鸡场抗体水平检测与解读

1、鸡场抗体检测与解读,抗体检测周报,血凝（HA）和血凝(HI)抑制试验-以新城疫为例,血凝试验（HA），目的：滴定病毒的血凝效价；原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。,4,血凝效价测定步骤,1.在血凝板上第一排的112孔内各加入50ul生理盐水 2. 在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。 3.每孔加入1鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37中静置30分钟 5.结果判定,结果判定标准： 1、：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100凝集； 2、：红细胞均匀铺于

2、孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75凝集； 3、 ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50凝集； 4、 ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25凝集； 5、 ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝集单位。上表看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:32，则l:32为1个血凝单位，1:16、l:8分别为2、4个血凝单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。 根据判定结果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血凝单位的标准抗原，以备凝血抑制试验使用。,血凝试验（HA）结果判定,

3、血凝抑制试验（HI），目的，确定抗体水平；原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。,7,1、在血凝板上112孔内各加入50ul生理盐水； 2、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul； 3、第112孔内加入4个单位血凝抗原50ul（第12孔为病毒对照）； 4、每孔加入1鸡红细胞悬液50ul； 5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37中静置30分钟 6、结果判定,血凝抑制试验步骤,血凝抑制试验（HI）

4、结果判定,结果判定标准同血凝试验（HA）。 将反应板倾斜成45度角，沉于管底的细细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(10g2)表示。如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：4或HI效价为2(10g2)。,(1)一般认为鸡的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸡)，随地区不同而稍有差异。 (2)鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫

5、免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下，须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。 (3)鸡群的HI抗体水平（血凝抑制滴度）是以抽检样品的HI抗体效价(log2)的几何平均值表示的。如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价(log2)为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平均值为：（ 837562）/（352）7.1;平均水平在4(10g2)以上，说明该鸡群为免疫鸡群。若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太大时，则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百分比决定免疫与否。 (4)大型养鸡场，每次进行抽测时

6、，抽样率一般不低于0.1一0.5，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2.0。 (5)鸡群接种新城疫疫苗后，经23周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。 （6）若有10%以上的鸡群出现11 (log2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染。若监测鸡群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(log2)的鸡群保护率为50%左右；在4(log2)以上保护率达90-100%；在4(log2)以下的非免疫鸡群保护率约9%，免疫过的鸡群为43%。,如上表所示：MAX为多个样品中的HI抗体滴度最大值；MI

7、X为HI抗体滴度最小值；GMT为多个样品的HI几何平均滴度；CV%为变异系数或离散度。,酶联免疫吸附试验（ELISA）,酶联免疫吸附试验（ELISA）,其基本过程是将抗原或抗体吸附于同相载体，在载体上进行免疫酶反应，底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果。整个反应都必须在抗原结合抗体的最适条件下进行。每次试验时都需设阳性和阴性对照。 ELISA的核心是利用抗原抗体的特异性吸附，在固相载体上一层层的叠加，可是是两层、三层甚至多层，犹如搭积木一样。,双抗体夹心法,ELISA结果表示,1、用阳性“+”与阴性“-”表示 若样本的OD值超过规定吸收值判为阳性，否则为阴性。（规定吸收值=一组阴性样本的吸收值之均值+2倍或3倍SD,SD为标准差）。 2、以P/N比值表示 样本的OD值与一组阴性样本OD值均值之比即为P/N比值，若样本的P/N值1.5、2或3倍，即判为阳性。 3、以终点滴度（即ELISA效价，简称ET）表示 将样本倍比稀释，测定各稀释度的OD值，高于规定吸收值（或P/N1.5、2或3倍）的最大稀释度即仍