《临床生物化学检验》 诊断酶学.ppt

1、a，1，5章诊断酶，卫生部“第12个5年计划教材全国高等医学教材建设研究会规划教材，首都医科大学王佩昌，a，2，教育内容，a，3，1，酶概念和特性，(a)酶的本质和特性2。酶的结构和功能(2)酶的催化作用机制1。酶活性中心是酶分子运行催化功能部位的2。酶反应的诱导适合论(3)酶的命名1。习惯命名法2。系统命名法(4)酶的分类和编号，第1节概述，a，4，(1)酶的组成、结构和功能1。酶的特性和特性；酶的化学特性：大部分酶是蛋白质，部分酶由核酸和酶蛋白组成；酶除了蛋白质的理化特性、一般催化剂的共性外，催化效率、高特异性以及催化作用的可调节性等特性很高。酶催化的反应称为酶反应。酶反应的几个概念：酶活

2、性；气质；气质。产品(product)；活化剂；活化剂。抑制剂(inhibitor)核糖酶(ribozyme):催化的核糖核酸。a，5，2。酶的结构和功能；酶和一般蛋白质一样，具有1，2，3，4级结构。单体(monomeric enzyme)oligomeric enzyme(oligomeric enzyme)多酶(multienzyme)多功能酶或串联酶(tandem enzyme) 结合酶：除蛋白质外，还含有非蛋白质部分(金属离子或小分子有机化合物)，前者称为酶蛋白，后者称为辅助因子。a，6，2)酶的催化作用机制1。酶活性中心是酶分子执行催化功能的部位酶分子中能够与基质进行特定结合，将基

3、质转化为产物的区域称为酶活性中心，酶活性中心是具有特定空间结构的区域，由空间上相互靠近的化学群组成。2.酶反应诱导合的理论(induced fit hypothESis)，当酶和基质结合时，基质首先与酶分子上的活性中心结合，形成酶-基质中间复合物(es)。结构上互相诱导，使活性中心和气质完美结合的过程称为诱导合学。a，7，(3)酶命名1。习惯命名法根据酶催化的基质、反应的性质和酶的起源等命名。这个方法比较简单，但缺乏系统性，容易引起混乱。2.系统命名法国际酶委员会于1961年提出了酶系统命名法(也称为EC命名法)。每种酶都有表示酶气质和反应特性的系统名称，气质名称分为“:”。a，8，4)酶分类

4、和编号1。根据酶，根据催化反应类型，酶可以分为6类。也就是氧化还原酶转移酶水解酶(或水解酶)异构酶(isomerases)合成酶类国际酶委员会用4个数字给每种酶编号。数字前面有EC，数字之间有黑点。第一个数字代表酶的类，第二个代表子类，第三个代表子类，第四个代表酶的编号序数。a，9，a，10，2，isoenzyme的概念和特性，(a) isoenzyme的概念和特性isoenzyme是指催化相同化学反应，但酶蛋白的分子结构、理化性质和免疫学特性不同的酶集。Isoenzyme存在于同一属或同一个人的不同组织或同一细胞的不同子细胞结构中，使不同的组织、器官和不同的子细胞结构具有不同的代谢特性。这为

5、isoenzyme诊断其他机构的疾病提供了理论依据。(b) isoenzyme分类和命名分类可以分为四类：isoenzyme(根据isoenzyme的来源和结构由单个基因决定)、isoenzyme(复杂等位基因isoenzyme)、isoenzyme(由多个基因决定)和isoenzyme(转基因isoenzyme)。目前还没有正确的命名方法，经常以组织名称、亚基的数目、构成或发现地点的名称来命名。a，11，人体中几种重要的同工酶，a，12，3，工具酶，(a)工具酶参与的指示反应，(2)酶循环法，(3)代谢物质浓度的酶测定技术1。终点法(1)直接法(2)酶结合法2。动力学，a，13，a (a)工

6、具酶参与的指示反应通常作为酶分析中的试剂，测定化合物浓度或酶活性浓度的酶称为工具酶。常用的工具酶大部分是氧化还原酶。在临床生化检查中，工具分解酶涉及多项，有两种最常用的分光光度计。一种是利用高特异性氧化酶生成过氧化氢(H2O2)，添加氧化发色剂比色。另一类是利用氧化还原酶反应连接NAD(P)-NAD(P)H的正负反应，然后用分光光度法或其他方法直接测定NAD(P)H的变化量。a，14，2)酶循环酶循环法(enzymatic cycling methods)利用两种工具酶的循环催化反应放大主体，提高检测灵敏度。目前已临床应用于总胆汁酸测定。为了简化分解过程，方便或重复使用酶试剂，通过吸附、嵌入、

7、载体共享结合或酶分子间共享结合等方法固定在支撑物上，保持原活性的研究很多，所制造的酶称为固相酶(或固定酶)(immobilized enzymes)。a，15，(3)代谢物质浓度的酶法测定技术1。终点方法在代谢物质的酶反应中随着时间的推移，试验对象浓度逐渐减少，产物逐渐增加，一段时间后反应达到平衡，测量反应达到平衡，达到测量对象(底物)或产物变化总量的终点法(也称为平衡法)。(1)直接法：如果被试物体和被试物体吸收光谱不同等物理化学性质中可以直接检测到的差异，可以直接测量被试物体或被试物体本身的信号变化，进行定量分析。(2)酶结合法：如果酶反应的基质或产物没有直接可检测的成分，则将反应产物与其他酶反应结合，达到检测目的，就成为酶结合法。代谢产物酶终点法的基本条件如下。测量对象物质浓度S应远远小于其米氏常数Km。此时，反应速度V=VmaxS/Km是初级反应。反应公式中使用的酶量(v)要足够大，Km要小