荧光偏振分析方法.ppt

1、第6章荧光偏振分析方法，6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，光的偏振，非偏振光示意图，偏振光示意图，自然光振动在各个方向均匀分布，一束光在同一个方向振动，荧光偏振(FP)，偏振激发，佩兰在1926年的研究论文中首次描述了他的观察结果。如果被激发的荧光物质处于静态，该物质仍将保持原始激发光的偏振；如果被激发的荧光物质在运动，该物质发出的偏振光将不同于原始激发光的偏振特性，这被称为荧光去偏振。6.1传统荧光偏振技术及其发展概况，如何测量：偏振值的定义，偏振值一般用毫微微偏表示，对于全偏振发射，P=r=1；对于自然光，P=r=0，6.1概述传统荧光偏振技术及其发展，影响偏振值的参数，它测量荧光分子的

2、迁移率，6.1概述传统荧光偏振技术及其发展，分子的偏振与分子旋转弛豫时间成正比，即分子旋转68.5度所需的时间；分子旋转的弛豫时间与介质粘度、绝对温度、分子体积、分子量和气体常数有关。20世纪50年代，韦伯进一步扩展了荧光偏振理论，首次将荧光偏振应用于生化分析。20世纪80年代，随着荧光探针和荧光偏振分析仪器的商业化，荧光偏振技术在生命科学等各个领域发挥着越来越重要的作用。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，荧光偏振分析的一般步骤，利用荧光偏振原理，通过检测荧光素标记的小分子与其他分子相互作用前后的分子量变化，计算水平和垂直方向的荧光值进行相关分析。如果检测

3、到的分子很大，它在被激发时移动缓慢，并且测量到的荧光偏振光值很高。如果分子很小并且旋转或翻转速度很快，发射的光将相对于激发光平面去偏振，并且测量的偏振光值很低，因此计算样品的偏振值(偏振值单位mP)。通过专门的分析软件，可以对检测结果进行分析和判别。荧光偏振技术比传统的研究蛋白质与核酸结合的方法更具优势(特别是它不会产生有害的放射性废物)，其检测限更低，可达到亚纳米摩尔范围。此外，荧光偏振是真正均匀的，允许实时检测(动态检测)，对浓度变化不敏感，并且是均匀检测的最佳解决方案(中间没有洗涤步骤)。荧光偏振技术的优势：6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，常用检测仪器及附件，国内外研究现状及发展趋势

4、，6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，1。荧光偏振免疫分析(FPIA)是一种定量免疫分析技术。荧光偏振免疫分析原理，6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，1。荧光偏振免疫分析。近年来，FPIA受到生物、化学和医学专家的青睐，其在临床化学、农药残留分析、食品安全和环境监测方面的应用报道逐年增加，成为生化分析和环境监测的有力工具。优点：均相分析不需要分离，快速、灵敏，无放射性污染，重现性高；缺点：FPIA不如酶联免疫吸附试验(ELISA)灵敏，荧光标记物可能与样品中的基质特异性结合，这将增加荧光偏振值并引起一些干扰。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述。蛋白质与核酸的相互作用是许多生命活动的重要组成部

5、分，因此成为分子生物学研究的热点。荧光偏振技术提供了一种无需分离和放射性就能研究蛋白质-核酸相互作用的方法。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，2。蛋白质-核酸相互作用，2。蛋白质-核酸相互作用，适体是一种寡核苷酸序列，可以结合目标，如蛋白质，小分子和金属离子，这是由SELEX技术筛选。适体因其易于合成和修饰、稳定性好、成本低，在分析应用中得到广泛应用。传统的分子量依赖的脂肪酸被用来研究蛋白质-核酸相互作用的原理。生物圈。生物电子。2012，32，148-154。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，3。核酸分析，化学。社区。2011，47，3478-3480。对传统的荧光偏振检测方法进行了改进

6、，通过酶促反应放大检测信号，并将其应用于超灵敏检测特异DNA的检测。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述。核酸分析，核酸决议2003，31:e70。6.1传统荧光偏振技术及其发展概况，4。水解酶催化反应。修订版2010，110，2685-蛋白酶活性的评估有助于理解特定的生化途径和开发治疗药物。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，分析。化学。2009，81，7468-7473。通过非竞争法检测小分子化合物，5。小分子分析，6.1传统荧光偏振技术及其发展概况，空间构象变化，分析。生物的。化学。2011 401 3229。磷酸二酯酶介导的荧光偏振传感平台，5。小分子分析，6.1传统荧光偏振技术及其发展

