痰液呼吸道标本细菌学检验.ppt

1、痰液（呼吸道）标本 细菌学检验,概述,痰是气管、支气管和肺泡分泌物的混合物。 健康人痰量很少，当下呼吸道粘膜和肺泡受刺激时痰量会增加。在病理状态下，不仅痰量增多，其性质也会发生变化。,根据需要对患者的痰液进行需氧菌及厌氧菌培养、真菌培养、涂片查结核杆菌等，用于呼吸道感染的病因诊断； 目前痰培养是下呼吸道病原学诊断最常用方法。,痰培养,痰液检查的目的,1.协助诊断某些呼吸系统疾病，如支气管哮喘、支气管扩张等； 2.确诊某些呼吸系统疾病，如肺结核、肺癌、肺吸虫病等； 3.观察疗效和预后判断等。 一般可用于普通细菌、分枝杆菌、真菌和军团菌的涂片或培养检查，经气管穿刺吸引物可用于厌氧菌检测。,采集指征

2、,痰液标本是临床微生物学检验最常见的标本，有下列体征之一时应进行痰培养： 1、咳嗽：咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状； 2、咯血：包括泡沫血痰、痰中带血等； 3、呼吸困难：呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛； 4、发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或CRP明显增高； 5、胸部影像学检查提示有感染可能。,痰标本的采集,使用抗生素之前采集； 专用的痰培养杯，避免正常菌群污染； 严格无菌操作； 以晨痰最好，主要有自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰法、小儿采痰法和气管穿刺法等；,痰标本的采集,对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2-3天。不建议24h内多次采样送检，除非痰液外观性状出现改变； 怀疑分

3、枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检； 采集过程应有医生或护士指导。,常规痰液采集应该以清晨为佳，清晨痰量多，同时含菌量较大； 嘱患者用清水漱口3次，以清除口腔浅表固有的定植菌； 指导患者深咳以采集气管深部的咳痰，而不是唾液及鼻咽部的分泌物； 标本置于专用痰培养杯送检。,指导患者正确咳痰,采集后的痰标本应该在0.5h内送检，一般不超过2小时； 延迟送检的标本应置于4保存，保存标本应该在24小时内送检。,痰标本的送检,如何判断痰标本是否合格？,合格痰标本： 鳞状上皮细胞10个/低倍视野 白细胞25个/低倍视野 原因：白细胞代表感染/炎症的存在； 鳞状上皮细胞分布在上呼吸道。,不合格痰标本,指

4、唾液或唾液严重污染的痰标本，含鳞状上皮细胞多，而白细胞少。 鳞状上皮细胞：白细胞 2.5：1,合格痰标本,下呼吸道咳出的痰，含鳞状上皮细胞少，而白细胞较多。 白细胞：鳞状上皮细胞2.5：1,痰培养结果的解读,痰培养中常常出现口咽部和上呼吸道的定值菌群； 任何阳性痰培养结果，都必须结合具体临床情况进行解读。,合格痰标本培养优势菌中度以上生长，即结果+； 合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等； 3天内多次培养出相同细菌； 如果痰培养阴性，但革兰氏涂片查见典型肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等，同样有意义。,有临床意义的结果,痰培养有上呼吸道正常菌群如草绿色链球菌、表皮葡萄

5、球菌、非致病奈瑟菌等； 痰培养为多种病原菌少量生长（+）；,无临床意义的结果,口腔常见菌群： 白色念球菌、链球菌（甲型或乙型）、肺炎球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟氏球菌、乳酸杆菌、类白喉杆菌等； 鼻咽部常见菌群： 链球菌（甲型或乙型）、绿脓杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、肺炎球菌、流感杆菌等。,上呼吸道正常菌群,下呼吸道则在机体免疫功能的作用下自始至终保持基本无菌状态。 PS：下呼吸道包括气管、支气管及肺泡。,20世纪50年代以肺炎链球菌为主； 80年代后以革兰氏阴性杆菌为主： 如鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌、阴沟肠杆菌等。,痰培养结果,药敏报告为敏感（S）： 表示用常规剂量治疗

6、可获得临床疗效。 药敏报告是中介度（I）： 表示加大剂量或药物浓缩部位可有疗效。 药敏报告耐药（R）： 表示该药无疗效。,药物敏感试验,药敏结果 临床疗效： 敏感有效 耐药无效 敏感无效（假敏感） 耐药有效（假耐药） 临床医师正确评价药敏试验结果的同时，必须参考病人机体状况、临床治疗效果以及药动学、药物毒副作用和药物价格以及本地区本医院等细菌耐药监测数据合理选用药物。,抗生素敏感试验,药敏试验采用全自动微生物分析仪，为MIC法，有固定的药敏组合； 感染对同一种药物的MIC值越小，效果越好； 不同种抗菌素之间的MIC是没有可比性的。,MIC解读,葡萄球菌属的鉴定,葡萄球菌属为革兰氏阳性球菌，由于

7、常堆积、排列成葡萄串状而得名。 它分布广泛，存在于自然界及人的体表及与外界相通的腔道中。大部分是非致病菌。 病原性葡萄球菌常引起皮肤、粘膜及多种组织器官的化脓性炎症，也可引起败血症及脓毒血症，是最常见的化脓性细菌。由于医务人员葡萄球菌带菌率高，因而是医院内交叉感染的重要传染源。,生物学特性,形态染色 菌体呈球形或略呈椭圆形，直径0.5-1.5um，典型的葡萄球菌排列成葡萄串状，无鞭毛，无芽孢，体外培养时一般不形成荚膜。 革兰染色阳性，衰老、死亡或被吞噬后的菌体常转为革兰阴性。,生物学特性,培养特性 营养要求不高，在普通培养基上生长良好；兼性厌氧或需氧，最适生长温度为37。最适PH值为7.4。多

