《高三生物复习资料》实验2-分离以尿素为氮源的微生物

1、实验2 分离以尿素为氮源的微生物,土壤中的某些细菌 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： 黄色 红色,任务1：怎么从土壤中分离出它们呢？,利用以尿素为唯一氮源 的培养基进行筛选。,（1）将土壤中的固氮菌分离出来,（2）将土壤中自养微生物分离出来,举一反三,（3）筛选出抗青霉素的微生物,（4）筛选出耐高浓度食盐的微生物,选择培养基,配制培养基,尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 水 25mL 尿素溶液 10mL,选择培养基,琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物,该培养基如何灭菌？,尿素溶液用G6玻璃漏斗过

2、滤，其他用高压蒸汽灭菌。,2、要验证以尿素为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实具有选择作用，你 该如何设计实验。,思考：,配制培养基,尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml,选择培养基,实验组,3、请你提供一种方法，判断分解 尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。,思考：,方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基 中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若 指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。,二、实验目的:,使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶),通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化

3、学反应),统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量,三、实验步骤 （1）制备细菌悬液 制备成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀释液,1个99ml无菌水 2个4.5ml无菌水,得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液,1g土壤,（2）倒平板,需要倒3个LB平板，9个尿素平板,每个稀释度 3个LB对照平板 3个尿素平板(平行重复组),接种,取0.1ml菌悬液,涂布分离,高浓度低浓度，换枪头,低浓度高浓度，可不用换枪头,涂布分离,37倒置培养,按浓度捆成一摞,恒温37培养,三、实验中涉及到的一些问题：,（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题）,（二）此实验

4、用到的选择培养基必需含有哪些物质？,（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？,（四）统计微生物的数量可用哪些方法？,腐殖质丰富的土壤，或哺乳动物排泄物的地方取样。,水、无机盐、碳源、尿素、酚红、琼脂糖,培养基红色的深浅,涂布分离法，用血细胞计数板在显微镜下计数,利用血细胞计数板的缺点:,不能区分死菌与活菌,不适于对运动的细菌计数,需要相对高的细菌浓度,个体小的细菌在显微镜底下难以观察,三、实验中涉及到的一些问题：,（五）用不同浓度涂布分离法计数时，发现菌落过密，该如何进一步操作？,重复性原则,对照原则,做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度 （以培养皿中20个左右菌

5、落为宜）,（六）实验设计要遵循的原则：,1、土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答：,（1）培养基中加入尿素的目的是筛选 ，这种培养基属于 培养基。 （2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 和 ，实验需要振荡培养，原因是,目的菌,选择,尿素,为目的菌提供氧气,葡萄糖,（3）图中将细菌转到固体培养基上时，常采用 的方法接种，获得单菌落后继续筛选。 （4）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结