天然药物化学实验讲义

1、天然药物化学实验讲义实验的心得体会天然药物化学实验教学是天然药物化学课程的重要组成部分，是让学生更好地结合理论，掌握天然药物有效成分的提取、分离和鉴定的基本操作技能，提高学生的分析和解决问题的能力。 培养严密的科学态度和良好的工作态度不可缺少的教育环节。 因此，提出以下实验的心得体会1 .遵守实验室制度，维护实验室安全，不做违反操作，严格防止爆炸、起火、中毒、触电、漏水等事故的发生。 发生事故应立即向领导人民教师报告。2、实验前预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，制定当天的修订计划，努力按时完成。 实验过程要养成及时记录的习惯。 所观察到的现象和结果以及相关的重量、体积、温度或其他数

2、据，必须立即忠实记录。 实验结束后，认真总结，写报告书，提取纯化得到的单体产物包装，按标签条(日期、样品名、纯度、mp、bp、tlc、重量3 .实验室内安静，高声地喧嚣时要不得，吸烟时要不得，不迟到，不随便离开，实验台清洁，使用过的器械立即漂亮地清洗，存放在实验箱中，将废弃的固体和滤纸等放入垃圾桶，放入水族箱，下水道和窗外，影响堵塞和环境卫生4 .公共机器及药品使用完毕应立即返还原处，破损机器应填写破损申报表，注明原因。 节约用水、电功耗和药用试剂。 严格的药品使用量。5、保持实验室清洁，学生轮流值班，每次实验结束后，负责公共设备的整理，漂亮地清理实验台、地面，推倒废物罐，检查水、电、门和窗是

3、否关。实验一薄层板的制备、活性度测定及应用一、目的要求1 .掌握硅凝胶薄层板的制备及薄层色谱法的操作方法2 .掌握硅凝胶薄层活性度的测定方法3 .利用薄层色谱法检测药材的化学成分二、实验材料薄层色谱法用硅凝胶g、硅凝胶f、羧甲基电池里肌肉纳金属钍、0.01%二甲基黄(dimethyellow.pdimethylaminoazobenzene )、苏丹红(sudaniii )、靛酚蓝三、实验操作(1)薄层板的制备1 .硅凝胶薄层的制备(1)取硅凝胶g薄层的硅凝胶g或者硅凝胶gf的一部分，在烧杯中加入水，约5份混合均匀，放置有会儿后，用药匙取一定量，分别注入一定大小的玻璃片(或者放入涂布器，推一推

4、涂布)，均匀地涂布成0.250.5mm的厚度， 轻轻地使玻璃板振动，薄的活性化温度和时间可以根据需要调整，一般检测水溶性成分或极性大的成分时，使用的薄层板只需在空气中自然干燥，即使不活性化也可以储藏。(2)硅凝胶(h )羧甲基纤维纳米金属钍(cmcna )薄层cmcna系碳水化合物，在水浴上制备。 羧甲基胞里肌肉纳米金属钍的溶液一般以0.51%浓度(常用0.8% )预先配制静置，取其上层的澄清溶液应用，配制的薄层表面比较细小且平滑。采集薄层色谱法用硅凝胶，羧甲基里肌肉纳米金属钍溶液按1:33.5的比例，按时订方向搅拌混合，排除气泡，按照硅凝胶g薄层涂布法制备薄层，自然风干，在100下活性30分

5、钟。 不要使活化温度过高以防止碳化。 待冷却后在甩干机内备用。注：国内青岛海洋化工厂销售的薄层色谱法用硅凝胶在吸附剂名称后面加了几个字表示的是硅凝胶g(g是gypsum石膏的简称。 添加了石膏)、硅凝胶h(h表示不添加石膏)、硅凝胶gf254(f254表示石膏和波长254显示绿色荧光的硅酸锌锰)。 硅凝胶gf365 (表示加入石膏和波长365nm的黄色荧光的硫化亚金属铅镉)。2 .特殊薄层的制备根据分离作业的特殊需要，可制作以下特制薄层。(1)酸、碱薄层及ph缓冲薄层为了改变吸附剂的酸盐化学基性而改善分离效果，在吸附剂中加入稀酸溶液(例如0.10.5n草酸溶液)来代替水，作为酸性氧化金属铅薄层

