第三节动物的克隆

1、,2013年,加州大学的摩尔癌症中心的研究人员声称，鉴定出一种能够靶向和直接杀死慢性淋巴细胞白血病细胞的RG7356抗体。,2015年1月以色列科学家发现anti-HER3抗体能治疗胰腺癌细胞.,抗体可以杀死癌细胞,美国国家科学院院刊,抗原,B淋巴细胞,浆细胞,抗体,只分泌一种特异性抗体,什么是抗体？怎么产抗体？抗体在哪？,病原体,一个, 一个B细胞只能生产一种抗体，针对某一抗原。,若一个病原体上有多种抗原，则需要多种浆细胞分別生产多种抗体。,浆1,浆2,浆3,Y,Y,Y,Y,病原体,浆,Y,B,1,1,2,3,4,抗原,传统的抗血清,抗原,免疫,1,2,3,4,浆细胞,传统制备抗体的方法:,

2、有何缺点？,如何大量制备化学性质单一、纯度高、特异性强的抗体？,科勒,米尔斯坦,把一种B淋巴细胞和能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，得到的杂交瘤细胞同时具有这两种细胞的特性既能大量增殖，又能产生数量足够的特异性抗体。,抗原,抗体,B淋巴细胞（浆细胞）,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,筛选,这个方案可行吗？,融合,产所需抗体的杂交瘤,19世纪30年代，科学家们相继在肺结核、天花、水痘、麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。19世纪70年代，科学家们在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象。当时，人们对这一现象并未给与足够的重视。 1958年，日本科学家岗田用灭活的仙台病毒诱导人的腹水癌细胞融合成功。

3、1965年，英国科学家进一步证实灭活的病毒在适当条件下可以诱发动物细胞融合。 后来，科学家们又成功地用化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）诱导了不同种动物的体细胞融合，并且能将杂种细胞培养成活。,资料1：,1.B淋巴细胞和骨髓瘤细胞能实现融合吗？,动物细胞融合,将骨髓瘤细胞与脾细胞按1:2到1:5的比例混合在一起，置37水浴。 加入0.3-0.5ml 的50%PEG溶液，边加边轻微摇动，静置作用90s。 滴加15mlGKN溶液以终止PEG作用。,人工诱导细胞融合的具体做法,脾脏中的B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,PEG,两两融合的细胞会出现几种？,骨髓瘤细胞,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细

4、胞,2.怎么筛选杂交瘤细胞？,资料2：已知细胞合成DNA有D和S两条途径, 其中D途径能被氨基喋呤阻断，抑制DNA合成。B淋巴细胞中同时具有这两种途径，但体外培养时不能分裂增殖；而鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，体外培养时可以分裂增殖。,产特异性抗体的杂交瘤细胞？,资料3： 有限稀释法是细胞克隆的一种方法。它是将需要克隆的细胞稀释, 用多孔培养板培养, 使每孔不超过一个细胞, 培养使其增殖。 每一个杂交瘤细胞只能产生一种特定的抗体, 能与特定抗原结合。,资料3： 有限稀释法是细胞克隆的一种方法。它是将需要克隆的细胞稀释, 用多孔培养板培养, 使每孔不超过一个细胞, 培养使其增殖。 每一个杂交瘤细胞只

5、能产生一种特定的抗体, 能与特定抗原结合。,阳性孔,BB 、B瘤 、瘤瘤 （未融合的B、瘤）,（筛选1）选择培养基：只有杂交瘤细胞才能存活,获得产生相应抗体的B细胞,（筛选2）抗原-抗体杂交：筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞,体外培养,小鼠腹腔内培养,杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。,科勒,米尔斯坦,1984年诺贝尔生理学或医学奖,把一种B淋巴细胞和能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，得到的杂交瘤细胞同时具有这两种细胞的特性既能大量增殖，又能产生数量足够的特异性抗体。,乙肝诊断试剂盒,艾滋病诊断试剂盒,作为诊断试剂,单克隆抗体的应用,主要用于治疗癌症,2015年1月美国国家科

6、学院院刊（PNAS）发表了以色列科学家的一项最新研究进展，他们制备了几种anti-HER3单克隆抗体，通过对比这几种单抗的能力，发现其中一支单抗能够明显抑制小鼠体内胰腺癌细胞的生长。,治疗疾病,运载药物,生物导弹,2013年,鉴定出一种能够靶向慢性淋巴细胞白血病细胞的细胞表面糖蛋白受体CD44的单克隆抗体。因此，该单克隆抗体能特异性地靶向白血病细胞,进而毒杀癌细胞,但是对正常的细胞几乎没有什么影响。,1.单克隆抗体是由哪种细胞产生的（ ） A. B淋巴细胞 B. T淋巴细胞 C. 骨髓瘤细胞 D. 杂交瘤细胞,D,测一测,2.对于下面制备单克隆抗体过程示意图，不正确的叙述是(),A表示已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞均是从小鼠的脾脏中提取的 B促进细胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介导 C中的筛选是通过抗原抗体反应进行的 D可以无限增殖,A,体外培养单