生化试剂的基本知识

1、全球信赖的迈瑞 A world together,生化试剂的基本知识,全球信赖的迈瑞 A world together,主要内容介绍,生化试剂的分类 反应速度特性 显色原理 性能评价方法,全球信赖的迈瑞 A world together,生化试剂的分类,按照化学性质分 酶类：包括ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，-HBDH，LDH，CK，CK-MB,-AMY，MSO，ADA，ChE等。 底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，TBA，NH4+，CO2等。 无机离子类：包括Ca，P，Mg，Cl等。 特种

2、蛋白类：包括apoA1，apoB，Lp(a)，C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM等。,全球信赖的迈瑞 A world together,生化试剂的分类,按照临床应用分 无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。 肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil， D-Bil，TBA，TP，Alb等。 肾功能：UA，UREA，Cr等。 心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，-HBDH，AST，MSO。 糖尿病：GLU等。 前列腺疾病：ACP，p-ACP等。 胰腺炎：-AMY。,全球信赖的迈瑞 A world together,生化试剂的分类,按照临床应用分 胰腺炎：-

3、AMY。 血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。 痛风：UA。 有机磷中毒：ChE。 免疫性疾病：C3，C4，PFB(B因子)， IgG，IgA，IgM， Kappa链，Lambda链。,全球信赖的迈瑞 A world together,反应速度特性,按照反应速度，可以将生化试剂分为二大类： 终点法试剂； 动力学法试剂：又可再分为零级动力学法和一 级动力学法,全球信赖的迈瑞 A world together,反应速度特性之终点法,终点法 指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这

4、是最理想的分析类型。整个反应达到平衡，由于正向反应的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。 终点法对反应条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间内反应达到平衡即可，是最理想的反应模型。,全球信赖的迈瑞 A world together,反应速度特性之终点法,属于终点法的试剂主要有： TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，Cr（氧化酶法），NH4+，CO2 ， Ca，P，Mg，Cl ， apoA1，apoB，Lp(a)，C3

5、，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM等。,全球信赖的迈瑞 A world together,反应速度特性之动力学法,零级动力学法 指反应过程中反应速度维持不变，达到最大，与底物浓度无关，因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度(A/min)与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。 实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样从启动反应到达到最大速度需要一定时间。因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。,全球

6、信赖的迈瑞 A world together,反应速度特性之动力学法,属于零级动力学法的试剂主要有： ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，-HBDH，LDH，CK，CK-MB,-AMY，MSO，ADA，ChE ，TBA等,全球信赖的迈瑞 A world together,反应速度特性之动力学法,一级动力学法(固定时间法） 在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一次方成正比,由于底物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加(或降低)速度越来越小，这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，经过一

7、段延迟时间才能进入稳定反应期，必需在特定时间段内进行监测，各试剂商对这段时间有严格规定。 在一固定时间间隔中，底物浓度的变化量正比于底物的初浓度。这是一级反应的通性。该段时间内吸光度的增加(或)降低与被测定物的浓度成正比。,全球信赖的迈瑞 A world together,反应速度特性之动力学法,属于一级动力学法的试剂主要有： Cr（苦味酸法），UREA（紫外监测法）,全球信赖的迈瑞 A world together,显色原理,NAD-NADH和NADP-NADPH系统 p-NP和p-NA系统 H2O2偶联的指示系统 抗原抗体反应指示系统 其它显色反应,全球信赖的迈瑞 A world toge

8、ther,显色原理,NAD-NADH和NADP-NADPH系统 NADH和NADPH在340nm有特征性吸收峰，而NAD和NADP在340nm无特征性吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。 作为该指示系统常用的工具酶有LDH、MDH、GLDH和G6PDH 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、-HBDH 、 Glu、UREA、NH4+ 、CO2等。,全球信赖的迈瑞 A world together,显色原理,p-NP和p-NA指示系统 p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405n

9、m吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有ALP、ACP、r-GT、AMY等。,全球信赖的迈瑞 A world together,显色原理,H2O2偶联的指示系统 H2O2在过氧化物酶的作用下，可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素，导致某一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性 用于此指示系统的单一色素原有TMB、ABTS等；成对色素原有酚和4AA、MBTH和DMA等。 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu、Cr、UA等。,全球信赖的迈瑞 A world together,显色原理,抗原抗体

10、反应指示系统 特异性抗体与抗原(待测物质)在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一定的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比。 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等。,全球信赖的迈瑞 A world together,显色原理,其它显色反应 蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，在一定浓度范围内颜色反应强度与蛋白质的浓度成正比。用于TP的测定。 溴甲酚绿(BCG)在非离子去污剂Brij35的存在下，可与白蛋白形成紧密结合的绿色复合物。用于Alb的测定

11、。 重氮苯磺酸盐与胆红素生成红紫色偶氮胆红素。用于总胆红素和直接胆红素的测定。 甲基麝香草酚兰(MTB)在碱性条件下可与Ca、Mg形成有色络合物。用于Ca、Mg的测定。,全球信赖的迈瑞 A world together,性能评价方法,主要性能指标： 稳定性：指在规定条件下经过一段时间的保存， 仍能达到相应的性能指标，如试剂空白吸光 度、线性范围、灵敏度等。 反应灵敏度：指单位浓度(或活性)的测定物反应所产生的 反应度，反应度越高，灵敏度越大。 精密度：结果间相互符合的一致程度 准确度：与参考测定程序结果的一致性 线性范围：在规定的重复性和线性偏差下，测得的浓度或活性值 与设定的浓度或活性值之间

12、的比例关系的范围。 基质效应： 抗干扰性： 其它：试剂/样本比例、反应时间、价格等。,全球信赖的迈瑞 A world together,性能评价方法,稳定性：连续观测，每日试验；热加速试验。 反应灵敏度：直接计算单位浓度反应物的吸光 度变化或变化率。 精密度：按照NCCLS EP5-A进行。 准确度：按照NCCLS EP9-A2 进行。 线性范围：按照NCCLS EP6-A 进行。 基质效应：通过回收试验确定 抗干扰性：按照NCCLS EP7-A进行。,谢谢大家！,已推出的试剂种类,共35个项目38种试剂（按照化学性质分）： 酶类：包括ALT，AST，ALP，r-GT，-HBDH，LDH，CK，CK-MB,-AMY等。 底物/代谢产物类：包括TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，UREA，Cr，Glu，TP，A