛细管现象、渗透、吸附作用等物理因素。 化学因素是由细胞物质和染料的性质引起的各种化学反应。 酸性物质容易吸附在碱性染料上,吸附作用牢固,同样,碱性物质容易吸附在酸性染料上。 酸性物质的核对碱性染料具有化学亲和性,容易吸附。 1微生物染色的基本原理,细菌的等电点低,pH约在25之间,因此,在中性、碱性或弱酸性溶液中,菌体蛋白质电离后,带负电荷的碱性染料离子化后,染料离子带正电荷。 因此,带阴电的细菌多与带阳电的碱性染料结合。 因此,细菌学上一般用碱性染料染色。 2染色方法、微生物染
2、色方法一般分为单染色法和双染色法。 前者用染料对微生物进行染色,但不能鉴定微生物。 复染色法采用两种以上的染料,具有鉴别微生物的作用,也称为鉴别染色法。 常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法,还有鉴定细胞各部分结构的特殊染色法(芽胞、鞭毛、核等)。 实验三细菌的革兰氏染色法,一、目的要求学习革兰氏染色法。 了解2克染色法的原理和在细菌分类鉴定中的重要性。 二、基本原理三、器材一菌性大肠菌约24h营养琼脂斜面培养物、黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物。 2溶液和试剂克染色液、草酸铵结晶紫染液、卢戈碘液、西红柿复染液、3仪器或器具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双瓶(内置香沥青和二甲苯)
3、、擦镜纸、无菌生理盐水、载玻片夹子、滤注意事项:载玻片必须干净,不要滴生理盐水,也不要去除太多细菌,涂膜均匀,不要太厚。 干燥:室温自然干燥。 固定:涂装面朝上,通过火焰23次。 热固定温度太高不好,最好不要在玻璃板背面烫伤手。 革兰氏染色电影,2初染滴加结晶紫(最好正好复盖菌膜),染色1-2分钟,水洗。 用3媒染用碘液流入残水,用碘液复盖约1min菌膜,水洗。 4用脱色滤纸吸取玻璃板上的残水,倾斜玻璃板,用吸管流入95%的乙醇进行脱色,立即水洗,直到流出的乙醇没有变成紫色。 脱色时间一般液20-30 S。 脱色不足和过度影响和变化染色的结果。 5用再染用西红柿液再染约2分钟,水洗。 革兰氏染色染色,6镜检查干燥后,用油镜观察。 蓝紫色是g,红色是G-。 7混合涂膜染色将大肠菌和黄色葡萄球菌混合涂膜、染色、镜检进行了比较。 gram staining的程序,Gram positive or Gram negative? 实验报告,1 .图表说明了革兰氏染色后大肠菌和金黄色葡萄球菌的染色结果。 2 .思考问题,思考问题,现在有一株未知杆菌,个体明显比大肠杆菌大,请鉴定该菌株是革兰氏阳
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