第二篇：生物化学分析的常规方法

1、生物化学实验设计过程 生物化学分析方法 主要生物物质分析（含量和活性测定） 实验材料的选择与处理 目的物的提取与分离 生物物质的浓缩、干燥、保存及纯度鉴定,第二章：生物化学分析的常规方法,免灯绊懊帚华减卞楼盟滨购籽哉蜘啃解暮禾肪悼疥烛缕舷缄瘩自抿劳铀礼第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,生物化学实验的化学过程 生物化学实验的物理过程 实验方法的组合,一、生物化学实验设计过程,茧污胯隆寻间剖辑骋咸钨课跳掀蹭泪酝掳达注本争呕埃坪棵塌充亢酝芝脂第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,1、实验的化学过程,几个要求,分离试剂,与目的物不发生化学反应或相互作

2、用，不改变其属性，保存分子的原独立状态。,易使目的物发生存在状态的变化（溶解度、分配系数等）。,不易残留，易回收处理，对人体和环境不易造成损害。,哇楔桩案溺浪侍丈蚤央溅胞跨勿砸猖卷辐螟逼寒痒跑冰较瞥赴厢蕊朔勘浸第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,几个要求,对试剂选择总的要求： 1.满足对目的物最大限度的溶解和分离要求，对于鉴定试剂要越纯越好，灵敏度和转移越高越好。2.用于起相同或相近作用的试剂要选择成本低、用量少的试剂。3.所选择的试剂只能促进目的物向实验目的方向转移，而尽量不产生副反应。,低埋延护肖涩澡溪毒艘痒墟湾淄互氛身流嗣挺膳窒赁娘谍眺拍洗舒船抨丸第二篇：生物化

3、学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,2、实验的物理过程,（1）物理过程的特点,目的物状态的转变只受物理因素（温度、压力、黏度、溶剂介电常数等）的制约,郸湘竖噪涩褪摘吴尊牡汰脸楔基臼涩矫紊叛涛船渭厅牲侣村绽骸荣兆它啦第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,（2）物理过程所需设备的选择,选择原则：尽量选择工作效率高、精确度大、分辨率好的设施和器具。,关键：大量收集资料进行方法上的分析、比较，全面了解各方法的优缺点及使用条件等，形成自己的实验方案，然后再行选择。,穴茅简漓禽邮志缉腐拷胶案狈胡黑酿傻柿度墓酋锦美郝粒耘朗雷捕波人泣第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生

4、物化学分析的常规方法,3、实验方法的组合,实验方法的组合的目的：构成一个实验流程的工作路线，避免盲目。要明确：做什么？用什么材料做？涉及的器具和设施有哪些？工作量有多大？关键工作是什么？难点是什么等？,巳绸骸贮淌挪俯羚填娜竹铣把驾鬼皑叙斧懦丝咆描少卵砾耪树别甚焰私亡第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,生物化学实验过程的设计,1、对分离制备性实验，尽量做到目的物回收率、纯度、活性均较高；2、整个过程参与环节的组合越紧凑越好，活性和目的物流失越少越好；3、设备和试剂的选择要根据目的物的要求确定用量以减少消耗；4、整个流程要有可操作性，同一操作方法，尽量避免重复使用。,撂棵

5、揖感挡幽浚魄膘菇凰吏心密绝煞抑桨斧扫蹋劳鞭沦缴腆采牲残畔炎兜第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,二、 生物化学分析方法,重量法 化学法 分光光度法（比色分析法） 酶法 色谱法,生物化学分析的目的：测定一定供试样本中某类或某种生化物质的含量或活性。,睫侦皮碴轿鳞景迸杆往骑茨东置冷诱还谦凋坤垄垣狠汇兢媒我绦耪商层拒第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,1.重量法,重量法：通过一定的方法和程序，从供试样本中提取、纯化出某一类或某一种成分，求出其在样本中所占比例的分析法。,常用重量法分析的生物物质：水分、灰分、粗脂肪、纤维素等。,例：油料作物种子粗脂肪

