免疫定性项目性能验证.ppt

1、临床免疫学定性试验的性能验证、高速列车的性能验证、空气动力学速度车体转向架中固定和悬挂部件的强度稳定性舒适性的故障率，第3页、测量系统、方法、操作程序、校准品、仪器、试剂、测量系统的关键要素，为什么医学试验需要“性能验证”？评估测试系统是否符合临床测试和认证组织(ISO 15189)的要求；验证制造商提供的试剂参数是否可以在我们的实验室复制。何时执行性能验证，何时使用新的检测试剂或系统；更换检测试剂或系统时。更换新试剂或系统的意义：操作更简单，检测性能更高，更经济，更能满足实验室测定的要求，1。定性临床应用和分类。免疫学检测：传染病、肿瘤标志物核酸和基因检测、微生物学检查、细胞学检查、寄生虫检

2、查。定性实验的临床分类筛选实验：如粪便潜血、梅毒诊断实验：如微生物培养和细菌鉴定确认实验：对上述检测结果进行验证和确认；3.几个重要的概念，筛选实验：临床筛选方法通常用于检测整个人群(或人群的特定部分)中的特定指标。例如，对需要输血的病人样本进行艾滋病毒血清学检测。一般来说，这些用于筛选的定性测试必须具有高灵敏度，以确保检测到真正的阳性结果。如果筛查试验假阳性结果造成的社会和经济后果不是很严重，这种低特异性可以通过特异性更好的确认试验来弥补。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；已批准的指南，3，3。几个重要的概念，诊断测试：诊断定性测试，通常用于临床怀疑特定疾病或条件的存在。例如

3、，各种微生物的培养是检查感染的诊断测试。临床对治疗的要求，诊断试验应具有良好的敏感性和特异性。如果在诊断测试之后进行确认测试，则诊断测试的特异性要求可以稍微降低。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；已批准的指南，3。几个重要的概念，确认测试：确认测试用于验证筛选测试或诊断测试的结果。如果诊断测试确认了先前的测试结果，临床医生可以做出诊断。验证试验被设计成具有高特异性(有时甚至以牺牲敏感性为代价)和高阳性预测值。蛋白质印迹试验是在筛选试验如艾滋病毒血清学试验之后的确认试验。3。几个重要的概念，灵敏度或阳性测定能力指数(DI():可以定义为实验在确定阳性标本后给出阳性结果的能力。DI

4、()=真阳性/(真阳性假阴性)100%特异性或阴性测定能力指数(DI():则是对阴性样品给出阴性结果的能力。DI ()=真阴性/(真阴性假阳性)100%。3.几个重要的概念，阳性预测值：即阳性样本实际上是阳性的可能性。=真阳性/(真阳性假阳性)100%阴性预测值：是具有阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。=真阴性/(真阴性/假阴性)100%，灵敏度=100%，特异性=100%，相关样本的流行率=100%，阳性预测值=100%，阴性预测值(PVN)=100%，方法效率预测值对95%灵敏度和95%特异性试剂检测结果的影响(100，000人)，2。定性检测系统的性能验证，验证内容： 1。准确度(准确

5、度)2。精度3。敏感度4。特异性5。截止值验证6。其他(必要时)，Ep15a2 ep17a ep12临床实验室和标准研究所(clsi)，其涉及免疫学定性试验评价方法的标准、临床实验室标准化协会、性能验证前的准备，并应熟悉待验证的试剂或系统并进行必要的培训，包括样品处理和储存、试剂处理和储存、合理的检测方案、结果的合理解释和系统质量控制等。制定质量保证计划，以确定患者样本的数量和强度(评估重复性)，并确定比较方法，即clsi ep12-a2用户协议，用于评估定性测试性能。经批准的指南，性能验证的资格标准从何而来？试剂盒说明、性能验证前样品制备和质量控制产品的国际和/或国际标准：使用商业质量控制产

6、品，包括阴性和阳性产品。样品的收集和保存：收集时间和保存方法必须一致。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；经批准的指南，用于比较的样本数量取决于评估者的目的。作为最低要求，测试应继续进行，直到通过比较获得至少50个阳性样本。并且通过比较法获得至少50个阴性样品以确定该检测方法的特异性。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；已批准的指南，1。准确性验证，1)用已知值测试参考材料(卫生部或CAP)。制造商提供的指定参考材料通过参考方法进行分析，或通过决策方法对具有固定值的材料进行分析。2)方法比对试验：样品数量为10-20个，同一样品用两种方法同时测定，两种方法检测结果的

7、一致性用KAPPA试验(如HBV酶联免疫吸附试验和发光法的比较)进行分析，共选取40个样品(20个样品)，最好用阴阳半随机盲法复检。将所有检测结果汇总并填写在表格中，以计算和评估性能指标。2.精度验证，1)批内精度：同一样品在同一批中平行重复测试10次。然后计算平均值，标准差和变异系数。2)批间精度：同一样品连续测试10天，每天平行测试双孔。然后计算平均值，标准差和变异系数。注：使用信噪比进行统计计算。最好选择临界值。或者弱阳性样本。判断标准是33，360。批内变异系数小于15%，批间变异系数小于25%。验证批次内的可重复性。在一批测试中，高、中、低浓度的样品重复测试20次(孔)。计算获得的硫

