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1、实验6-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测,学前思考：1、蛋白质初步水解，彻底水解，氧化分解的产物分别是什么？,2、淀粉在-淀粉酶催化下初步水解的产物？写出淀粉逐步水解的酶和相关产物。,3、实验室导师让某同学通过淀粉和-淀粉酶溶液，每天制备一些纯净的糊精，会遇到什么问题？,一、基础知识,固定化酶：是将酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。,优点：固定化酶固定在一定的空间范围内，可以重复使用，且能及时与产物分离。,酶固定化的常用方法,吸附法(1)物理吸附法(2)离子交换法,包埋法将酶蛋白包埋在凝胶交联后的“格子”中。,交联法酶蛋白的氨基以戊二醛与载体相连。,共

2、价偶联法酶蛋白的一些基团与载体共价结合。,1.吸附法(1)物理吸附法：将酶蛋白分子吸附在惰性载体上。惰性载体指对蛋白质有高度吸附能力的活性炭、石英砂等。(2)离子交换法：酶蛋白带有电荷的基团与离子交换剂形成离子键。,二、实验内容1、用吸附法将-淀粉酶固定在石英砂上。,三、设备及用品塑料注射器、烧杯、滴管、自行车用气门心和夹子、注射器架、试管或微量离心管等。,四、实验材料1、-淀粉酶，石英砂，2、可溶性淀粉溶液3、5mmol/LKI-I2溶液,五、实验原理,一定浓度的淀粉溶液经过固定酶柱后，可使淀粉水解成糊精。用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色，表明水解产物糊精生成。,淀粉,糊精,麦芽糖,葡萄糖

3、,遇碘显蓝色,遇碘显红色,遇碘不显色,-淀粉酶,-淀粉酶,糖化淀粉酶,六、实验步骤,5mg-淀粉酶+4mL蒸馏水+5g石英砂（搅拌30min）,装入下端接有气门心并用夹子封住的注射器中,10倍体积蒸馏水洗涤注射器以除去未吸附的淀粉酶，流速1mL/min,用滴管滴加淀粉溶液，以0.3mL/min流速过柱,流出5mL溶液后接收0.5mL流出液，加12滴过柱KI-I2溶液，观察颜色,10倍体积蒸馏水洗涤注射器4保存,为什么要控制流速？,1234,1、2mL水+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液+稀释1倍,七、实验结果,2.冰箱保存后的固定化酶柱，重复实验，是否有相同结果？,1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶？,八、问题讨论,将洗涤流出液滴加到一定量的可溶性淀粉溶液中，用手握住试管增加温度，几分钟后滴加碘液，如果仍显蓝色，说明通过洗涤已经除去未吸附

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