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文档简介
1、HIV检查和临床意义,1, 发现艾滋病毒(las ) 1983.science 22033868-871 Gallo (htlv ) 1983.science 22033865-8.6定级别(ARV ) 1984.science225:840-8421986国际细小病毒分类委员会: HIV HIV-2 1986西非,2,中国每年新发现的HIV/AIDS病例数(19852002 ),3, HIV感染可以用两种方法检测细小病毒或其组成部分直接检测人体的HIV免疫应答HIV特异抗体从感染到血清抗体阳转有一定的窗口期,平均13个月,部分艾滋病病毒感染者出现延迟反应,4,HIV感染后抗原和抗体的变化与疾
2、病的关系, HIV感染后出现短暂性细小病毒血症,68周后出现血清抗体阳转,细小病毒滴度降低,随后的58年无症状带毒期间一直存在HIV抗体,但细小病毒难以发现。 进入AIDS期后,血浆中细小病毒再次出现。 因此,诊断HIV感染的大部分时间用抗体检查诊断,极初期(窗边期)用抗原检查诊断。 5、HIV抗体诊断,目前临床实际应用的是测定专一性HIV抗体,包括初筛和确认实验。6、一、检验试剂、筛选试剂应为HIV-1/2混合型、国家药品监督管理局注册批准、批检合格、临床评价质量优良、有效期内的试剂。 目前常用的筛选试剂有酶催化剂免疫、颗粒凝集等快速诊断试剂。 采用供血机制进行血液筛选,必须采用酶催化剂免疫
3、试剂。 自行供血的公司必须进行HIV抗体检查,未设立艾滋病筛选实验室的远程培训技术人员可以在规定场所迅速用试剂进行血液筛选。 7、2、确认试剂须经国家药品监督管理局注册批准。 确认试剂包括免疫印迹试验、带下免疫试验和免疫荧光试验。 目前免疫印迹剂最为常用。ELISA法:目前最常用的初筛实验,自1985年首次检测出HIV-1抗体的试剂盒上市以来,已从第一代全细小病毒抗原间接法发展为第四代重组多肽抗原和抗P24抗体包衣的穿山鼠开关法,缩短了窗口期23周4代艾滋病酶催化剂免疫试剂比较、第4代、细小病毒分解液重组抗原合成多肽HIV-1/-2/-O anti-p24 Ab、IgM/IgG抗体HIV-1/
4、-2/-O p24抗原、细小病毒分解液重组抗原合成多肽HIV-1/-2/-O anti-p24抗体、1.0、Closing the window,第一代试剂可检测IgG抗体,第三代试剂可检测IgG、IgM抗体,第四代试剂可通过在云同步检测IgG、IgM抗体和P24抗原,从而缩短窗口期。1.1、检验结果报告和处理阴性反应发布HIV抗体阴性报告,最近有高风险行为,如性乱、注射毒品等,或有急性流感样症状时,为排除“窗户期”的可能性,可进行HIV-1 P24抗原和HIV核检,或2.3个月后进行抗体检验筛选实验显示阳性反应,可报告“等待HIV抗体检测”,不能报告阳性。1.2、HIV抗体初筛检测程序流程图
5、、1.3、快速诊断试剂:采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析法三项原理,无特殊仪器灵敏度,特异度低于ELISA且价格昂贵,血站盖不住的边界地辖区/城市大医院急诊手术前快速诊断阳性结果需要用ELISA方法验证,用1.4、HIV抗体验证,常用的验证实验方法是免疫印迹法(WB )。 免疫印迹试剂有HIV-1/2混合型和单一型。 一般用HIV-1/2混合型试剂测定,1.5 )、蛋白印迹实验(WB )中广泛使用的确认实验,都是用聚丙烯酰胺凝胶阳离子电泳分离纯化的HIV蛋白抗原并转移到硝酸纤维膜中。 检体中存在的HIV抗体与罢工说唱乐上的抗原结合,加入酶催化剂结合的抗人IgG抗体和基质后,在抗原抗体结合的部位
6、出现有色的罢工说唱乐,由于可以检测对检体中的HIV的不同抗原的抗体,所以作为确认试剂使用。不同的研究机构有不同的判定标准,1.6,WB结果判定标准,出现了“不确定”():HIV-1特异条纹,但是携带型不一盏茶确认阳性,每3个月跟踪一次,共计2次,仍被判定为可疑阴性,、 免疫印迹法(HIV1/2混合型)、HIV-1呈阳性、出现可疑反应、HIV-2指纹录音带、HIV-1阳性报告、可疑反应、呈阳性、阴性反应、需要HIV-2血清学呈阳性报告时进行核酸测定、阴性报告、 免疫印迹法(HIV-2 ),每三个月随访一次,共两次,可疑阴性报告为在随访期间出现呈阳性的阳性,阴性反应,阴性报告为,1.9,P24抗原
7、测定(1)的适用范围,HIV-1抗体不确定或窗边期辅助诊断。 HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。 第四代HIV 1抗原/抗体ELISA试剂检出呈阳性,HIV 1抗体证实为阴性者。 监测病程进展和抗细小病毒疗效。 2.0,(3)结果报告和说明,1,HIV-1 P24抗原的阳性结果必须通过中和试验确认。 2、HIV-1 P24抗原阳性只是作为HIV感染的辅助诊断依据,不能据此进行化学基确诊。 3、HIV-1 P24抗原阴性的结果显示,本试验没有反应,不能排除HIV感染。2.1、HIV核检、2.2、1帮助诊断某些不典型的抗体反应,特别是在反应不确定的情况下,RNA的测定可提供非常有用的证据。 仅
