课题3　分解纤维素的微生物的分离.ppt

1、1、纤维素是地球上最丰富的多糖，植物每年生产70亿吨以上的纤维素。2，作物秸秆：秸秆、秸秆、稻草、草、锯末等大量纤维素丰富，使用的机会很少，效率低下；食草动物等消化道内也有分解纤维素的微生物共生，其原理是制造纤维素酶分解纤维素，但人类没有分解纤维素的能力。土壤中的一些微生物可以分解纤维素并利用。教育目标，1，了解纤维素酶的种类和作用，2，初步掌握从土壤中分离分解纤维素的微生物的实验方法，1。什么是纤维素？生物圈的分布？什么是纤维素酶？包括哪些组件和角色？纤维素分解菌的筛选方法和原理？一、基本知识、一。纤维素，纤维素是从葡萄糖末端连接到末端的高分子化合物，是最丰富的多糖。植物的根、茎、叶和其他器

2、官包括很多纤维素。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。土壤中的某些微生物可以生产，分解纤维素后再利用。纤维素酶，葡萄糖，2 .纤维素酶纤维素酶是一种，一般前两种酶将纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。包含复合酶、至少三个成分、C1酶、葡萄糖苷酶、CX酶的复合酶在一个试管中添加纤维素酶，其他试管中不添加纤维素酶。实验体验纤维素酶的作用，分析实验如何形成对比？滤纸衰变法，3，纤维素分解菌的筛选，(1)纤维素分解菌的筛选方法_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。此方法可以通过_ _ _ _ _ _ _ _反应直接审查。刚果红染色法、颜色、(2)原则：刚果红是可

3、以形成纤维素和红色复合物的染料，但与纤维二糖或葡萄糖没有这种反应。在含有纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红和纤维素形成红色复合物。纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合不能形成，以纤维素酶分解细菌为中心的透明圆圈出现在培养基上。所以我们可以通过是否产生透明的环来筛选纤维素细菌。根据是否产生纤维素酶降解菌筛选，2，实验设计，1。实验原理纤维素酶一般分为CX酶、C1酶、葡萄糖苷酶、前两种酶将纤维素分解为纤维素二糖，第三种酶分解为纤维素二糖。刚果红染色法：该方法可以通过颜色反应直接筛选微生命。刚果红是可以与纤维素形成红色复合物的染料，但与纤维二糖或葡萄糖没有这种反应。纤维素被纤维素酶分解后，刚果

4、红纤维素的复合不能形成，以纤维素分解为中心的透明环出现在培养基上。这样我们就可以通过是否生成透明源，进行纤维素细菌的筛选，土壤取样，培养，梯度稀释，在识别纤维素细菌的培养基上进行样品涂层，选择生成透明源的菌落，2。实验过程，3 .实验阶段聚合，(1)土壤取样，(2)选择培养，选择培养液的准备工作，(3)渐变稀释，准备细菌悬浮，准备识别纤维素细菌的培养基，(4)在培养基上涂样品，平板涂层平板，刚果红染色法识别纤维素细菌(为什么在富含纤维素的环境下找到纤维素分解菌呢？)，选择森林中多年落叶形成的腐殖土，积累多年的枯枝败叶等纤维素丰富的环境。生物与环境的相互依存性在纤维素丰富的环境中纤维素细菌的含量

5、比较高，在这种土壤中获得目的微生物的概率比一般环境高。(1)土壤取样，纤维素细菌相对凝集的适当环境手动设置。把滤纸埋在土壤里有什么效果？把纸埋在约10厘米深的腐殖土土壤里。你认为滤纸应该埋在土壤里多深？怎么了？根据叶子的腐烂程度，一般认为埋在10cm左右，使纤维素分解菌的相对凝聚成为可能。第二，纤维素酶降解细菌有些是有氧的，有些对氧气不好，所以其深度不太深或太浅。选择培养目的：提高纤维素酶浓度，准备选择培养基，以便从样品中分离出所需的微生物，参考课本第29页旁边栏中的比例构成，回答问题，a，旁边栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？怎么了？b，这个培养基对微生物有选择作用吗？如果有，如何选择？

6、c，能否设计对比实验，说明选择徽章的作用？液体培养基，原因是公式中没有絮凝剂，有选择作用，这个公式的碳源是纤维素粉末，是唯一的碳源，因此能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。与牛肉软膏蛋白胨培养基对照，或将纤维素转变为葡萄糖。(2)选择性培养，d，配方的酵母膏也能提供少量碳源，对纤维素细菌的培养有什么影响？酵母膏的含量少，所以其他微生物也可以在这个培养基中繁育和繁殖，但很少。但是只有使用纤维素作为碳源的微生物才能大量繁殖。在选择性培养条件下，能适应这种营养条件的微生物可以快速繁殖，不符合这种营养条件的微生物的繁殖受到抑制，因此选择性培养可以起到必要微生物的“富集”作用。为什么我们选择培养可以“富集

7、”的微生物？具体操作，选择培养基的准备按配方准备，将30毫升培养基放入250毫升锥形瓶内，用纱布制作瓶盖，瓶盖外包装包装纸，紧扣，高压蒸汽灭菌。选择培养的操作是在土样品20g，无菌状态下，将土样品放在装有30ml选择培养基的锥子瓶里，在摇晃中固定锥瓶，在一定温度下振动，直到培养液浑浊为止，培养12天。拉出一定量的培养液，转移到新的选择培养基上，同样会培养混浊。振动培养的目的？增加溶解氧，为目标细菌提供O2，为识别纤维素细菌准备培养基，(4)在培养基上涂样品，为识别纤维素细菌，为识别纤维素细菌准备培养基公式，准备悬浮液根据主题1的稀释工作方法，选择培养基等比稀释，稀释最大倍数为106，(3)梯度

8、稀释，反向平板涂层每种稀释度也在下面涂上3块板，设置对照组。刚果红染色法，方法1:首先培养微生物，然后为颜色反应添加刚果红，方法2:浇板时添加刚果红，方法(5)生成透明环的集落，生成明显透明环的集落，通常分解纤维素的集落。颜色反应从根本上经过纤维素分解菌的作用。操作麻烦。刚果红容易在军殖民地之间混合，操作简单。没有军殖民地混合问题。培养基中也含有淀粉物质，因此会对生产淀粉酶的微生物产生假阳性反应；有些微生物在长时间的培养过程中分解刚果红，形成引人注目的透明源，具有分解纤维素分解细菌和难以分辨的色素的能力。想：这两种方法各有优缺点，可以观察到时间短，时间长，可以改变，(6)在纤维素细菌的纯化和纤维素细菌的选择培养基上接种300C370C的培养，纯化培养。为了确认分离是纤维素分解菌，还需要_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _实验。纤维素酶的发酵方法有_ _ _ _ _ _ _ _ _发酵和_ _ _ _ _ _ _ _ _发酵。纤维素酶测定方法定量测定纤维素酶降解滤纸等纤维素生成的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _量。，发酵纤维素酶生产，液体，固体，葡萄糖，3，主题扩展，4，结果分析和评价，培养基制作的适宜性和选择培养基是否筛选？对照组培养基在培养过程中未生长，培养良好。如果观察产生透明环的