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文档简介

1、蚕豆根尖微核检测技术,实验目的 1.了解微核检测的原理和毒理遗传学 2.学习蚕豆根尖微核检测技术,实验原理,微核（micronucleus，MCN）： 是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构 微核率（ MCN ）与作用因子的剂量或累积效应呈正相关 污染指数,实验材料,蚕豆根尖,实验步骤,1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸泡24h，此间至少换水两次。种子吸胀后，25催芽，置于铺有湿润滤纸的培养皿中，经3648h，大部分初生根长至12cm。 2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-5粒初生根生长良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根尖即可。阳性检测因子

2、可采用CrO3、NaN3、重铬酸钾、EDTA为加强阳性效果可适当加大溶度，如1.02.5mol/L CrO3和0.51.5mol/L NaN3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖1224h，此时间也可视试验要求和被检液溶度而定。,实验步骤,3、根尖细胞恢复培养：处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次23分钟。洗净后再置于铺有湿润滤纸的中，25下恢复培养2224h。 4、根尖细胞固定：将恢复培养后的种子，从根尖顶端切下长1cm左右的幼根，用甲醇-冰醋酸（3：1）固定液固定24h。固定后的根尖如不及时制片，可换入70%酒精中，置4冰箱中保存备用。,5

3、、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏 水，加6mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离10min至根尖软化。 6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次12min。最后浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下12mm长的根尖，滴一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。 7、显微镜观察、微核细胞记数：每一处理观察3个根尖、1000个细胞，统计MCN ，计算污染指数,实验步骤,实验结果,首先在显微镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察。微核大小在主核1/3以下，并与主核分离，着色与主核一致或稍深，呈圆形或椭圆形。每一处理观察3个根尖，每个根尖计数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，计算平均数，即为该处理的MCN ，即微核千分率，以此可作为一个检测指标。 根据你的实验安排列表填写实验结果。,若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。 污染指数（PI)=样品实测MCN 平均值/对照组（标准水）MCN 平均值 污染指数在0.501.50区间基本没 有

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