第一章-组织学绪论.ppt

1、,组织学与胚胎学,组织学分三大部分： （1）绪论； （2）总论：四大基本组织（上皮组织、结缔组织、肌组织、神经组织）； （3）各论：器官系统（神经系统、眼与耳、循环系统、皮肤、免疫系统、内分泌系统、消化系统、呼吸系统、泌尿系统、男性生殖系统、女性生殖系统）。 学习目的：达到掌握正常人体组织器官微细结构及其相关功能的知识。 胚胎学分二部分： （1）绪论、总论（人胚发生和早期发育）； （2）各论：器官发生（颜面和四肢的发生、消化系统和呼吸系统的发生、泌尿系统和生殖系统的发生、心血管系统的发生、神经系统和眼耳的发生、畸形学概述）。 学习目的：达到掌握个体发生、发育及其发生机理的知识。,第一章 组织学

2、绪论,组织学是一门什么样的科学？ 组织学在医学研究体系中的地位是什么？ 组织学需要掌握的基本内容 研究方法,组织学: 是研究机体微细结构和相关功能的科学。,A. 微细结构: 1. 光学显微镜(Light microscope，LM): 计量单位是微米( m )。 (1 m =0.001 mm) 。 2. 电子显微镜(Electron microscope，EM): 计量单位是纳米(nm )。 (1 nm =0.001 m) 。,光学显微镜基本结构： 1. 照明灯(Lamp) 2. 聚光器(Condenser) 3. 载物台和切片夹(Mechanical stage and specimen r

3、etainer) 4. 推进器(Mechanical stage adjustment knob) 5. 物镜(Objectives) 6. 粗细螺旋(Course and fine focus knob) 7. 目镜(Oculars) 8. 照相机等接口(Connection to camera, etc.),EM技术: 1. EM可分为透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)2类。 2. EM的原理和LM相似，但用电子束代替光线，磁场代替玻璃透镜。分辨率约为0.2 nm。,(1)透射电镜（EM）:观察C内部更细微的结构, 即超微结构。,(2) 扫描电镜 观察组织C的表面立体结构。,B. 相关

4、功能: 微观结构和其功能相适应，反之亦然。 C. 人体结构的4个层次: 1. 细胞(Cell): 人体结构的基本结构和功能单位。 2. 组织(Tissue): 由一群结构和功能相同或相似的细胞(及其细胞间质)构成。人体内有4种基本组织：上皮组织，结缔组织，肌组织和神经组织。 3. 器官(Organ): 由组织有机地结合起来而构成。 4. 系统(System): 由结构相似且功能相关的器官构成。,细胞（cellC）,组织（tissue）,器官（organ）,系统（system）,研究内容:细胞、组织、器官和系统几部分, 又称显微解剖学。,细胞 C膜、C质、C核 是人体结构和功能的最小单位 光学显

5、微镜（light microscopeLM）即可观察到。,细胞膜 细胞核 细胞质,卵细胞,组织: 结构相同或相似的C群及 C外基质构成。 四大基本组织： 上皮组织 结缔组织 肌组织 神经组织,器官: 不同的组织按一定的比例、数量及方式组合成器官。 系统: 若干功能相关的器官构成系统。,细胞 组织 器官 系统,组织学各论,组织学总论,1. 光学显微镜(光镜)的发明 Light microscope （LM) 2. 细胞学说的提出和组织学的建立 十九世纪三大发现 3. 电子显微镜(电镜)的发明和超微 结构的发现Electron microscope（EM） 亚细胞水平：0.2um-0.2nm 4.

6、 当代组织学,二. 组织学的发展简史和当代组织学,问题 解决方法 观察对象太小 放大 显微镜 观察对象无色，无反差 染色（HE染色） 观察对象生化成分不同 细胞化学、免疫组织化学 观察对象是活体 培养,组织胚胎学研究技术,苏木精-伊红染色法 苏木精：碱性染料，使C核内的染色质及C质内的核糖体染成紫蓝色。 伊红：酸性染料，C质和C外基质中的成分染成红色。,最常用的组织切片染色法HE染色,苏木精（Hematoxylin） 伊红（Eosin）染色,碱性染料,酸性染料,将嗜碱性物质（本身酸性）染成蓝色,将嗜酸性物质（本身碱性）染成红色,细胞核中的DNA、RNA 细胞质中的RNA,细胞质、膜性结构（线粒

