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文档简介

1、实时定量PCR技术,目录,实时定量PCR基本原理 实时定量PCR实验材料 实时定量PCR实验方法 实时定量PCR实验结果,实时定量PCR基本原理,实时定量PCR的定义 实时定量PCR标准曲线,定量PCR技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，最终精确的对起始模板的定量分析,实时定量PCR的定义,定量PCR三个基本概念,扩增曲线,指数增长期,平台期,线性增长期,背景期,阈值与C(t)值,阈值：是循环开始315个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，设定在扩增曲线指数增长期 C(t)值：荧光信号（扩增产物）到达阈值时所经过的扩增循环次数,定量PCR的数学原理,理想的

2、PCR反应： Xn=X02n 非理想的PCR反应： Xn=X0(1+Ex)n 方程式两边同时取对数得: log Xn=log (X0 (1+Ex)n) 整理方程式得: log X0= (- log(1+Ex) )n+ log Xn 将C(t)和达到C(t)值时终产物的量Xc(t)带入上式得： log X0= (- log(1+Ex) ) C(t)+ log Xc(t) 初始浓度的对数与循环数呈线性关系,n：扩增反应的循环次数 Xn：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率,初始模板量越多，C(t)值越小 C(t)与初始模板浓度的对数值成线性关系,实时定量PCR标准曲线,定量原理,浓度的对数值与循环数呈线性关系，根据样品扩增达到域值的循环数（Ct值）就可分析样品中起始模板量,定量PCR的实验步骤,标准菌株DNA的提取 QPCR探针和引物的设计 阳性克隆质粒的构

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