8、通过RNA测定不能完全确定感染的有无,但在RNA测定中出现高拷贝数的阳性结果的情况下(1000 ),暗示感染发生的可能性非常高。 应用该指标综合分析和判断其他检验数据和样品的背景情况。2.3、2、窗前辅助诊断,窗前抗原峰出现前后通常出现细小病毒载货量峰,通常该峰高于发病时的血浆细小病毒水平,早期细小病毒RNA测定具有特殊意义。 目前,国际上使用该检测尝试在供血样本中混合多个样本进行RNA检测,以降低窗口传播的剩馀寿命危险。2.4、3、病程监测、HIV感染发生后细小病毒的载货量变化有一定的规律,并且这一变化与病情的发展密切相关。 通常,感染后无症状期间内发生的临床症状,很难与AIDS发病时的症状
9、区分开来,细小病毒载货量的测定,有助于医生判断刚发生的症状和HIV感染的关系。2.5、4、指导治疗方案和疗效的测定,在任何情况下感染者不应该进行抗细小病毒治疗。 这不仅是经济原因,也是抗病毒药物的副作用和疗效。 通常,只有在细小病毒的载货量达到一定水平后(例如35000-50000复印/ml ),才具有良好的效果。 治疗后的细小病毒水平测定只能确定治疗是否有效,通常认为治疗后细小病毒水平降低50%在临床上是有效的。 监测细小病毒滴度反映疗效,预测2.6、5、疾病进展,HIV疾病进展与细小病毒载货量关系非常密切,可通过观察感染者细小病毒RNA水平大致预测发病的可能性。 如右图所示,细小病毒载货量
10、和6年发病率的关系在30000时为80%。2.7、定性检查、HIV核检有定性和定量两种,定性检查用于HIV感染的辅助诊断。 通常使用PCR和RT-PCR技术,在分子生物学实验室中使用共同的放大试剂,引物可以从文献或自各儿设计,也可以尽量复盖全部或常见的毒株,使用复合引物。 2.8、计量检验、计量检验常用于监测艾滋病病毒感染者病程进展和抗细小病毒疗效。 目前常用的HIV RNA定量测定方法有逆转录PCR实验(RT-PCR )、核酸序列扩增实验(NASBA )、分支DNA杂交实验(bDNA )等,这些个进口试剂盒的最低检测限制是20-50拷贝/ml,按量测仪器读数报告结果使用的试验测量结果小于最低
11、检测限时,请注明最低检测限等级。 注意低于最低检出限度的结果不能排除HIV感染。 必须附上机器打印出来的数据。关于2.9、和各种HIV计量检验方法的比较、3.0、和选择不同的HIV计量检验方法,目前,用于统一不同定量方法的检验值的标准品在未得出不同定量方法的结果时,不能直接比较同一患者的治疗前后,建议用同一方法进行HIV计量检验,3.1、 随着艾滋病免疫指标检测、3.2、政府加快国产抗艾滋病药物上市,对我国HIV患者的治疗出现了希望。 各种免疫指标(CD4、CD8 T细胞球等)在艾滋病临床治疗确定感染状态、预测发病、做评估药物疗效和新药研发方面起着重要的作用。3.3、CD4 T淋巴细胞:(流式
12、细胞术) CD4 T细胞球是HIV的主要靶细胞,随着感染后病程的发展,CD4 T细胞球在500/mm3的具有临床诊断意义的200/mm3AIDS CDC病程发展,有AIDS诊断和疗效观察指标,3.4,HIV感染数周内流感随之而来的免疫应答可以抑制急性症状,恢复CD4细胞球的数量,但不能清除细小病毒。 随着CD4细胞球的降低,降低到500/ul左右,开始出现机会性感染和其他疾病,进入症状期。 当CD4低于200/ul时,进入艾滋病周期。 3.5、CD4 T淋巴细胞小于350/ul,有效、HIV感染、3.6、病毒变异和药物耐受力的测定随着HAART治疗的广泛开展,正在出现病毒变异和药物耐受力株,另
13、外一种药物的药物耐受力引起许多药物的交叉药物耐受力。 因此,近年来,各国相继建立了包括基因型HIV耐受力测试和表型HIV耐受力测试在内的细小病毒变异和耐受力测试方法。 3.7、表型HIV药剂耐受力试验方法可以直接测定HIV-1对药物的敏感性,明确事先存在或交叉的药剂耐受力情况,有助于指导HIV-1感染者的有效给药。 目前市面上销售的试剂盒有爱情动作片(vicroantivirographic )和PS(Virologic PhenoSense )两种,两种方法均可从生长于运载体的HIV-1获得的重组细小病毒及患者标本应用蛋白酶和反转录酶序列该方法的最大优点是可以得到各种药物耐受力计量资料,但缺乏的是试验慢、昂贵、技术要求高。3.8、基因型HIV药剂耐受力试验方法,有细小病毒的
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