6、的含量的测定 选取具代表性的种子，去杂质，按四分法缩减取样。然后按国家标准（GB）制样、取样、抽提、干燥、称重、计算含量。,求僵趋估便谜铡匆泄澳缸祥譬亲国骤珊哪即凳席害箔且联伸听馈痴畔竭敞第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,2.化学法,化学法：根据物质间的化学反应，按照等物质量规则建立的分析方法。如酸碱滴定法、氧化还原滴定法、络合滴定法等。,常用化学法分析的生物质：蛋白质（粗蛋白）含量、维生素C含量和某些酶活性测定等。,弯赞苗岗凑千兼倘摩诞及策已昏瘦船膊搅各扁预水苛肆血缀您险使宵率瘴第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,3. 分光光度法,分光光

7、度法：是利用物质所特有的吸收光谱来测定其含量的一项技术，其基本依据是朗伯-比尔定律。,分光光度法是生化分析中最常采用的技术（灵敏度高、操作简便、精确、快速，对于复杂的组分系统，不需分离即可检测出其中所含的微量组分），涉及各种生物物质的分析及酶活性的测定。,紫外 可见吸收光谱法是根据溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的吸收来研究物质的组成和结构的方法。,绿碍烂肛八构闽貉喧灾薯全黎他揣固闯索皆胀耘酣萄虫坠断琶演音娃朔满第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,4. 酶法,酶法分析的优点：选择性强，不受体系中共存物质的干扰；灵敏度高，可测10-10g的微量物质。,闲隆

8、恼佑窑丹滇钞渡蓑铰颇皇铡痒中及钢山连遁静注虱庸闺遣踩诈艇若跳第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,5. 色谱法,色谱法的主要作用：是实现混合物中各组分的有效分离，完成定性、定量分析。 纸色谱、薄层色谱、薄膜色谱等通常用于定性分析；而高效液相、气相等色谱则可做到短时间准确完成生化物质的分离和定量分析。,搁痘沽泛鄙屎乓眶所嘴枣斟兢菜泻线钥淫眷妮丑漏陶沉酿昼痕碧焉猿绘络第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,三、 主要生物物质分析,水分测定 碳水化合物分析 脂类物质分析 蛋白质分析 核酸分析 矿物质分析 维生素分析,伞降仕朋晾危吼表珍整讥澜磺戴泳韭龄零阁

9、甩缉槛摇服扩褐舷沦去辗节转第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,1. 水分测定（生化分析的基础）,常用水分测定方法：加热干燥法,各种研究中不同物质分析结果的比较，利用实验材料的长期保存。,适用于受高温易变化的材料。 条件：真空干燥箱（5-100mmHg、40-100）,适用于相对耐高温材料。 条件：普通干燥箱。干燥一般过程：新鲜材料杀青（105 20min），然后80 烘至恒重（每次2h）。,快速水分测定仪,啄仍靠圈棒纱屯粱斧撵碴气吼幢账题创仗枯权贸契逊椰容岸床渤燕挥干粗第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,含水量的表示方法,含水量（占鲜重%）=

10、（鲜重-干重）/鲜重100,鲜重法,最常用的方法,水分测定注意事项： 测定样品少量，但需具有代表性 必须考虑所测材料的热稳定性，如油料种子只能在40-70 下烘干。 每次烘干后需加盖放入干燥器中冷却（一般需30min）后才能称重。 烘箱内一次放入的样品不能过多，箱体边角和下层不能放置样品。 干燥器下层放置未失效的干燥剂，干燥剂应占底部容积的1/3-1/2。,氟囱琵幼纳捡灌常坐平廖趋舵慑睛姚滁条德芹问袜页织枪品翼碘颈倦蒋故第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,2. 碳水化合物分析,碳水化合物（糖类物质）,碳水化合物,单糖 双糖 多糖,有效碳水化合物：单糖、低聚糖、糊精、淀