6、使用，硅凝胶为微酸性，在基层时使用稀碱溶液(例如0.10.5n氢氧化纳金属钍溶液)来代替水如果用冰乙酸纳米金属钍、磷酸盐等不同ph值的缓冲液代替水敷层，将形成一定的ph值缓冲薄层。(2)络合薄层硝酸银薄层的制法是在吸附剂中加入525%硝酸银水溶液代替水，做成均匀的糊状，再按照常规方法铺上薄层，薄层遮光风干，在105下活化30分钟后遮光储藏，制成的薄层最好不要变成灰色。 硝酸银用少量的水溶解后用甲醇稀释为10%溶液，还可以把预先制备的硅凝胶g薄层在该溶液中浸渍约1分钟，取出遮光的背阴处，利用上述方法活性化贮藏。(二)、吸附剂活性度测定1 .硅凝胶活性度的测定一般用3种染料的薄层色谱法进行了测定。

7、欧洲药典于1969年记载0.01%二甲基黄(dime thy-yellow.p-dimethylaminoazobenzene )。 将苏丹红(sudaniii )、靛酚蓝(indophenolblue4tapnthoquinone4dimethylaminoaniline )的苯溶液各10l滴加到硅凝胶g或硅凝胶h薄层上，展开苯的二甲基黄斑点为薄层在苏丹红和二甲基黄斑点之间，薄层板活性可以满足要求。2 .氧化铝活性度的测定一般可以用薄层色谱法测定45种偶氮染料。染料试剂的制备：偶氮苯(azobenzene)50mg、对甲氧基偶氮苯(p-methoxyuzobenzene )、苏丹黄(suda

8、n i、benzeneazonaan用常规方法制作不含粘合剂的氧化铝薄层，用铅笔尖或毛细管尖在薄层板的一端23 cm处，在1cm左右的轻点上放置5个可见的小点，分别吸取约0.02ml的染料试剂，以四氯化碳为展开剂，展开时薄层板与容器底部的交叉角在1040之间另外取出含有粘合剂氧化铝薄层片，放入水蒸气饱和容器内，23小时后取出，用上述方法测定活性度。 观察有无变化。表1氧化铝活性度与偶氮染料外值的关系偶氮染料氧化铝活性度水平rf值二级三级四级五级偶氮苯0.590.720.850.95对甲氧基偶氮苯0.160.450.690.89苏丹黄0.020.250.870.98苏云金杆菌0.000.100.

9、350.50对氨基偶氮苯0.000.050.080.19(3)、薄层色谱法的应用薄层色谱法在天然药物化学成分的研究中，主要应用于探索化学成分的初步试验、化学成分的鉴定及柱层分离的条件。 利用薄层色谱法进行的生药化学成分检测，可以根据各成分的性质及众所周知的条件进行化学基。 展开成薄层后，由于可以分离几种杂质，选择性高，可以更准确地进行预试验的结果，不仅可以显色知道成分的种类，还可以初步知道主成分的数量及其极性的大小。实验操作：蒽醌类成分的鉴别三、思考题1 .为什么在铺上玻璃板之前，要完全清洗和干燥库托格拉夫用的玻璃板？2 .为什么在使用铺设的tlc面板之前要用电烤箱干燥？试验二大黄中蒽醌类成分

10、的提取分离与鉴定(1)概要大黄记载于神农本草经等多篇文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。自古以来，大黄就在植物性拉肚子药物中占有重要位置，很早以前就被各国药典所收录，是世界性的药材。 大黄种类繁多，优质大黄为蓼科植物棕榈叶大黄(rheum palmatclm l )、大黄(r. officinale baill )及唐古特大黄(r. tangutium maxim.et regll )的根茎，已为人所知的羟基蒽r1r2名字晶形融点-h-cooh“大黄素甲醚”黄针晶318320-h-ch2oh“芦荟大黄素”(aloe-emodin )细橘红色针晶206208-hch3大黄酚(chyrsopha

11、nol )金色板状结晶196ch3-oh“大黄素甲醚”(emodin )针晶橘红色256257ch3-大黄素甲醚甲醚(physcion )砖红色针晶207大黄中的蒽醌氰苷类因结构不同而酸性强弱不同。 大黄酸与-cooh相连，酸性最强的大黄素甲醚与-oh相连，酸性第二； 芦荟大黄素含有苯甲醇-oh、酸性第三； 大黄素甲醚甲基醚和大黄酚都具有1，8 -二酚的羟基化学基，由于前者是-och3和-ch3连续，后者只有-ch3连续，所以后者的酸性排在第4位。(2)实验目的和要求1 .学习缓冲纸色谱分析法的基本操作技术，可以根据色谱分析法结果，对液液萃取法分离混合物的实验方案进行修订。2 .掌握ph梯度法

