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文档简介

1、分析1141-第5组,TLC 分离定性,实验目的,1、了解薄层色谱法分离有机物的方法。 2、掌握薄层色谱法的实验操作技术。,基本操作过程,1、根据被分离物质的性质选择吸附剂 和胶黏剂； 2、薄层板的制备； 3、薄层板的活化； 4、点样； 5、展开； 6、显色，Rf值计算。,吸附剂和胶黏剂的选择,吸附剂：硅胶 胶黏剂：羧甲基纤维素钠 吸附剂：胶黏剂=1:3,薄层色谱的制备,薄层板的好坏将决定分离的效果。薄层板应该尽量均匀且厚薄一致。 倾注法：将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去糊状物中的气泡。,薄层板的活化,

2、涂好的薄层板要进行活化。活化的目的使其失去部分或全部水分，具有一定的活度。 活化好的薄层板放在盛有无水氯化钙或变色硅胶的干燥器中保存，一周内使用，超过一周应再次活化。,点样,将待测样品溶在极性尽可能低的溶剂中配成0.5%1%的试液。用一支平口的细毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上，点样基线距底边1-2cm，样点直径在1-1.5mm之间,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，距边缘在5mm（以免边缘效应影响分离）。点样时必须注意勿损伤薄层表面。正常斑点应是圆形或椭圆形色斑。,展开,展开和纸层析想似，薄层层析在密闭的层析缸中，用上行法、下行法或近水平法展开。对于软板采用近水平方向展开，薄层与水平

3、方向夹角约为1020 ，倾斜角过大，薄层易脱落，过小，影响分离。对于硬板，多采用近垂直方向展开。如下图：,近水平方向展开,近垂直方向展开,展开时先将展开剂放入层析缸内，使液层厚度为57mm。然后将以点好式样的薄层板放入缸内，使薄层浸入展开剂中约为5mm。宝板上的原点不得浸入展开剂中。待展开剂前缘达一定距离，或色斑以明显分离时（一般为1015cm），层析可以终止。取出后，在前缘作出标记，待展开剂挥发后，进行定性检出。,显色,展开后的薄板晾干溶剂后可采取若干方法对板上的组分进行定位。 1、光学检测：对于无色样品，可采用带荧光剂的吸附剂做薄板，展开后在紫外光（254nm或365nm）下显暗色斑点。优点是方便、不破坏被检测物质。 2、碘蒸气法：对于在光学条件下不显色的物质，可将薄板置于含有少量碘晶体的密闭容器中。许多物质能与,碘可逆的作用呈棕色斑点。 3、试剂显色：必须根据被分析化合物的性质来选择某一显色剂，以喷雾方式直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑点。某些显色剂喷了以后还要在80-100度加热几分钟才能显色，如茚三酮与氨基酸的显色

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