8、数菌株耐盐性强。 在普通琼脂培养基中经37孵育24-48h后，形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落，直径2mm左右。菌落因菌种不同而呈现金黄色、白色或柠檬色，色素为脂溶性，多数致病性菌株的菌落周围有透明溶血环。,生物学特性,生化反应 葡萄球菌的生化活性强，多数菌株能够分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气，致病菌株能分解甘露醇。能分解多种蛋白质和氨基酸，触酶阳性。,生物学特性,抗原构造 1.葡萄球菌A蛋白（SPA） SPA是存在于细胞壁表面的一种蛋白，90%以上的金黄色葡萄球菌菌株有此抗原。SPA可与人和多种哺乳动物的lgG分子的Fc段非特异性结合，而lgG的Fab段仍能与相应

9、抗原发生特异性结合。可用含SPA的葡萄球菌作为载体，结合特异性lgG类抗体，用以检测相应抗原，称为协同凝集试验。该法简便、快速，已广泛用于多种微生物抗原的检测。,生物学特性,2.多糖抗原 具有型特异性，存在于细胞壁。金黄色葡萄球菌所含多糖抗原为核糖醇磷壁酸，检测其对应抗体有助于对金黄色葡萄球菌感染的诊断。表皮葡萄球菌等凝固酶阴性菌的细胞壁多糖抗原为甘油磷壁酸。,生物学特性,分类 根据色素、生化反应等表型的不同，将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3种。3种葡萄球菌的主要性状为：,三种葡萄球菌的主要性状,生物学特性,抵抗力 葡萄球菌是无芽孢的细菌中抵抗力最强的。耐干燥、耐热，

10、耐盐性强，能在10%-15%NaCl的培养基中生长，可用于筛选菌种。 对龙胆紫敏感；对青霉素、红霉素和庆大霉素等抗生素敏感。但是耐药菌株逐年增多，临床上耐青霉素G的金黄色葡萄球菌菌株高达90%以上，特别是耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌，目前已经成为医院内感染最常见的致病菌。,临床意义,一、致病物质 金黄色葡萄球菌可产生多种侵袭性酶和外毒素，故其毒力最强。表皮葡萄球菌毒力较弱，一般不致病，在特殊情况下可成为条件致病菌。 1、侵袭性物质 ：包括多种侵袭性酶和菌体表面物质。,（1）凝固酶：能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔的血浆发生凝固的酶类物质。 凝固酶有两种：一种是分泌到菌体外的，称为游离凝固酶，

11、用试管法检测；另一种结合于菌体表面不释放，称为结合凝固酶，用玻片法检测。凝固酶能使液态的纤维蛋白原变成固态的纤维蛋白，从而使血浆凝固。,（2）其他侵袭性酶类： 耐热核酸酶经10015min或602h不被破坏，有较强的降解DNA和RNA的活性，致病性葡萄球菌能产生该酶。另外，还有纤维蛋白溶酶，透明质酸酶、脂酶等与细菌的扩散和组织损伤有关。,2、毒素 包括多种外毒素 （1）葡萄球菌溶素：致病性葡萄球菌能产生多种溶素，对细胞膜有损伤作用。按抗原性不同可分为、等，对人有致病作用的主要是溶素。 （2）杀白细胞素：仅攻击中性粒细胞和巨噬细胞的细胞膜。 （3）肠毒素：是外毒素，能耐受10030min，并能抵

12、抗胃肠液中蛋白酶的水解作用，引起急性胃肠炎和食物中毒。,（4）表皮剥脱毒素：主要由噬菌体II群金黄色葡萄球菌产生。该毒素能导致真皮与表皮分离，引起烫伤样皮肤综合征，又称剥脱性皮炎。其抗原性强，可制成类毒素。 （5）毒性休克综合征毒素-1：是由噬菌体I群金黄色葡萄球菌产生的一类蛋白质，可引起毒性休克综合征。,二、所致疾病 1、侵袭性疾病 主要引起化脓性炎症，是葡萄球菌引起的最常见感染。 （1）局部感染：如毛囊炎、蜂窝组织炎、伤口化脓等皮肤及软组织感染，多由金黄色葡萄球菌引起。病灶特点是浓汁黄而黏稠，化脓灶多局限，与周围组织界限明显。还可引起气管炎、肺炎、脓胸、中耳炎等内脏器官感染。 （2）全身感染：如败血症、脓毒血症等，多由金葡引起。,2、毒素性疾病 由葡萄球菌产生的有关外毒素引起。 （1）食物中毒：食入含葡萄球菌肠毒素食物后1-6h，病人出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等急性胃肠炎症状。在夏秋季多发，多数病人于1-2d内恢复，预后良好。 （2）烫伤样皮肤综合征：由表皮剥脱毒素引起。开始皮肤有红斑，1-2d表皮起皱继而出现大疱，最后表皮上层脱落。,（3）假膜性肠炎：是一种菌群失调性肠炎。由于抗菌药物的使用不合理致菌群失调，肠道内优势菌被抑制或杀灭，而少数耐药的金黄色葡萄球菌（正常人肠道内有少量寄居）趁机大