12、的原理和操作技术。3 .学习蒽醌类化合物的识别方法。(3)实验方法实验试剂和试剂：大黄中草药粗粉2kg、三氯甲烷500ml 10根、浓硫酸2根、浓盐酸2根、冰冰乙酸、苯、冰乙酸乙酯、碳酸纳金属钍(5% na2co3溶液3000ml )、碳酸水素纳金属钍(5% nahco3溶液3000ml )实验仪器设备：500ml圆底烧瓶10个、冷凝回流管10个、500ml分液漏斗10个、500ml烧杯20个、100-250ml量筒10个、常压漏斗(5-10cm斗径10个)、定性滤纸(10cm )1 .大黄总蒽醌氰苷类的提取大黄粗粉50g加入20%硫酸水溶液100ml，加入三氯甲烷250ml，水浴回流2小时，

13、过滤，测定滤液体积残渣三氯甲烷溶液注意：大黄中的大部分蒽醌类成分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织中。 所以必须用酸水解作用生成氰苷类。 蒽醌氰苷类可溶于三氯甲烷、苯和二乙醚等有机溶剂中，使用苯时要注意苯蒸气的挥发，必须严格防止中毒得到的三氯甲烷液中含有酸水液时，用分液漏斗分离，用蒸馏水洗涤一次除去酸性，影响梯度提取在氯元素仿提取液放置中有沉淀析出，可将其过滤提取，该沉淀大黄素甲醚多，佝偻液用于接下来的分离试验。2 .总蒽醌氰苷类的分离和纯化分离和纯化大黄素甲醚将含有总游离蒽醌的三氯甲烷液250ml转移至1000ml的大分液漏斗中，加入ph8缓冲液(5% nahco3溶液) 125ml进行分

14、配提取(3次、每次125ml、碱性液无色)，静置至完全层，释放三氯甲烷液后，注入碱性水溶液进行定径套分离和纯化大黄素甲醚将称为大黄素甲醚的三氯甲烷液转移到分液漏斗中，用125ml ph 9.9缓冲液(5%naco3溶液)振荡萃取(3次，每次125 ml，直至碱性液无色)，用275ml振荡萃取，完全阶层化后，分离碱性水溶液层，用hcl氧化分离纯化芦荟大黄素将佟下三氯甲烷液转移到分液漏斗后，用5%naco3:5%naoh (9:1 )碱水溶液125ml或0.5%koh125ml振荡提取，在碱水溶液中加入hcl进行氧化，过滤干燥析出的沉淀，用10ml冰乙酸乙酯再结晶3 .鉴定1 .化学检查：一点点采

15、集总蒽醌提取物，用乙醚溶解，进行以下反应a :碱液试验：取1ml试验液，加入20%naoh数滴，观察颜色。b .乙酸镁反应：取1ml试样，加入数滴乙酸镁试剂观察现象。2 .薄层鉴定：吸附剂：硅凝胶-cmc展开剂： c6h6-etoac(3:2或97:9 )。显色剂： (1)阿摩尼亚蒸气熏烟。 (2)5%koh喷雾。(4)实验指导1 .本实验说明要点和注意事项。 ph梯度提取的原理和注意事项。如何设定提取分离方案的普拉姆和方法。分离提取时一定要注意乳化层的分离，避免混入，并且最好用一头地一头地新鲜的chcl3洗涤碱水溶液。缓冲液的制备和碱液的制备是正确的，检查时要细心。2 .实验报告要求记录大黄

16、总蒽醌的提取方法和总蒽醌的分离工艺(包括溶剂使用量)。总蒽醌的显色鉴别结果。记录大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素纯化方法及薄层色谱鉴别结果。实验四黄连中盐酸黄连素的提取纯化鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连、三角叶黄连或云连等干燥根茎。 具有清热燥湿、清心除烦、泻火解毒之功效。 黄连的有效成分主要是生物碱，被分离为黄连素(berberine )，又名黄连、马丁、黄连盐化学基、甲基黄连盐化学基、药根盐化学基、表木烯盐化学基等，其中，黄连素含量最高，可达10%左右，以盐酸盐的形式存在于黄连上的黄连素盐对葡萄球菌和链球菌有明显的抑制作用，临床用于治疗细菌性痢疾和胃肠炎等，无耐药性和副作用。一、实验目的：1 .掌握盐酸黄连素的提取方法，熟悉盐析法、结晶法。2 .掌握黄连素的结构特点、特殊的理化性质和薄层鉴别方法。3 .通过实验熟悉和