月季的花药培养li.ppt

1、谈谈你对月季的认识,A：高杆 a：矮杆 B：抗病 A：感病,单倍体育种原理遗传图解,花的结构,花托 花萼 花瓣,雄蕊,花药 花丝,雌蕊,柱头 花柱 子房,花丝,花药：囊状结构，内有很多花粉,（一）被子植物的花粉发育,1 雄蕊,一、基础知识,2 花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞.,（一） 被子植物的花粉发育,小孢子母细胞 或花粉母细胞 2N,4个小孢子N 四分体时期,1个小孢子N 单核居中期,单核靠边期N,注意：,“此”四分体非“彼”四分体： “此”：是指被子植物花粉发育过程中，四个小孢子连在一起； “彼”：是指减数分裂过程中同源染色体两两联会后，每个四分体含有四条姐妹

2、染色单体。 正确认识营养细胞和精子的关系： 精子就处在营养细胞的原生质中，营养细胞为花粉管的形成提供营养物质。,（一） 被子植物的花粉发育,小孢子母细胞 或花粉母细胞 2N,4个小孢子N 四分体时期,1个小孢子N 单核居中期,单核靠边期N,精子（花粉或花粉细胞）,营养细胞核,注意： 二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）,三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个花粉管细胞核和两个精子。不是所有植物都形成三核花粉粒,2N,（二）产生花粉植株的两种途径,移栽,体细胞胚（胚状体）：在组织培养过

3、程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似,原因：培养基中的激素种类及浓度配比,1、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同. 同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响. （一般选月季的初花期） 合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间） 2、培养基的组成（ MS培养基+不同比例的植物生长调节激素）,此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等,(三)、影响花药培养的主要因素,注意：选择最合适的花粉发育时期:单核期 不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎； 不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难； 挑选单核期花药方

4、法：应当选择完全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。,实验操作,一、材料的选取 二、材料的消毒 三、接种和培养,（一）材料选取,2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。,1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的,花药（载玻片上）1%的醋酸洋红1滴用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）,花药（在卡诺氏固定液中处理20min）取出，置于载玻片上焙花青铬矾溶液染色盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）,月季花药培养时的花粉粒最好是（ ） A、四分体时期 B、二核或三核花

5、粉粒 C、单核期,C,（二）材料的消毒,5、无菌水冲洗35次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态,1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒,2、无菌水清洗,3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分,4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中24分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）,为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。,为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,讨论：,（三）接种和培养,1 灭菌后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。,3 通常每瓶接种花药 ，温度控制在 左右， 。幼小植株形成

6、后才 。,2 在剥离花药时，要尽量 （否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。,一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。,4 进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化,无菌条件,不损伤花药,去除花丝,7-10个,25,不需要光照,需要光照,主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的,植物组织培养技术与花药培养技术的比较,1 离体培养的外植体为体细胞。 2 有丝分裂的过程，染色体数量不变。,1 花粉是生殖细胞，得到的单倍体植株，弱小

7、且高度不育。 2秋水仙素处理，染色体加倍，恢复正常的染色体数，为纯种。,2. 培养基的组成,课堂小结：,一、花药培养与单倍体育种之间的关系； 、被子植物花粉的发育； 、产生花粉植株的两条途径； 四、影响花药培养的因素。,反馈练习： （1）一个小孢子母细胞经减数分裂产生4个小孢子，由一个小孢子到形成两个精子，其间经过的分裂次数及分裂方式为() A一、有丝分裂 B二、减数分裂 C二、有丝分裂 D三、有丝分裂 （2）基因型为AaBb的一个小孢子母细胞经分裂形成的一个花粉粒中的一个花粉管细胞核和两个精子，其基因型分别是() AAB、Ab、Ab BAB、AB、AB CAB、aB、aB DaB、ab、ab,C,B,注意：,不是所有植物都形成三核花粉粒： 被子植物有192科成熟花粉粒中只含两个细胞核，