7、体、溶酶体、滑面内质网）,HE染色,中性: 对于两种染料亲和力都不强的性质, HE染色着色淡。,(一) 光镜技术 1. 石蜡切片术 取材和固定; 脱水和包埋; 切片和染色; 封片。,1. 切片(Section): 将组织切薄使光线可以透过。 a. 固定(Fixation): 为保存新鲜组织的微观结构，尽快将组织浸入到酒精，甲醛，苦味酸，Bouins 液或Zenkers液等固定剂中。,b. 石蜡包埋(Paraffin embedding): * 脱水(Dehydration): 用浓度逐渐升高的酒精 (70100%)将组织中的水完全置换出来。 * 透明(Clearing): 用二甲苯完全置换出酒

8、精。 * 浸蜡(Infiltration): 在6062C时，用液态石蜡完全置换出二甲苯。室温时石蜡凝固成固态，内含待切组织。,切片: 用切片机将组织切成120m厚的蜡片，然后将其放到温水上，待其完全展开后，捞到有粘附剂的载玻片上.,其他切片技术: 火棉胶包埋, 冰冻 切片,涂片,铺片,磨片。 其他染色法: 硝酸银神经细胞(黑)。,镀银染色 示大脑皮质神经细胞,1. 透射电镜 必须制备超薄切片 用戊二醛和锇酸两次固定，脱水、包埋，用超薄切片机切片，再经醋酸铀和柠檬酸铅染色，因为不同细胞成分的密度及吸附重金属铀、铅、锇的程度不同，发生散射，产生电镜照片的黑和灰色,(二)电镜技术,扫描电镜技术 不

9、需要制备切片，组织块用戊二醛和锇酸固定后，脱水、干燥，再于表面喷镀薄层碳与金属膜,巨嗜细胞,细胞分裂,2. 扫描电镜 观察组织C的表面立体结构。,组织化学术: 为应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物学原理和技术, 与组织学技术相结合而产生的技术, 能在组织切片定性、定位、定量地显示某种物质的存在与否以及分布状态。 细胞化学术:前述技术用于游离细胞样品则称为(cytochemistry)。,(三)组织化学术,1. 一般组织化学术 基本原理是在切片上添加某种试剂, 和组织 中待测反应物发生反应, 其终产物或为有色 沉淀, 以用光镜观察, 或为重金属沉淀以用电 镜观察。 (1) 糖类:PAS反

10、应, pariodic acid Schiff reaction (2) 脂类: 油红、尼罗蓝及苏丹类染料 (3) 核酸: 福而根反应DNA; 甲基绿- 派若宁反应DNA绿色,RNA红色。 (4) 酶类: 酶组织化学术。通过显示酶的 催化活性以表示酶的存在。,2. 免疫组织化学术immunohistochemistry:是根据抗原与抗体特异性结合的原理,检 测组织中肽和蛋白质的技术。肽和蛋白质均具有抗原性, 当把人或动物的某种蛋白质作为抗原注入另一种动物, 其体内则会产生针对该抗原的特异性抗体。将抗体从动物血清中提出后, 与标记物相结合, 即成为标记抗体。,用标记抗体与组织切片孵育, 抗体 则

11、与组织中相应抗原特异性结合在 显微镜下通过观察标记物而获知肽 或蛋白质的分布部位。常用的标记 物有荧光素, 辣根过氧化物酶、胶 体金。,3. 原位杂交技术即核酸分子杂交组 织化学术。其原理为用带有标记物的已知碱基序列的核酸探针，与细胞内待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性原位结合，即杂交。然后，通过对标记物的显示和检测而获得待测核酸的有无及相对量。常用的标记物有放射性核素（35S，32P，3H等）和地高辛。,原位杂交术（地高辛标记）,(四) 放射自显影技术 (五) 图象分析术 (六) 细胞培养术和组织 工程,学习组织学应注意的问题: 1. 体内结构为立体的，三维的，而课本、讲义和显微镜下的结构均为平面的，二维的。 2. 学习组织学应注意静态与动态、理论与实践相结合,为什么要学习组织学?地位 1. 组织学又叫微