7、概述，化学。社区。2012，48，1000410006。多重检测方法，5。小分子分析，6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，传统荧光偏振分析技术面临的挑战：荧光偏振的微小变化，MAP探针，6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，分析。化学。1995，67，3945-3951。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，分析。化学。2012，84，5535-5541。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，凝血酶，小分子检测，分析。化学。2012，84，7203-7211。蛋白质增强荧光偏振，6.1传统荧光偏振技术及其发展概述，SSBP(单链结合蛋白质)，离子检测，分析师，2012，137，2770-2773。6

8、.1传统荧光偏振技术及其发展概述，1。调节身体和细胞的渗透压。调节体液的酸碱平衡。参与蛋白质和碳水化合物的代谢。维持正常的神经兴奋性和心肌运动，钾的作用，离子和小分子的检测，化学。社区。2014，50，2049-2051。6.1传统荧光偏振技术及其发展概述与蛋白质和核酸相比，纳米材料具有更好的热稳定性、更大的质量和体积，并且易于合成和表面修饰。因此，用纳米材料增强荧光偏振具有潜在的应用价值。纳米材料，增强6.2 nm荧光偏振的一般策略和应用，纳米粒子显著增加分子相互作用的荧光偏振值的变化，增强6.2 nm荧光偏振的一般策略和应用，Angew。化学。Int。艾德。2008，47，8386-838

9、9。荧光偏振探针用于汞离子检测的检出限达到0.2 ppb，与传统的荧光偏振法相比，提高了三个数量级，检测时间仅为20分钟，具有良好的特异性。MAP探针，增强6.2 nm荧光偏振的一般策略和应用，增强6.2 nm荧光偏振的一般策略和应用，AUNP-DNA系统，DNA-DNA系统，AUNP增强，0.2 ppb，定量分析，分析。生物化学。2010，401，47-52。dnazyme自组装荧光偏振探针，MAP探针，增强6.2 nm荧光偏振的一般策略和应用，化学。社区。2012，48，7480-7482。纳米二氧化硅粒子增强荧光偏振探针，6.2纳米增强荧光偏振的一般策略和应用，化学。社区。2011，47

10、，4763-4765。核酸酶检测和药物筛选，6.2 nm增强荧光偏振的一般策略和应用，生物传感器和生物电子学，2013，41，569-575。金纳米粒子增强的基于链置换反应的荧光偏振探针，6.2 nm增强荧光偏振的一般策略及应用，硕士论文。化学。b，2013，1，2018-2021。T4多核激酶的活性和抑制，6.2 nm增强荧光偏振的一般策略和应用，化学。亚洲杂志2014，9，2755-2760。聚乙烯纳米粒子增强荧光偏振信号的放大分析方法，6.2 nm增强荧光偏振的一般策略和应用，虽然金纳米粒子和硅纳米粒子能有效增强荧光偏振值，但探针和纳米粒子需要复杂的共价连接；开发一种通用、简单的荧光偏振

11、增强器仍然是一项重要的任务。增强6.2 nm荧光偏振的一般策略和应用、纳米材料的生物功能化方法、非共价功能化方法、静电相互作用、堆积、范德华力、碳基纳米材料：石墨烯、碳纳米管、碳纳米粒子等。ssDNA/dsDNA和碳基纳米材料之间的相互作用是非常不同的，有-与DNA的堆积，有-与多肽的静电相互作用等。6.2纳米增强荧光偏振的一般策略和应用。社区。2013，49，1942-1944。氧化石墨烯增强荧光偏振的信号分析方法，6.2 nm增强荧光偏振的一般策略及应用，分析。化学。2013，85，1424-1430。氧化石墨烯增强荧光偏振信号分析方法，6.2 nm增强荧光偏振的一般策略及应用，材料科学与工程C 2014，38，206-211。碳纳米粒子增强荧光偏振信号分析方法，6.2纳米增强荧光偏振通用策略与应用，生物传感器与生物电子学，2014，54，285-291。碳纳米管增强荧光偏振的分析方法，6.2 nm增强荧光偏振的一般策略和应用，化学。亚