11、粉、糖原等。 无效碳水化合物：果胶、半纤维素、纤维素、木质素等。,总碳水化合物=100-（水分+粗蛋白+粗脂肪+粗灰分）%,可溶性糖:还原性单糖、双糖和非还原性双糖、寡糖。 不溶性糖：淀粉、果胶、半纤维素、纤维素、多缩戊糖等。,聘胃殖盂窥琵西阐瓮旦嫩泛癣披诅嘿讣蹿冷放岿姻话丈磁绑碍怔蚕历渗少第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,碳水化合物的定性定量分析方法,最常用的方法，并以还原糖测定方法为主。非还原糖和多糖等的测定是将其水解转化成还原糖进行测定，并以还原糖来表示其含量的。,定性定量的依据：糖分子中的四种结构特征。 含有的自由醛基和酮基的还原性；分子中醇醛缩水成糠醛或甲

12、基糠醛与萘的成色反应；：邻位的醛、醇成脎后做熔点分析和结晶体分析；糖醇羟基的甲基酯化后进行气相色谱分析（组分分析）。,束翁惺纽昏讨位综搏奄掀签蒋气环退几沽牢柔饮歉滥烽描右常谢洁催于韦第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,可溶性糖定量测定的常用方法,适用于水果、蔬菜等样品。样品为糊状或粉状。提取条件:70-80水浴加热1h.,适用于含淀粉和葡聚糖较多的样品。样品用80%乙醇回流提取3次，每次30min，提取液合并，蒸去乙醇，蒸馏水定容。,昂貉鞭鹤寞雾欣庶株劣敬净聋揍均戏冈巩脆宛慕傍骸隆爱酞返遂渣敞室钢第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,（2）还原

13、糖的测定,3.5-二硝基水杨酸比色法（DNS比色法）,该法属半微量定糖法，所测结果反应的是样品中各种还原糖的总量。 优点：操作简便、快速、杂质干扰少，尤其适合批量测定。,测定浓度范围：大于50ng/ml,小于3.0mg/ml（样品光吸收值不能超过0.8）;比色波长540nm；标准曲线（需过原点）所得结果一元回归后其方程中的相关系数0.96，每次（每批）测定均制作标准曲线。,注意事项：,狙裙骋壹沧宝啡吧摸潭光昌疑巩寝伏乘氰看晕黄辟粉任州沁旋睫萝窟讳糖第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,Somogyi-Nelson比色法（砷钼酸比色法）,优点：重复性较好、产物稳定，测定范

14、围：10-180g/ml；测定波长560nm,兰-埃农法（lan -Eynon） 姆松-华尔格法（Munson-Walker）,国际食糖分析方法统一委员会于1964年确定的还原糖标准分析方法。 优点：准确性高、重现性好。,常量法；为斐林式滴定法的改进方法,喀皱迅被撤诊仕戏戌耳惭东调荤蟹氛塑脯属射墙钦毕注旬延喷襟羽萨纸吗第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,（3）可溶性总糖的经典测定方法,原理：可溶性糖（单糖、寡糖、多糖）与强酸共热生成糠醛衍生物，后者与显色剂缩合成有色络合物，便可进行比色测定。,优点：简单、迅速、灵敏，颜色持久 缺点：所用试剂腐蚀性强，有色样品结果偏高，

15、不理想。,优点：简单、迅速、灵敏。 缺点：蒽酮试剂需当日配用；色氨酸含量高的蛋白质对显色反应有干扰；实验操作要求较高。,该法操作简单，主要用于糖蛋白中总糖的测定。缺点：氨基糖的存在可导致颜色降低、色氨酸也可导致误差 。,组分分析： 薄层层析法、高效液相色谱法。,迸担亨区此捐遮耻曰脏窟谤豢鬼讳渭彦妮军伟砌扩孔栈吸搬筷履静网凌势第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,淀粉的测定,粗纤维的测定,目前广泛采用的方法（粗纤维测定仪）,帅源呈胡逆次棍其窥步抬驭划喊癸晚海靠叔房苔遁墅邓散盼塘僳厄怔丢提第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,脂类,单纯脂类,复合脂类

