关于细胞培养中的污染

1、细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、 细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、 霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用

2、硫酸铜溶液擦拭co2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。co2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗清水擦洗75%酒精擦洗紫外灯照。预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素d或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素d或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有

3、细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、 支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。sigma公司的使用时用50ug/ml tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。4、 黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑

4、色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。5、 真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发

5、现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。6、 原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。7、 污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗（硫

6、酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水2、超净台取材器材培养液培养瓶操作等因素3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。污染是细胞培养第一大害！不过好像一般普通培养真菌污染的概率比较大些，因为培养基中常会加入细菌抗生素。关于“黑胶虫”或“黑蛟虫”或“黑焦虫”的性质或本质，有谁能提供点资料么？比如生物学分类，生活习性，结构形

7、态，高倍镜或电镜图片。另外，有英文相关文献么？至少名字有英文的么？有人研究这种“虫子”或“微生物”或“纳米级细菌”么？ 我们实验室这段时间经常污染。在低倍镜下观察，是很多黑色的小点，在 高倍镜下，发现黑色小点在原地轻微的颤动，这是黑胶虫吗 我的细胞也怀疑是黑胶虫污染,但是否经空气传播?因为同一培养箱中有的细胞中,高倍镜下可见小黑点游动,有的就没有,且黑点会长成黑虫 关于黑胶虫：根据平时的操作，我觉得“黑胶虫”有没有可能是以下操作细节方面的问题导致的呢？1、有时候血清瓶或者培养瓶上用标记笔写的字没有擦掉就直接泡酸，字迹溶解后沉积在酸缸中浸泡的瓶子里冲洗不净。2、过火的时候不小心碰到酒精灯的灯芯，

8、粉尘飞进培养液内。3、有的同学习惯将移液管塞棉花的一端在酒精灯上焚烧一下，灰烬飞进培养液内。请教！ 我们实验室就曾经利用制霉菌素制服过真菌污染，拯救了细胞，回想起来真是惊心动魄啊！ 看贴后,我怀疑我的杂交瘤被霉菌污染了.24孔板中央老是有絮状物,细胞没死,但生长不佳.将絮状物吸出后,第二天又有.并且将细胞裹在里面生长.请问这样的瘤细胞能不能上腹水. 我培养基里都加了双抗，刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好，但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着，瓶底还是有贴壁的细胞，细胞培养基混浊，开始以为是细胞长得太多，导致接触抑制死亡，但是倒掉培养基，用pbs洗干净，把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后，第二

9、天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少，每天给他换液，到了第三天左右，细胞数目不多，但也出现了上述的情况（很多碎片和团状物飘着），不知大家有没有遇到这种情况，帮忙分析分析。谢谢！（我养的都是肿瘤细胞）培养液味道变臭了应该是厌养菌污染. 我培养基里都加了双抗，刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好，但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着，瓶底还是有贴壁的细胞，细胞培养基混浊，开始以为是细胞长得太多，导致接触抑制死亡，但是倒掉培养基，用pbs洗干净，把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后，第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少，每天给他换液，到了第三天左右，细胞数目不多，但也出现了上述的情况

10、（很多碎片和团状物飘着），不知大家有没有遇到这种情况，帮忙分析分析。我也有同样问题，我现在也出现了类似的情况有可能是支原体污染 曾经做单抗铺巨噬细胞，铺好发现细胞全是会动的，跑的还挺快！仔细一看，全是滴虫。感情这只老鼠感染了滴虫！我那个郁闷阿！ 我的细胞污染探索某天打开孵箱，看到我的l1210的培养瓶培养液又是黄黄的，觉得很不错，今天又可以传代了，可是在镜下一看，细胞虽然明显增加了，但并没有象以前那样长满，而且更让我心惊的是怎么出现了许多黑色的小点，杆状，而且好像在动来动去，翻转，旋转，在细胞很多的地方小点就少，而在细胞较少的地方小点就多，细胞的活力也没有以前好了，第一反应细菌污染，请实验室老

11、师过来看，说不是细菌污染，这个点要比细菌的小黑点大的多，也好象不是霉菌，没有菌丝，没有常见的团壮的生长，肯定不对劲，但到底是什么，说不上来。最后，决定换液、洗涤、离心，换瓶，操作结束后镜下看黑点几乎看不到了，有点放下心来。隔天后去看，培养液还和上面的一样，但镜下，那种东西又出来了，在细胞少的地方，几乎呈现出粗砂粒样，我欲哭无泪，知道可能不行了，郁闷的换液后，回家上网搜，一个名词跳了出来：黑胶虫。黑色、杆状、运动、细胞不会很快死亡，这些描述简直惊人的一致，我确定了，我受到了黑胶虫的袭击。但黑胶虫是什么，由于网上说法不一，我决定探究一下。 这是我的探究过程：首先，培养液略黄，稍有浑浊，镜下观察，细

12、胞还没有死，但是已经不长了，那种东西已经是铺天盖地了，满眼望去，尽是粗砂粒样，细胞好像成了一个个汪洋中的小岛。细胞涂片，送到化验室，革兰氏染色，不久电话回报怀疑真菌。第一反应不可能，亲自去了化验室，看到了片上一个个瓜子样的小点，染色呈黑色。看我还有些怀疑，化验室的同事又作了滴片，镜下暗视野40倍可见一个个亮白色芝麻样的东西在游来游去，再次涂片染色仍和以前一样，并且可以见到芽孢样的形状，他们确定无疑是真菌，但不是常见的念珠军、霉菌，具体是什么，也说不上来。由于已经盖棺定论，计划的he染色、支原体没有进行。已经将污染的细胞扔掉了。休整几天。细胞污染之后的拯救！ 对于贴壁生长的细胞，相对来说比较简单

13、但很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。 在讨论之前，大家首先要有一个概念，即洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。 所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。 所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！1）.将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlpbs，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。 2）.继续加入10mlpbs，

14、同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。 3）.继续加入5mlpbs，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。 4）.重复步骤3再洗。 5）.重复步骤3再洗。 6）.加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。 7）.加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。 8）.再加入5mlpbs洗瓶，然后吸出。 9）.加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入pbs洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。 10）.24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗. 11).2