癫痫动物模型的制备PPT幻灯片.ppt

1、癫痫动物模型的制备,实验动物学,概述,1.癫痫流行病学介绍,癫痫是一种脑部疾患，特点是存在能产生癫痫发作的脑部持久性改变，并出现相应神经生物学、认知、心理学以及社会学等方面的后果。 中国癫痫患病率约为7，每年新发病40万例，患者总数超过900万，其中超过一半是儿童及青少年。,2.癫痫模型制备原理,利用药物制备癫痫模型，通过破环脑部神经递质释放的平衡，阻断兴奋性氨基酸的循环通路，从而诱发癫痫形成与发作。 利用手术制备癫痫模型，主要用于模拟外伤后癫痫。具体的发病机制尚不十分明确，目前研究显示与各神经元细胞之间的突触连接的改变有关。,3.不同的癫痫模型制备方法,癫痫动物模型,1.药物建模 通过药物注

2、射的方式建立癫痫动物模型。,2.手术建模 利用外科手术的方法建立癫痫动物模型,3.1药物建模的几种方法,3.1.1注射合成红藻氨酸法,红藻氨酸(kainic acid, KA)是红海藻的提取物，可作用于脊椎动物中枢神经系统的谷氨酸受体,可直接兴奋神经元,又可增强钠离子的通透性而使神经细胞去极化,诱发癫痫的发生。 利用KA的人工合成品,即合成红藻氨酸(syn thetical kainic acid, SKA)制作大鼠癫痫模型。,正常Wistar大鼠腹腔注射10mg/kgSKA后约5min,大鼠出现凝视行为(级), 之分别在约23min、97min、129min和140min动物顺序出现-级癫痫

3、发作。3h后症状减轻，7-8小时后停止，14小时基本恢复正常。,制备过程,方法特点,注射合成红藻氨酸诱发大鼠癫痫，SKA 5-12mg/kg 腹腔注射可诱发大鼠癫痫发作, 以10mg/kg剂量为佳。 合成红藻氨酸诱发大鼠癫痫发作的阶段性明显、行为学表现规律、稳定,死亡率低，适宜大规模建立癫痫动物模型 。,3.1.2注射氯化锂-匹罗卡品法,注射氯化锂（Licl）和匹罗卡品(pilocarpine, PI-LO)致癫痫模型在动物行为、脑电图、病理及药理特性上与人类颞叶癫非常类似。 近年来一直被认为是研究颞叶癫痫的理想模型。,制备过程,正常Wistar大鼠经过腹腔注射LiCl 125mg/kg,18

4、-24h后腹腔注射PILO 20 mg/kg达到-级发作则为进入癫持续状态(status epilepticus, SE) ,致成功。 若无发作或发作未达到-级, 则每隔30min腹腔注射PILO 10mg/（kg次) ,最多6次, 其间癫痫发作级的大鼠认为致成功。,方法特点,PILO首次剂量为20mg/kg,以后小剂量给予PILO(10mg/kg), 简单易用，可按个体差异控制PILO的用量，成功率较高。 此方法的致癫痫率和自发发作的出现率基本一致,明显优于传统方法。是研究颞叶癫痫的理想模型。,3.1.3穿刺注射海人酸法,点燃模型(Kindling model)是通过重复给予一个首发阈下电或

5、化学刺激引起部分或全面性癫痫发作的癫痫模型, 具备慢性、自发性和复发性特征。 海人酸(kainic acid ,KA)具有很强的神经毒性作用,海马富含KA受体, KA脑内注射能使动物产生长时间肢体型癫痫发作。,制备过程,Wistar大鼠麻醉后30min用5L微量注射器吸KA1L,颅骨穿刺以右侧杏仁基底核为KA注射部位，速度为1L/min ,留针5min，以确保药物被完全吸收。 实验大鼠在KA杏仁核注射后平均41和61min分别依次出现部分性发作和癫痫性大发作,方法特点,用KA杏仁核微量注射, 为全身给药点燃用量的万分之一, 点燃成功率高达90%。 点燃一旦建立, 动物的这种脑细胞及惊厥行为敏感

6、性可长期维持, 是研究脑细胞兴奋性、可塑性以及学习和记忆、癫痫发病机制、癫痫外科手术预后判断的理想动物模型 。,3.2机械损伤制备大鼠癫痫模型,颅脑外伤是癫痫的常见病因之一。外伤后癫痫(PTE)的发病机制目前尚未阐明。现有研究表面，突触重建在PTE的发病发展过程中起着重要作用。 突触素(synaptophysin.p38)和苔藓纤维(mossy fiber，MF)与突触重建关系密切，是突触功能和突触重建的重要标志之一。,制备过程,正常Wistar大鼠用2戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔麻醉后，矢状位切开头部皮肤，剥离颅骨外膜，左侧顶距矢状缝旁3.5mm，冠状缝后4.0mm处钻一直径3.0mm的

7、骨窗，保持硬脑膜完整。 此时接液压打击装置，压强152-202kPa，时程40-50ms。打击后，缝合头皮，清醒后自由进食、水。,液压打击手术部位图示,方法特点,手术后连续观察实验动物行为三个月，根据不同等级的癫痫发作，可研究外伤后癫痫的发病机制。 液压脑损伤制备的动物模型，较好的模拟了人类PTE的显著特征晚期、慢性、反复、自发性发作。 是研究外伤后癫痫理想的动物模型。,4.讨论与展望,导致癫痫发病的因素非常复杂, 癫痫的发病类型多, 目前还没有一种动物模型能够模拟出所有的癫痫发作类型。 以上介绍的几种癫痫动物模型，都有其独特之处。不同方法制备的癫痫动物模型，将会为癫痫发病机制和治疗的研究做出贡献。,4.讨论与展望,导致癫痫发