实验二+细菌的简单染色与革兰氏染色ppt课件

1、实验二细菌简单染色和革兰氏染色，1，1，目的要求，1，确定显微镜的使用方法2 .掌握细菌简单染色和革兰氏染色的原理和方法。 2，2，基本原理，3，用于革兰氏染色、生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三种。 碱性染料的络离子有正电荷，可以与有负电荷的物质结合。 由于细菌蛋白质的等电点低，在中性、碱性或弱酸性的溶液中生长时，经常带有负电荷，因此通常使用碱性染料(例如米兰、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等)着色。 酸性染料的络离子带负电荷，可以与带正电荷的物质结合。 细菌分解糖类的酸降低了培养基的pH，细菌所具有的正电荷增加，从而容易被曙红、酸性茄红素、刚果红等酸性染料着色。 中性染料是前者和

2、后者的结合物，也被称为伊红美兰、伊红天青等复合染料。 4、简单染色法是仅用一种染料将细菌着色显示其形态，简单染色不能分辨细菌细胞球的结构。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。 革兰氏染色法可将所有细菌分为革兰阳性菌(g )和革兰氏阴性细菌(G-)两种，是细菌学最常用的鉴别染色法。 根据这两种菌的细胞贴壁结构和成分的不同，可以将细菌分为g菌和g菌。 5、革兰氏阳性和阴性菌细胞贴壁成分比较，成分占细胞贴壁干重的%革兰阳性菌革兰氏阴性细菌肽聚磷含量高(50-90 )磷酸含量高(50 )类脂质一般很高(20 )蛋白质含量高， 而且由于肽聚糖层薄，交联度低，用乙醇和丙酮脱色时脂质

3、溶解，细胞贴壁的渗透性增加，结晶紫和碘元素的复合物容易渗出，细菌被脱色，经黄砂再染色变成红色。 由于g菌细胞贴壁中的肽聚合层厚，交联度高，脂质含量少，经脱色剂处理后，反而缩小了肽聚合层的孔径，降低了渗透性，因此细菌在初染时留下了颜色。7、3、实验器材、1、材料培养12-16h的纳豆菌、2.4时间的大肠菌群2、染色液和试剂草酸铵结晶紫、碘元素液、95%乙醇、黄砂、混合二甲苯、香沥青3、器材废液罐、巴巴、8、4、实验方法和程序，1、简单染色(1)涂膜取出干净的载玻片，在载玻片左右各加入一滴蒸馏水，用无菌操作法取出菌涂膜，向左涂纳豆菌，向右涂大肠菌群，制成浓菌液。 取干净的幻灯片，将刚刚制成的纳豆菌

4、液向左涂2-3次，将大肠菌群的浓菌液向右涂2-3次，薄薄地涂一层。 请直接在载玻片上薄薄地涂一层，留心的不要去除过多的细菌。 9、1.0、(2)晒干涂膜或在酒精灯火焰上烤干。 (3)固定手的玻璃片的一端，菌膜朝上，用火焰固定23次(最好不要烫伤手)。 (4)将染色固定的涂膜放置在废液罐的架子上，用加沙黄染色1-2min。 (5)用水洗除去涂膜上的染色液。 (6)干燥洗涤的涂膜在空气中晒干，或者用吸水纸吸干。 (7)镜检先低倍观察，高倍观察，找住的整合适的视野后，取出高倍镜，在涂膜上滴香柏油，将油透镜浸泡在油滴中，仔细观察细菌的形态。、1.1、涂片、干燥、固定、染色、水洗、镜检、简单染色方法、干

5、燥、1.2、2、革兰氏染色、(1)涂片与简单染色涂片相同(2)干与简单染色法相同(3)固定与简单染色法相同(4)初染是将玻璃板放在废液箱的玻璃板架上，适量(3) 的结晶紫染色液染色的(5)染色液水洗，用水仔细冲洗，1.3，(6)向介质染滴中加入碘元素液，介质染1min； (7)水洗除去碘元素液；(8)脱色时倾斜玻璃板，连续滴加95%乙醇脱色2 0-25s，直至流出液变为无色；(9)立即水洗；(9)再次染色加沙黄；(1.0 )水洗除去涂膜上的黄砂染色液1.4、1.5、5个注意事项、1、革兰氏染色成功与否的关键在于酒精脱色。 若脱色过度，革兰阳性菌也可脱色而染上阴性菌；若脱色时间过短，则革兰氏阴性细菌也染上革兰阳性菌。 脱色时间的长短受涂膜厚度和乙醇用量等因素的影响，很难严格规定，需要进一步练习2 .选择幼龄细菌。 g菌培养12h-16h，E.coli培养24h。 随着菌龄的增加，菌体死亡或自我溶解，革兰阳性菌呈阴性反应。1.6、六思维问题和作业问题