细胞划痕课件

1、细胞划痕实验，1。基本原理细胞划痕法是一种简单的测量细胞迁移、运动和修复能力的方法，类似于体外伤口愈合模型。在体外培养皿或平板中培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其他硬物刻划细胞生长的中心区域，并去除细胞的中心部分，然后在实验设定的时间(例如24小时)内继续培养细胞。取出细胞培养板，观察周围细胞是否迁移(修复)到中央划痕区，从而判断细胞的生长和迁移能力。实验通常需要设立一个正常对照组和一个实验组。实验组是添加了一些治疗因子或药物、外源基因等的组。每组中细胞的迁移和修复能力可以通过不同组之间划痕区域中细胞的修复能力的差异来判断。第二，实验步骤的准备：所有灭菌的仪器都应灭菌。操作前用紫外光照射直尺

2、和记号笔30分钟(在超净台上)。1.首先，用六孔板后面的记号笔，与直尺比较，画一条水平线，每隔0.51厘米穿过一个孔，每个孔至少有5条线。2.向孔中加入约5，105个细胞，不同细胞的具体数目不同，这些细胞可以在一夜之间汇合。3.第二天，比较直边和枪头，试着垂到它后面的水平线。枪头应该垂直，不要倾斜。最好在不同的孔之间使用相同的枪头。4.用PBS洗涤细胞3次，去除刮伤的细胞，并加入无血清或低血清培养基。5.将其置于37 5% CO2培养箱中培养。在0、6、12和24小时取样并拍照。培养插入法(确保划痕的均匀性)1。准备细胞和培养基。2.如图所示，将细胞接种到培养皿中间的插入物中，在细胞被插入物区

3、域覆盖后，可以用镊子移除插入物，产生宽度为500m 3的划痕。每4-6小时拍一次照片。4.根据收集的图片数据分析实验结果。3.实验结果的统计方法：用ImageJ软件打开图片后，随机画6-8条水平线，计算细胞间的平均距离，测量划痕区域的像素，定量比较细胞迁移的速度。其他结果分析工具：伤口愈合图像分析WIM划痕图像投影，划痕结果图，0h，6h，12h，24h，小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3，4。注意事项：1 .用PBS缓冲液洗涤时，注意缓慢加入贴壁细胞，以免分散单层贴壁细胞，影响实验摄影结果。2.一般来说，划痕试验是无血清或低(2%)，否则细胞增殖不能忽视。(也可用丝裂霉素治疗一小时。)3 .根据

4、6孔板背面所画的线，在垂直方向上的划痕可以形成几个交点作为固定的检测点，从而解决前后观察时位置不固定的问题。特点：1 .在某种程度上，它模拟了细胞在体内的迁移过程。2.价格低廉，操作简单。另一个重要的一点是，细胞周围的环境简单且易于控制。3.与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞之间的相互作用。4.体外研究细胞迁移的最简单方法。实施例：抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶对肿瘤细胞迁移的影响(细胞划痕法)。首先，实验原理：细胞划痕法是测量肿瘤细胞运动特性的方法之一。借鉴体外伤口愈合的实验模型，刮擦体外培养的单层细胞，并加入药物观察其抑制肿瘤细胞迁移的能力。2.实验材料：1)细胞系及其培养物：肝

5、癌细胞HepG2 2) 24倒置显微镜，24孔板移液管3)主要试剂：PBS DMEM培养基0.25%胰蛋白酶胎牛血清5-氟尿嘧啶溶液(1ug/ml)，3。实验步骤1中单层细胞的制备：将细胞密度为510-105/ml的Hep G2细胞铺在24孔板(每孔500微升)上，加入含10%胎牛血清的DMEM培养基1624小时，使单层细胞刮擦2次。以五氟脲嘧啶(5Fu)为例，先配制1 g/L母液(用无菌蒸馏水配制，精确计量)。取45升母液，用PBS稀释至1.1毫升，得到浓度为40克/毫升的5Fu溶液。用10微升移液管尖(或无菌牙签)刮擦单层细胞，用PBS洗涤3次，然后加入上述制备的5Fu溶液，平行孵育两个样品24小时，并与含10%胎牛血清的DMEM培养液孵育24小时3。观察和拍照：吸取培养液，用PBS冲洗3次，在倒置荧光显微镜下观察和拍照。4.注意事项：1 .注意细胞生长，选择合适的细胞接种浓度，观察不同细胞的贴壁率，实验过程中确定细胞的接种数量和培养时间，培养结束时保证合适的密度。2.用PBS缓冲液