其他诊断ppt课件

1、。1，国家医学院校教材-分子诊断学，第17章分子诊断学的其他应用，生物化学和分子生物学系，2012年4月，2，国家医学院校教材-分子诊断学，第1节分子诊断学在移植配型中的应用，第2节分子诊断学在法医学鉴定中的应用，第3节单核苷酸多态性分析。第一节是分子诊断在移植配型中的应用。人类白细胞抗原的分子生物学分类，1。人类白细胞抗原，人类白细胞抗原，国家医学院校教材分子诊断学，4。1.人类白细胞抗原和器官移植。组织相容性的基本概念是器官或组织移植中供体和受体之间相互接受的程度。如果不兼容，就会出现拒绝。诱导排斥的抗原称为组织相容性抗原，也称为移植抗原。主要组织相容性抗原(MHA)、主要组织相容性抗原、

2、次要组织相容性抗原、人类白细胞抗原、HLA样和HLA样抗原主要与移植排斥反应有关。主要组织相容性复合体(MHC)编码MHA(人类HLA)的基因是一组高度多态性的基因，集中在染色体的特定区域，称为主要组织相容性复合体(MHC)，MHC编码的产物称为MHC分子。抗原免疫系统抗原肽MHC/分子复合免疫应答CD4 /CD8 T细胞(细胞免疫、体液免疫)抗原异物排除了T细胞分化和发育所必需的MHC分子。MHC分子对于免疫反应的启动和调节是必需的。8，9，(1)MHC/人类白细胞抗原基因构成人类MHC，也称为人类白细胞抗原基因复合体，位于6号染色体的短臂6p21.3。人类白细胞抗原基因有七种类型：a、b、

3、c、d、DR、DQ和DP。这七种类型的基因座有不同的基因座。根据编码分子的不同功能和分布，整个复合体的基因可分为三类：类、类和类基因。国立医学院校教材-分子诊断学。10、11，12，13，人类白细胞抗原基因分类，分类基因位点人类白细胞抗原-A-B-丙型人类白细胞抗原-戊型-己型-庚型-庚型-甲型-丙型人类白细胞抗原-丙型-DQ型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丙型-丁型-丁型-丁型-丁型-丙型-丙型-丙型-丙型-丁型-丙型-丙型人类白细胞抗原-2抗原主要在活化的抗原提呈细胞表面表达，如M细胞、B细胞和树突状细胞、血管内皮细胞和活

4、化的T细胞。HLA-III主要是一个补充成分，如C2、C4、Bf等。嘿。15，MHC类蛋白质在身体的大多数有核细胞上形成功能性受体。嘿。16，有3个主要的和2个次要的MHC二类蛋白由人类白细胞抗原编码。第二类基因结合形成异二聚体()蛋白受体，通常在抗原呈递细胞表面表达。嘿。17，(2)人类白细胞抗原的遗传特征：1单倍型是由单倍型遗传的，因为染色体上的人类白细胞抗原位点之间的距离很近，同源染色体之间的交换很少发生，所以亲代人类白细胞抗原以单倍型单位将遗传信息传递给后代。、A、B、A、B、G、H、H、大多数个体的HLA基因座是杂合子，但是当父亲和母亲在某一点上有相同的等位基因时，他们后代的这个基因

5、座就变成纯合子。22，HLA基因共显性表达，23，24，3连锁不平衡理论上，单倍型中一个HLA基因座的等位基因和另一个或几个基因座的等位基因的频率应该等于它们各自频率的乘积。然而，事实上，在不同地区或不同人群中，某些基因频繁出现，这被称为连锁不平衡。已经发现，某些疾病的发生与人类白细胞抗原复合物中的某些特定等位基因密切相关。25，2。分子生物学分型方法，1。RFLP和聚合酶链反应-RFLP分型法，对目标基因片段进行聚合酶链反应扩增后，扩增产物被各种限制性内切酶消化，不同的基因序列会产生不同的酶消化产物，导致不同的电泳图谱。它因其简单、灵敏、准确和不需要同位素而成为常用的人类白细胞抗原基因分型技

6、术之一，但它不能区分杂合子，只能区分有限的多态性。分子诊断学，国家医学院校的教科书。等位基因特异性聚合酶链反应(ASPCR)设计了一套等位基因特异性引物(SSP)，通过聚合酶链反应技术获得了人类白细胞抗原特异性扩增产物，可通过电泳直接分析人类白细胞抗原类型，大大简化了实验步骤。它的优点是简单、高分辨率和低成本。缺点是不容易自动化；无法检测到新的等位基因，因此试剂盒需要不断升级。聚合酶链反应-SSCP分型如果两个人类白细胞抗原等位基因有点突变，它们被聚合酶链反应扩增，然后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，由于它们的序列不同，形成不同的空间构象，因此它们可以被区分。作为聚合酶链式反应的补充，聚合酶链式反应-

7、SSCP有助于发现新的人类白细胞抗原等位基因或突变体，并在区分纯合和杂合基因方面有其独特的特点。基于SBT分型SBT分型序列的人类白细胞抗原分型是一种通过对扩增的人类白细胞抗原基因片段进行测序来确定人类白细胞抗原类型的方法。所有上述方法都有一些缺陷。如果它们能一起使用，打字能力会大大提高。基因芯片技术，中国的生物芯片技术取得了重大突破！2005年9月，由王胜奇研究员、军事医学科学院放射与放射医学研究所、深圳市益生堂生物企业有限公司联合研制的HLA-DRB1基因分型芯片试剂盒获得了SFDA颁发的新药证书和生产编号。这是国家自然科学基金重点项目和863计划支持的基因芯片技术应用的又一个里程碑式的成

