实验一还原糖、脂肪蛋白质鉴定

1、,还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定,2020/7/2,2,一、验证鉴定类实验 1实验目的 针对已知的生物学事实进行验证，巩固和加强有关知识内容，培养实验操作能力。,2常用方法和技术 (1)研磨、过滤：如生物组织样液制备。 (2)颜色反应：如生物组织中有机物的鉴定。 (3)纸层析法：如叶绿体中色素的分离。 (4)同位素示踪法：如噬菌体侵染细菌实验。,2020/7/2,3,3特定化学物质的检测方法,2020/7/2,4,二、还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定,基础梳理,1、实验原理 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。 还原糖+斐林试剂 砖红色沉淀,脂肪+,苏丹染液,橘黄色,苏丹染液

2、,红色,蛋白质+双缩脲试剂紫色,沸水浴(50-65.C),2020/7/2,5,2实验流程 (1)还原糖的鉴定,甲液和乙液等量混合均匀后使用,2020/7/2,6,（2）脂肪的鉴定,取材：花生种子浸泡34h，去皮，将子叶削成薄片 制片,（1）取最理想的薄片 （2）在薄片上滴23滴苏丹染色23 min（3）去浮色（体积分数为50%的酒精） （4）制成临时装片,观察：在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒 然后用高倍镜观察，可观察到橘黄色颗粒,结论：花生种子中含有脂肪,2020/7/2,7,（3）蛋白质的鉴定,组织样液中有蛋白质。,先加A液，再加B液。且量不相等,2020/7/2,8,升华提高,一、实

3、验材料的选择,（1）还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含还原糖量较高的生物组织（或器官），而且组织的颜色较浅，易于观察。可选用苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。,不能选用甜菜、甘蔗，因为它们所含的蔗糖是一种非还原糖;马铃薯因含淀粉较多也不能做实验材料；不能选西瓜、血液（含葡萄糖）、含还原糖的绿色叶片等做实验材料,以避免颜色的干扰。,思考：能不能选用甜菜、甘蔗、马铃薯、西瓜、血液、 韭菜？,2020/7/2,9,（2）脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选富含脂肪且体积比较大的种子，才有利于徒手切片，如花生种子。,课堂练习1：（2007年江苏生物，19）若以鸡蛋蛋白液为材料进行蛋白质鉴定实验，发现蛋

4、白液与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管壁上。下列关于这一现象形成原因的描述中，正确的是（ ） A.鸡蛋蛋白液稀释不够，搅拌不匀 B.只添加了双缩脲试剂A，未添加双缩脲试剂B C.鸡蛋蛋白液不是合适的实验材料 D.蛋白液与双缩脲试剂的反应时间不够长,A,（3）蛋白质的鉴定实验中，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋的蛋清（一定要稀释）。,2020/7/2,10,思考：斐林试剂与双缩脲试剂在使用时能相互替代吗？为什么？,2020/7/2,11,二、斐林试剂与双缩脲试剂的比较分析,乙液CuSO4浓度0.05g/mL,B液CuSO4浓度为0.01g/mL,还原糖中的

5、醛基被 Cu（OH）2氧化， Cu（OH）2被还原为Cu2O,具有两个上肽键的化 合物在碱性条件下与 Cu2+反应生成络合物,甲液和乙液混合均匀后方可使用，且现配现用,使用时先加A液摇匀后，再加B液,需加热煮沸,不需加热即可反应,砖红色,紫色,都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用NaOH浓度都是0.1 g/mL,2020/7/2,12,、鉴定蛋白质时，向匀浆中加入2mL双缩脲试剂A时摇匀，再加入34滴双缩脲试剂B摇匀。其中双缩脲试剂B的量不能过量，因为过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，从而掩盖生成的紫色。,2020/7/2,13,课堂练习2：,A,2020/7/2,14,课

6、堂练习3、下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是( ) A.用于鉴定还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定 B.脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的圆形小颗粒 C.用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入到含样品的试管中，且必须现配现用 D.在鉴定脂肪的实验中，苏丹染液染色的时间比苏丹染液染色的时间长,B,2020/7/2,15,课堂练习4.（2009西安模拟）在下列四支试管中分别加入一些物质。甲试管：豆浆；乙试管：氨基酸溶液；丙试管：牛奶和蛋白酶；丁试管：人血液中的红细胞和蒸馏水。上述四支试管中加入双缩脲试剂振荡后，有紫色反应的是( ) A.乙、丙、丁 B

7、.甲、乙、丁 C.甲、乙、丙 D.甲、丙、丁 【解析】。双缩脲试剂能与蛋白质或多肽发生紫色反应，甲试管中有豆浆，丙中有牛奶和蛋白酶，故甲、丙两试管均出现紫色，丁试管中红细胞在蒸馏水中会吸水涨破流出血红蛋白，血红蛋白也是蛋白质，故丁试管也出现紫色，而乙试管中是氨基酸，不发生紫色反应，故能发生紫色反应的试管是甲、丙、丁。,D,2020/7/2,16,课堂练习5：（2008重庆T30）在对大豆萌发种子进行定量测定之前，进行了蛋白质含量变化的预测实验，请填充实验原理；判断实验步骤中划线部分是否正确，并更正错误之处；写出实验结果。 （1）实验原理：蛋白质_，其颜色深浅与蛋白质含量成正比。 （2）实验步骤： 将三份等量大豆种子分别萌发1、5、9天后取出，各加入适量蒸馏水，研碎、提取，定容后离心得到蛋白质制备液； 取3支试管，编号1、2、3，分别加入等量的萌发1、5、9天的蛋白质制备液；,与双缩脲试剂作用产生紫色反应,2020/7/2,17,在上述试管中各加入等量的a.双缩脲试剂A和