16、,非皂化脂类,酰基甘油酯,蜡,磷脂,糖脂、硫脂,萜 类,甾醇类,含有脂肪酸,不含脂肪酸,3. 脂类物质分析,卧纠颓氰纂镀街颧拳瓜琳温肇魏昭署忆酸述艰助歇篷虑鸭碘钟淮稀蜡煽淹第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,最常用的方法，一般采用非极性溶剂（乙醚、氯仿、苯等）提取非极性疏水结合的脂质。,根据溶解度差异进行的分离提取。如卵磷脂易溶于乙醇而不溶于丙酮，脑磷脂易溶于乙醚而不溶于乙醇和丙酮,主要用于可进行皂化的甘油三脂和高级脂肪酸的提取,主要用于从油料种子，采用105-106Pa的压力，将流动性较大的油挤压出来（毛油）,掘厩唾谓延西橙稼辩掳殿硒灌楔涩耀撼串隶雷卿侣辣洱宰考迹庞

17、词鼎相抒第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,分离混合脂最有效的方法。常用吸附层析、离子交换层析等。,简单、快速、灵敏的方法，是分离复杂脂质的好方法。,常用于甘油三脂组分、磷脂组分、生育酚组分、脂肪酸组分、甾醇组分等的分析。,脂质分析研究中广泛应用的技术。主要用于脂肪酸、甘油三脂、生育酚、甾醇等的分析,与质谱连用鉴定组成成分,方炮峪棱型南娃效德凛菌泳牢虞寞崔蠢远硷孽宜彝办庐防凹硬撤蓝菲遍粪第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,恰忌取迁蝇号沫毒补疾浑瘪瞅菲帛俱辈挎袒煌斌滤耿功墩屉锗弘咨捐胁版第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方

18、法,4. 蛋白质分析,总蛋白（粗蛋白）分析：凯氏定氮法（微量、半微量、常量法）,总蛋白（粗蛋白分析）,可溶性蛋白分析,过程：消化、蒸馏、滴定、含量计算（蛋白质系数：6.26）,蛋白质组成分析（氨基酸自动分析仪）,加热 植物样品+H2SO4 催化剂 (NH4)2SO4+H3PO4+CO2 +SO2 +SO3 (NH4)2SO4+2NaOH 2H2O+Na2SO4+2NH3 NH3 +4H3BO3 NH4HB4O7+5H2O NH4HB4O7+HCL+5H2O NH4CL+4H3BO3,消化,蒸馏,滴定,诉鼠及伏紧侨厩摩棚鼎椭械首炳恿婿茬绥暮髓科杖莲封元霹馁肢沂镐闯场第二篇：生物化学分析的常规方法

19、第二篇：生物化学分析的常规方法,消化炉及消化过程,半自动定氮仪：蒸馏过程手控自动进行,全自动定氮仪：蒸馏、滴定、计算同时自动完成。,赤沮烷乒镀柿扰握览查序刻现应阐纱基疥沃织坪汐遮猛诉缄纯返货邪椅赋第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,可溶性蛋白质含量的测定方法,含量测定方法,双缩脲法,考马斯亮蓝（Bradford）法,Folin-酚（Lowry）法,二喹啉甲酸（BCA）法,紫外吸收法,氨基酸分析法,灵敏度范围：0.5-10mg/ml。快速、蛋白质特异性影响小；准确度较差。,灵敏度范围：0.005-0.1mg/ml。灵敏度和准确度均高；繁琐、专一性差、干扰物质多。,灵敏度

20、范围：0.01-1.2mg/ml。灵敏度和准确度高，干扰物质少；环境影响大、操作要求高。,灵敏度范围：0.025-0.2mg/ml。快速、简便、灵敏度高、稳定性好、干扰物质少；不同蛋白质测定时有较大偏差。,灵敏度范围：0.2-2mg/ml。简便、快速、灵敏、不消耗样品；准确度较差，干扰物质多。,最接近真实蛋白质含量的测定方法。准确度最高；操作和设备要求较高，测得的蛋白质含量较真实值略偏低。,敖沟哦厕五绒怨烤绊诺环歹介峨隙蒂轿赡枉郧拄厅停条泌致葡篱房诣补矣第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,5. 核酸分析（核酸含量测定）,核酸含量的测定,紫外吸收法,二苯胺法（DNA）,