8、就。嘿。30岁。31、移植配型(也称为HLA配型/组织配型):是指在器官移植中检测供体和受体之间移植抗原(HLA)是否匹配的一系列措施。目前主要检测ABO抗原系统和HLA抗原系统。人类白细胞抗原系统主要匹配人类白细胞抗原-A、人类白细胞抗原-B和人类白细胞抗原-DR。造血干细胞移植只能在两个个体的人类白细胞抗原匹配完全相同的情况下进行，否则会发生移植排斥反应。分子诊断学，国立医学院校教材，3。HLA配型在器官移植中的应用，32。理论上讲，1/4的兄弟姐妹有机会完全匹配HLA匹配；儿童和父母之间只有一半的HLA抗原是相同的，这在医学上被称为半一致性，通常不能相互移植。因此，骨髓移植主要在兄弟姐妹

9、之间进行。常见的人类白细胞抗原分型在300，500人中可以找到，罕见的人类白细胞抗原分型可能是万分之一，罕见的人类白细胞抗原分型应该在数万甚至数十万人中找到。33岁，34、HLA抗原系统可通过血清学方法、细胞学方法和分子生物学方法进行检测。血清分型基于微淋巴细胞毒性试验或补体依赖性细胞毒性试验。在待检测的外周血淋巴细胞中加入已知的HLA抗血清，作用后加入兔补体，充分作用后加入染料，感染细胞即为死亡细胞。根据特异性抗体介导的补体系统溶解靶细胞的原理，待检测淋巴细胞表面具有已知抗血清靶向的抗原。细胞分型技术是指通过纯合分型细胞和预致敏淋巴细胞试验进行的HLA分型。这两种方法的基本原理是在识别出非H

10、LA抗原决定簇后判断淋巴细胞的增殖反应。由于细胞分型来源困难，操作繁琐，细胞学分型技术正逐步被淘汰。流式细胞仪分子生物学分型方法利用聚合酶链反应技术扩增出少量的靶基因，然后进行产物鉴定，具有灵敏度高、适用范围广的特点。第二部分是分子诊断在法医学鉴定中的应用。摘要：1 .聚合酶链反应技术在法医学鉴定中的应用。DNA指纹技术。短串联重复序列基因座分析4。建立DNA数据库和DNA数据交换。性别鉴定和Y基因检测。国家高等医学院校教材-分子诊断学。39.分子生物学的优点：(1)材料范围广，稳定性高；(2)敏感方法；(3)高概率识别，国家医学院校教材-分子诊断学。40岁。第一，聚合酶链反应技术在法医鉴定、

11、亲子鉴定中的应用：当父母与子女之间的生物学关系有疑问时，通过检查遗传关系来确定亲子关系。个人身份：也称为个人身份。虽然他们的评价目标不同，但所用的方法是相同的。国立医学院教科书-分子诊断学。41，图15-1，生物证据分析中的人类白细胞抗原基因分型和鉴定流程图，国立医学院教材-分子诊断学。42，2，DNA指纹技术，一个DNA指纹可以同时检测十多个甚至几十个基因座的变异，这反映了丰富的基因组信息。DNA指纹是由多个高度可变基因座的等位基因形成的。特异性较高，严格遵循孟德尔遗传规律，遗传简单稳定，DNA指纹具有体细胞稳定性。国立医学院校教材-分子诊断学。43，3，STR基因座分析，STRs是群体遗传

12、学和法医学研究的首选遗传标记(CODIS联合DNA索引系统)公布了13个STR基因座：D3S1358，VWA，FGA，D8S1179，D21S11，D18S51，D5S818，D13S317，D7S820，D16S539，THO1，TPOX，CSF1PO AMEL(性别决定基因)，国家医学院校教材-分子诊断。47岁。48岁。49岁。50岁。51，amel(性别决定基因)，釉原蛋白基因可用于通过聚合酶链反应(聚合酶链反应)对来自未知人类来源的样品进行性别决定。使用对基因内含子1特异的引物，可以扩增内含子的基因序列。X染色体基因AMELX产生106 bp的扩增产物(扩增子)，Y染色体基因AMELY

13、产生112 bp的扩增子。因此，amelx在内含子1中含有一个6 BP的缺失。嘿。52，53，优点，CODIS已广泛用于法医DNA分析。STR等位基因可以通过商业试剂盒快速检测，其数字信息适合建立计算机数据库。全球实验室可以促进不同人群STR等位基因频率的分析。短串联重复序列分析可以用非常少量的脱氧核糖核酸进行。54、str基因座分析检测方法，直接荧光标记后，进行毛细管电泳-RFLP聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)探针杂交等多种方法。55，4。国家医学院校教材分子诊断学中DNA数据库和DNA数据交换的建立。56，5。性别鉴定和Y基因检测，Y基因检测试剂盒可同时检测7个多态性位点：DYS390、DYS389、DYS385、DYS19、DYS389、DYS391和DYS392。它简单、方便、科学地鉴定种族和系谱，有助于鉴定亲缘关系，包括远亲可以在混合样本中快速鉴定男性基