8、/一氧化碳值的平均值和标准差，并计算批内的变异系数百分比。判断结论：应遵循试剂说明书中注明的批内变异。酶联免疫吸附试验的变异系数应为10%。批次间重复性的验证。对于高、中、低浓度的样品，在10天以上的时间内，一次(孔或管)重复20批试验，计算硫/一氧化碳值的平均值和标准差，并计算批次间的变异系数%。判断结论：应遵循试剂说明书中注明的批次之间的差异。酶联免疫吸附试验的变异系数应为15%。3。灵敏度，1)验证方法：取10-20个已知为真阳性的样本，用常规测试方法进行测试，计算阳性样本占样本总数的比例。2)样本来源为：份临床诊断阳性患者血清；制造商提供的阳性对照；阳性样品用决定性参照法检测；当出现以

9、下情况时，可以稀释上述阳性样品(如2: 3、3: 4稀释)2)样本来源为：份体检样本，经体检人员确认符合要求。注：部分项目在健康检查人群中阳性率较高，对这些项目的具体验证难以实施，因此建议引用制造商的说明，如麻疹病毒IgG、CP-IgG、MP-IgG和一系列病毒抗体IgG。因为很难确认体检者以前是否有过感染史，而且抗体在体内停留的时间很长，所以很难收集到真正的抗体。含有干扰物质的样品：类风湿因子阳性、嗜异性抗体、溶血、血脂和高胆红素血症的样品。结果判断：所有非特异性病原体感染患者的标本均为阴性。含有一定浓度干扰物质的样品应检测为阴性。5。截止重复性和测定下限的验证，截止重复性的验证：样品浓度应

10、接近临界值。不应使用阴性或强阳性样本。批内和批间变异验证：高、中、低浓度(对应于试剂盒说明书中描述的浓度)、临界点的定义、相同的样品和分析物的浓度，在重复实验中获得阳性或阴性结果的概率为50%。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；经批准的指南，临界值和试剂盒判断值(临界值)之间的差值，其中临界点指试剂检测临界点处的样品浓度，一旦确定，该浓度不变。试剂盒的截止值是指根据一定的公式由阴性和阳性对照信号值计算出的信号值，用以判断一定的测定结果，每次测定都会有所不同。(1)截止重复性验证、截止重复性(包括测定下限的验证)、批内变异的验证和批间变异的验证、验证步骤，制备了3个足够重复检测4

11、0次的样品：临界浓度样品、高于临界浓度20%的样品和低于临界浓度20%的样品。重复测试样品40次，以确定每个样品阳性和阴性结果的百分比。评估的临界浓度是否准确？评估20 -20%的浓度范围是否包含在该方法的95%范围内、位于该范围内或超过该范围。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；经批准的指南C50准确吗？不同C50重复检测次数与阳性检测次数之间的关系，以及截止的重复性如何？是为被评估的检测试剂或系统建立分析物的临界浓度(C50)，并确保20%的临界浓度在95%的范围内。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；经批准的指南，如何获得系统或试剂的“临界点”，以及检测试剂或

12、系统的规格可指示分析物的临界浓度。如果临界浓度未知，可以将阳性样品连续稀释，然后重复测试，以确定哪种稀释可以获得50%阳性和50%阴性结果。该稀释度下的分析物浓度是临界点。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；经批准的指南，(2)测定下限的验证。处于测定浓度下限(如临界点浓度的20%)的样品应测试20次，至少18次(90%)应为阳性反应。重复性验证的质量控制、质量控制产品：如果方法学比较在10天内完成，则应对每批质量控制样品进行测试；如果失控，这次的测试结果将无效。安排复验以更换不合格批次。实验室应该分析失控的原因。不合格批次10天内不得超过1次，20天内不得超过2次。如果超过标准

13、，实验室应停止测试，并咨询试剂制造商以确定原因并采取纠正措施。获得了20次重复测试的结果。如果方法的比较研究持续超过20天，将对每批中的每个对照样品进行一次单一测试，并且还将提供总共20个结果。，CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；已批准的准则，6。其他(1)同一项目中不同检测方法或仪器的比较，适用范围：一个项目中有两种以上的方法或两种以上的仪器(包括同类型的仪器)同时检测，需要进行一致性比较。(注：在定量检测中，不需要比较不同的报告单位。)对于第一次比较，选择40 (20)个样本，最好将每8个样本分成一组两种方法(或两种仪器)，每天并行测试一组样本。通过Kappa检验对所有测试

14、结果进行总结，并对一致性进行评估。新鲜患者血清阴性2例，阳性3例，包括高、中、阳性血清/一氧化碳。低值避免“灰色区域”夹心法：血清/一氧化碳低值1.23竞争法：血清/一氧化碳低值0.40.6判断标准：100%符合率可接受。(2)变更批号的简单比较：(3)性能验证标准操作程序的编制，理想的操作方法：操作中影响测定结果的关键环节是已知的；可操作的标准操作程序。如何编写SOP？(4)试剂性能验证(定性)、重复性和准确性检测限(定性)、批内变异(10%)和批间变异(15-25%)、钩效应变异(如乙型肝炎表面抗原)的检测能力、临床敏感性和特异性抗干扰能力。性能验证注意事项，CLSI EP12-A2定性试

15、验性能评估用户协议；已批准的指南，2。对于数据收集的检查，应立即记录所有原始测试数据，并重新检查，以便及早发现分析系统和人为错误的来源。一旦发现某些结果是由可解释的错误引起的，就应该记录下来，同时，这些结果不能用于数据分析。如果无法确定错误的原因，请保留原始结果。3。不一致结果的处理。如果比对方法不是100%准确，可以使用“金标准”和“参考方法”来检测检测方法和比对方法之间有差异的样品。CLSI EP12-A2定性测试性能评估用户协议；已批准的指南，4。参考血清盘、已经过检测的临床样本、或通过成熟方法检测的临床样本、或在临床诊断中具有重要意义的临床样本，对于评价定性方法是有价值的。阳性样本的浓度各不相同，具有代