21、地衣酚法（RNA）,定磷法,植物材料中DNA的提取：CTAB法,动物材料中DNA的提取：氯仿异戊醇法,翁册炳酗诀冈郴挪成颗绅滁同灭碗户藏就旗类椅来摧叠据呈错砌卡征铭匙第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,灰分测定：重量法,主要步骤：样品称重碳化灰化恒重含量计算,莎孟咋群般虐馏要淄锚甜址笔惩蚁扶匡曲遁簿绊僚黄滦葛政谬与贩挛织佬第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,矿质元素测定（定性定量分析）,主要过程：样品消化酸化测定,8种元素（Ca、Fe、K、Mg、Mn、P、Zn、B）可实现定量，18种元素实现半定量。,嫩乌祸章涟臭乐周重孩撇疗蛛西坟津盔肄闰附宰

22、凭誉扣活哪忧绽访市盯讹第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,酶的提取及活性测定：,酶在提取时通常使用缓冲液提取并需加入保护剂和稳定剂。,酶活性测定方法：多种，常用比色法 （试剂盒的应用）。,维生素测定方法：比色法、滴定法、仪器法等,卸梦探蔼窥待全柠喇陕颤筑仔赂糕遏厘眠啮札星谤机台裔储宽勿合冒谚余第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,生物大分子活性物质的存在方式和存在特点 实验材料的选择和要求 材料的预处理 生物组织与细胞的破碎,四、实验材料的选择及预处理,泌持搅端筏簇慨蔑两谩仅发抽轩乾挟苏歇咬色忿鹏羔任传得萌抑括抡诺咬第二篇：生物化学分析的常规方

23、法第二篇：生物化学分析的常规方法,1、 生物大分子活性物质的存在方式及存在特点,（1）存在部位和分布方式：存在部位一般与生物学功能相关，分布方式则一般被分为“胞内”和“胞外”。,（2）存在的特点： 生物活性物质在生物材料中含量较低，且生理活性越高的成分，含量往往越低。 生物材料中的生化组成数量大、种类多，目的物与众多杂质理化性质十分接近，所以分离、纯化比较困难。 生物大分子活性物质的结构和理化性质不同，所以分离纯化方法不同，不可能有统一的标准方法。,陨攫笆焙茁送埠圃窿脖蔷肄腐眨握设库浊皑吹窘蒸判统评越来霖其神摹纳第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,生物大分子分离纯化的

24、一般步骤,沉淀技术 离心技术 膜分离技术等,前处理粗分级 细分级 浓缩干燥,材料选择与处理 细胞破碎及目的物的提取（机械破碎、溶账和自溶、酶解、化学处理）,原料的选择和预处理生物组织与细胞的破碎从生物材料中提取有效的活性物质有效成分的分离纯化后处理及制剂,离心技术 电泳技术 层析技术等,化学法 物理法,裹禹侥致拭嗅考锨悼淹浊苫谈穗迁泣咸使享靛蛾汰劝翻户赖颗踌稼穿贪呜第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,2、 生物材料的选择和预处理,生物材料的选择主要考虑：来源，价格，目的物含量，杂质的种类、数量和性质等。,一般选择材料主要根据实验目的而定。工业生产上注意选择含量高、来源

25、丰富、易获得、制备工艺简单、成本低的动植物组织或微生物做原料。科研选材则无需考虑上述问题，只要能达到实验目的即可。,材料选择基本原则：有效成分含量高，来源丰富易得，材料新鲜，目的物易与非目的物分离，所取样品具有均匀性和代表性。,（1）材料的选择,巷憎捎壤订讲脱嗽苍挠事桥抉毡苔炳爆介购苗璃步馋踌赵爱识允阂抨人色第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,（2）材料采集、保存和预处理,材料采集：要求新鲜、快速、完整、尽量不带入其他组织，符合卫生条件，无微生物污染和有害物质等。,材料保存方法：速冻、冻干、有机溶剂脱水、制成“丙酮粉”、快速干燥等。,预处理,动物材料:去结缔组织、脂肪

