二代测序技术在血液系统疾病中的应用浅谈#专业知识

1、二代测序技术在血液系统疾病中的应用,1,专业精制版,Sequencing the Human Genome,Year,price,2010,1997,2008,10,8,6,4,2,Trends in Sequencing Technology,2003,Sanger,2015,2,专业精制版,三代测序技术,Trends in Sequencing Technology,3,专业精制版,1代测序Sanger Sequencing,利用DNA聚合酶和双脱氧链终止测定DNA核苷酸序列的方法。 英国剑桥分子生物学实验室的生物化学家 Fred Sanger及其同事在1997年发明的。,优点 片段长度(

2、900bps) 适用于小片段,缺点 低通量 费用高、耗时长,Trends in Sequencing Technology,4,专业精制版,二代测序，高通量测序（Next Generation Sequencing 、High-throughput Sequencing 、Deep Sequencing）:一次性对几百万到十亿条DNA分子进行并行测序，从而可对一个物种的转录组和基因组进行深入、细致、全貌的分析。 目前主要有Life Tech的SOLiD系列、Ion Torrent PGM和Ion Torrent Proton；Illumina的HiSeq和MiSeq序列；罗氏公司的Roche/

3、454 GS FLX和Junior。,Trends in Sequencing Technology,2代测序Next Generation Sequencing (NGS),通量高 准确度高 分辨率高,成本下降,5,专业精制版,Trends in Sequencing Technology,6,专业精制版,High Parallelism is Achieved in Polony Sequencing,Polony,Sanger,7,专业精制版,3代测序单分子测序：HeliScope,DNA测序时，不需要经过PCR扩增，实现了对每一条DNA分子的单独测序。第三代测序技术基因组也叫从头测序技

4、术，即单分子实时DNA测序。 第三代测序技术发明人：Stephen W Turner 127(1): 2941.,NGS在MDS中的应用,738 例 MDS, MDSMPN患者 通过NGS检测了111 个癌症相关基因，结果显示：78% 的患者至少有1种致癌基因的突变 骨髓或外周血提取DNA没有系统差异 致癌基因突变的总数越多，结果越差,髓系肿瘤突变图谱 AML, MDS, MPN, MDS/MPN,Matynia et al et al. 2015. Archives of Pathology and Laboratory Medicine.,总生存率,复发率,Ivey et al., N E

5、ngl J Med 2016;374:422-33,MRD in Standard-Risk AML,有MRD的患者预后差，复发率高,Ivey et al., N Engl J Med 2016;374:422-33,MRD in Standard-Risk AML,有MRD携带FLT3-ITD 的患者复发率高,复发无 FLT3-ITD mutations,复发有FLT3-ITD mutations,Ivey et al., N Engl J Med 2016;374:422-33,MRD in Standard-Risk AML,有MRD携带DNMT3A的患者复发率低,复发without DNMT3A mutations,复发with DNMT3A mutations,NGS在T-ALL中的应用,NGS（外显子测序，全基因组测序或转录组测序）已经鉴定出T-ALL中突变的100多个基因。 只有两个基因NOTCH1和CDKN2A / 2B在超过50的T-ALL病例中突变，其余基因以较低的频率突变,63个基因的靶向测序（TGS）,NGS在CLL 临床诊疗中的应用,30,专业精制版,不同的panel针对不同的需求,IG/TCR,展 望,NGS正在为病理学和实验医学带来改革 真正实现“个体化治疗”、“精准治疗” 有利于进行靶向治疗 费用的快速降低，技术的持续提高