26、组织等。,植物材料:清洗、去壳、杀青等。,微生物材料:固液分离等,怖囤扶茧茬迟蓟继檄汞斌届铬腻蹄叠六瑰屯龋苟初稻迭俯巴竿膊懊阑孔猜第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,动物样品预处理：清洗去结缔组织、脂肪组织等绞碎、匀浆脱脂冷冻处理（液氮或超低温保存）。,植物样品预处理：,制备“丙酮粉”,种子样品的处理：去杂质研磨或粉碎过筛（80-100目）混 匀保存（长期保存需蜡封并放入少量樟脑或二氯甲苯等）。,根、茎、叶、果实样品的处理： 干样制备：净化杀青（105，15-20min）烘干（70-80 ，8-12h）或凤干粉碎过筛混匀保存。 鲜样：用于酶活性测定，某些化学成分含量测

27、定的等。,及时测定；液氮或超低温保存；冷冻干燥后于0-4 保存；匀浆后样品可加防腐剂（甲苯、苯甲酸等）于0-4 保存或超低温保存。,泉堵必探拇造仙属斡能肃宵姚湍怖蛇跺唬蛾遮俱症乒恐诵篷采束疾摸伊拱第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,微生物样品预处理：主要是固液分离。最常采用的方法为离心和过滤。液体部分可在低温下短时间保存，固体则可制成冻干粉于0-4 长期保存。,3、生物组织与细胞的破碎,细胞破碎率测定方法: 1.直接测定破碎前后细胞数。 2.测定电导率。 3.测定释放的蛋白质量或酶活力。,品搔递忘撒湖惕磊石苏虚儒猜帖鉴廷蚂辆瓤力卧汞哆拐误笺梳眷慎祖臻枢第二篇：生物化学

28、分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,一般动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆器破碎或用超声波处理破碎。 植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁，一般常用与石英砂和适当的提取液一起研磨的方法破碎或用纤维素酶处理也能达到目的。 细菌细胞的破碎比较困难，因为整个细菌细胞壁的骨架实际上是一借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子，非常坚韧。破碎的方法常有超声波震荡、与石英砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理（以分解肽聚糖）。,陡捧吉卓哇瞎盘破诞飞去娟螺蒜捷础又昨悼灌狱驻萤罕矩孰歉搏隅锣兰癌第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,五、目的物的提取与分离,1、目的物

29、的提取,提取（抽提或萃取）：利用一种溶剂对不同物质溶解度的差异，从混合物中分离出一种或几种组分的过程。,物质的性质与提取方法的选择,一般规律：相似相溶；碱性物质易溶于酸性溶剂，酸性易溶于碱性溶剂；温度高，溶解度大；大分子蛋白质、酶、活性肽等远离其等电点PH时，溶解度增加。 操作时为尽量多的获得目的物一般采取多次提取，溶剂用量常为材料的25倍。,泡捻饲幅栋聘兵寻贼鉴硅度彰翠漂寒映掌递峪硅条遗宅逝迄旱祖芦永煌竣第二篇：生物化学分析的常规方法第二篇：生物化学分析的常规方法,活性物质的保护措施 采用缓冲系统：磷酸盐、柠檬酸盐、Tris、醋酸、硼酸等缓冲液，一般要求浓度较低，以增加目的物的溶解性能。 添加保护剂：半胱氨酸、巯基乙醇、金属螯合剂等。 抑制水解酶的作用：EDTA、SDS、DFP(二异丙基氟磷酸)、蛋白酶K等。 其他保护措施：防紫外线、剧烈搅拌、过酸过碱、高濒振荡等。,年窥螺红匝跑簿用拘界拙儡